Un ácido nucléico que codifica un ligando de CD86 felino que tiene la SEC ID Nº 6 o un ligando de CD86 soluble que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 6 pero que carece de la región transmembrana o hidrófoba

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Actualmente no existen vacunas efectivas para la prevención de la

enfermedad de inmunodeficiencia felina y de la enfermedad de peritonitis infecciosa

felina en gatos. Las vacunas normales contra el virus de la leucemia felina están

disponibles, pero su nivel de eficacia permanece en duda y, en algunos casos, puede

causar la enfermedad. Por lo tanto, existe una necesidad en la técnica de agentes y

composiciones que proporcionan protección contra ésta y otras enfermedades, para

las cuales todavía no existe una vacuna, o que mejoren la eficacia de las vacunas

existentes y utilizadas habitualmente. Además, la vacunación de los cachorros de gato

es difícil debido a la incapacidad de superar los anticuerpos maternos en los cachorros

de gatos. También se necesitan agentes seguros y efectivos para ayudar a superar

estas barreras.

Se considera que la estimulación de la activación y la proliferación de las

células T en respuesta a la enfermedad en el huésped dependen de dos interacciones:

el reconocimiento del receptor de la célula T (TCR) con péptidos inmunogénicos en el

contexto de las moléculas de MCH clase I, y la interacción secundaria de ligandos

accesorios, tales como CD80 y CD86, con sus correceptores, CD-28 y/o CTLA-4 sobre

la célula T. El éxito de la interacción de estas dos vías conduce a la activación y

proliferación de las células T tanto CD4+ como CD8+, y la producción incrementada de

citoquinas de regulación inmunológica de tipo Th1 y Th2. En ausencia de la co

estimulación adecuada de las células T, se puede desarrollar un estado anérgico, de

modo que las células T no proliferan ni segregan citoquinas. Con los años, han surgido

dos moléculas como reguladores clave de las respuestas de las células T, CD28 y sus

ligandos, CD80 y CD86. El CD28 es el receptor co-estimulante cebador de células T y

tras la interacción con CD80 y CD86, aumenta la proliferación de células T y la síntesis

de citoquinas, lo que evita la muerte de las células T. El CTLA-4 (también llamado

CD152), un homólogo de CD-28, también juega un papel importante en la

coestimulación. Aunque no se comprende completamente, parece inhibir las

respuestas co-estimulantes de la célula–T. La interacción e interjuego entre CD28,

CTLA-4 y sus ligandos CD80 y CD86 en procesos co-estimulantes, son claves para la

inducción general y la supresión de las respuestas inmunológicas a la enfermedad en

el huésped. Manipulando la expresión de estas 4 moléculas coestimulantes, puede

ser posible regular respuestas de la célula–T a través de aumento, supresión o

redirección, para producir una respuesta inmunológica deseada frente a un patógeno en particular o condición de enfermedad. En particular, pueden ser útiles para la vacunación contra enfermedades infecciosas, tratamiento de enfermedades infecciosas y tratamiento de afecciones neoplásicas, degenerativas, autoinmunitarias y de inmunodeficiencia .

Los linfocitos–T del sistema inmunológico de mamíferos muestran funciones tanto de control como efectoras. Los progenitores de las células T surgen en la médula ósea a partir de células madre y emigran al timo. En el timo tiene lugar la maduración y selección para producir una población naive de células inmunitarias, que tiene la capacidad de reconocer el antígeno en el contexto de la presentación del complejo mayor de histocompatividad (MHC), aunque no es autorreactiva. Después de la maduración tímica, cada célula–T posee un receptor de célula–T clonalmente distribuido (TCR), que determina su especificidad antigénica. Además, las células–T CD4+ y CD8+, los dos principales subgrupos encontrados en la mayoría de los mamíferos adultos, poseen un TCR compuesto de subunidades α y β (Allison y Lanier, 1987).

La organización proteica y génica de la proteína TCR, es similar a la observada con moléculas de inmunoglobina (Ig) y comparte muchas propiedades similares a la Ig unida a la membrana en la células B (Allison y Lanier, 1987). Al igual que la molécula de Ig, el TCR debe reconocer de manera potencial un amplio número de potenciales secuencias de antígeno. Por esta razón, la organización y reordenación del gen del TCR es similar en complejidad a la observada en las células B (Davis y Bjorkman, 1988). Al igual que con las moléculas de anticuerpo producidas por las células B, la generación de la diversidad idiotípica en las células T comprende múltiples copias de genes variables (V) en la línea germinal, reordenaciones aleatorias de las subunidades α y β y la variabilidad generada por los acontecimientos de inserción y funcionales (Davis y Bjorkman, 1988). Sin embargo, a diferencia de las células-B, las células–T no parecen generar diversidad a través de mutación somática, ya que el repertorio potencial del TCR parece ser tan grande como el de la molécula Ig (Lechler y col , 1990).

El TCR, aunque es responsable del reconocimiento del antígeno, no tiene capacidades de envío de señal (Allison y Lanier, 1987). Los cambios conformacionales en el TCR, después de la unión al antígeno presentado en el contexto del MHC sobre la célula presentadora de antígeno (CPA), da como resultado un envío de señal a través de un complejo asociado de forma no covalente de las moléculas de superficie, incluyendo el CD3, y las cadenas (Clevers y asociados ,1988). La unión al TCR da como resultado la fosforilación del complejo CD3, que conduce de manera indirecta a un influjo Ca+ hacia el interior de la célula, lo que inicia la producción de IL-2 e IL-2R (Weiss y Littman,1994). Esta cascada se considera un acontecimiento inicial en la activación de la célula T.

El TCR reconoce el antígeno únicamente cuando se presenta en asociación con el MHC. Existen dos subpoblaciones de proteínas del MCH asociadas con la presentación del antígeno a la célula –T. El MHC de clase I, se encuentra en casi todas las células nucleadas dentro del cuerpo, y funciona para expresar en la superficie los péptidos producidos de forma endógena (Matasumura y asociados, 1992). El péptido expresado en el contexto del MHC clase I es reconocido por las células T que expresan CD8 en asociación con el TCR (Littman, 1987). Las células–T CD8+ funcionan como vigilantes inmunitarios para eliminar las células infectadas por virus y las neoplasias malignas. El reconocimiento de moléculas no independientes a través de la célula –T CD8+ (péptidos o péptidos independientes alterados que pueden indicar una neoplasia maligna), da como resultado la destrucción de la célula mediada por los linfocitos –T citotóxicos (Berke, 1994).

Las moléculas del MHC de clase II, el segundo subgrupo del complejo mayor de histocompatibilidad, normalmente se encuentran únicamente en las células presentadoras de antígeno profesionales, incluidas células–B, macrófagos/monocitos y células dendríticas, aunque es posible la inducción en algunas otras poblaciones celulares en respuesta a estímulos específicos (Germain, 1993). La molécula del MHC de clase II, es responsable de la presentación del antígeno exógeno para la célula–T CD4+. El antígeno sufre fagocitosis, endocitosis o une a la Ig de membrana y absorción por acción de las células presentadoras del antígeno es procesado endógenamente y se une al MHC de clase II (Unanue, 1987). Posteriormente, la molécula se expresa en la superficie y queda disponible para el reconocimiento por parte de las células–T αβ que expresan CD4 (Littman, 1987). El reconocimiento antigénico por las células–T CD4+, da como resultado la producción de citoquinas y factores de crecimiento necesarios para la iniciación y promulgación de muchas facetas de una respuesta inmunoactiva (Mosmann y Coffman, 1987).

El CD4 y el CD8, diferencian los subgrupos de célula–T αβ y definen las propiedades funcionales...

1. Un ácido nucléico que codifica un ligando de CD86 felino que tiene la SEC ID Nº 6 o un ligando de CD86 soluble que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 6 pero que carece de la región transmembrana o hidrófoba.

2. La molécula de ácido nucléico de la eivindicación 1, en la que la molécula de ácido nucleico tiene la secuencia de ácido nucleico de la SEC ID Nº 5.

3. La molécula de ácido nucléico de las reivindicaciones 1 ó 3, en la que la molécula de ácido nucléico es ADN o ARN.

4. La molécula de ácido nucléico de la reivindicación 3, en la que el ADN es ADNc

o ADN genómico.

5. Un oligonucleótido de por lo menos 12 nucleótidos complementarios a una secuencia presente únicamente en el ácido nucléico de las reivindicaciones 1 a 4.

6. El oligonucleótido de la reivindicación 5, que tiene una longitud de por lo menos 15 ó 16 nucleótidos.

7. El oligonucleótido de las reivindicaciones 5 ó 6, en el que el oligonucleótido está marcado de forma detectable.

8. El oligonucleótido de la Reivindicación 7, en el que el marcador detectable comprende un radioisótopo, un fluoróforo o biotina.

9. El oligonucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en el que el oligonucleótido se metila de forma selectiva.

10. Un vector que comprende la molécula de ácido nucléico de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

11. El vector de la reivindicación 10, que es el vector plasmídico denominado B72#19-2/011298 (nº de registro en la ATCC N°209821).

12. El vector de las reivindicaciones 10 ó 11, que comprende un promotor unido de manera operable a la molécula de ácido nucléico.

13. Una célula huésped que comprende un vector de cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12.

14. La célula huésped de la reivindicación 13, en el que la célula huésped es una célula eucariótica o procariótica.

15. La célula huésped de la reivindicación 14, en la que dicha célula huésped se selecciona del grupo constituido por: E. Coli, levadura, células COS, células PC12, células CHO y células GH4C1.

16. El polipéptido ligando de CD86 felino o polipéptido ligando soluble de CD86 codificado por la molécula de ácido nucléico de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

17. Un procedimiento de producción del polipéptido de la reivindicación 16, que comprende el cultivo de una célula huésped que expresa el polipéptido y la recuperación del polipéptido producido de esta manera.

18. Una vacuna que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido de la Reivindicación 16 y un vehículo adecuado.

19. La vacuna de la reivindicación 18, en la que la cantidad efectiva es una cantidad desde aproximadamente 0,01 mg hasta aproximadamente 100 mg por dosis.

20. La vacuna de la reivindicación 18, en la que la cantidad efectiva es una cantidad desde aproximadamente 0,25 mg/kg de peso del cuerpo de un felino/día hasta aproximadamente 25 mg/kb por peso de un felino/día.

21. Laa vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, que además comprende un inmunogen derivado de un patógeno.

22. La vacuna de la reivindicación 21, en la que el patógeno es un patógeno felino, un virus de la rabia, clamidia, Toxoplasmosis gondii, Dirofilaria immitis, una pulga o un patógeno bacteriano.

23. La vacuna de la reivindicación 22, en la que el patógeno felino es el virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), el virus de la leucemia felina (FeLV), el virus de la peritonitis infecciosa felina (FIP), el virus de la panleucopenia felina, el calicivirus felino, el reovirus felino del tipo 3, el rotavirus felino, el coronavirus felino, el virus sincitial felino, el virus de sarcoma felino, el virus del herpes felino, el virus de la enfermedad Borna felina, o un parásito felino.

24. Uso de una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 18 a 23 para la preparación de una composición farmacéutica para inducir inmunidad en un felino.

25. Uso de una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 18 a 23 para la preparación de una composición farmacéutica para potenciar una respuesta inmunitaria en un felino.

26. El uso de las reivindicaciones 24 ó 25, en el que la vacuna se administra por vía subcutánea, intramuscular, sistémica, tópica u oral.

27. Uso de una cantidad efectiva de un polipéptido de la reivindicación 18 o un polipéptido resultante del procedimiento de la reivindicación 19 para la

preparación de una composición farmacéutica para suprimir una respuesta inmunitaria en un felino.

28. El uso de la reivindicación 27, en el que la cantidad es de aproximadamente

0,25 mg/kg de peso corporal/día hasta aproximadamente 25 mg//kg de peso 5 corporal/día.

29. El uso de la reivindicación 27 ó 28, en el que e el felino está sufriendo una enfermedad autoinmunitaria o es el receptor de un trasplante de tejido u órgano.

30. Uso de un ácido nucleico que hibrida con un tránscrito de ARNm de un ligando

10 de CD86 felino codificado por el ácido nucleico de las reivindicaciones 1-4 y que inhibe la traducción de dicho ARNm para la preparación de una composición farmacéutica para suprimir una respuesta inmunitaria en un felino.