Un anticuerpo anti-CD4 humanizado que no disminuye el número de células que comprende una cadena ligera y una cadena pesada,

teniendo la cadena ligera las tres CDRs de la cadena ligera KASQSVDYDGDSYMN, VASNLES y QQSLQDPPT, y teniendo la cadena pesada las tres CDRs de la cadena pesada AYVIS, EIYPGSGSSYYNEKFKG y SGDGSRFVY, teniendo el anticuerpo una porción Fc no glicosilada

Anticuerpo anti-CD4 TRX1 que no disminuye el número de células y sus usos.

La presente invención es aplicable a la inhibición, la prevención o la mejora de una respuesta inmune frente a un(os) antígeno(s). Tal inhibición, prevención o mejora de una respuesta inmune frente a un(os) antígeno(s) incluye inducir una tolerancia hacia el(los) antígeno(s). Esta invención también se refiere a la inducción de la tolerancia y/o a la prevención o a la inhibición de la activación y la proliferación de los linfocitos T y, más particularmente, a la inducción de la tolerancia en un primate.

Antecedentes de la invención

La tolerancia hacia un antígeno o un tejido extraños, o hacia un antígeno o un tejido propios es un estado en el que un sistema inmunitario maduro, por lo demás normal, es incapaz de responder agresivamente de forma específica contra ese antígeno/tejido, el cual es tratado, por lo tanto, como un tejido/componente corporal normal (no enfermo), sin embargo, al mismo tiempo, puede responder agresivamente contra antígenos/tejidos extraños o enfermos, hacia los que no se ha vuelto específicamente tolerante por el procedimiento natural de autotolerancia o creando un entorno tolerante-permisivo in vivo. D2 (Isaacs y col., Clin. Exp. Inmmunology 1997; 110; págs. 158-166) describe un anticuerpo anti-CD4 humanizado que no disminuye el número de células, pero que muestra una toxicidad grave de la dosis inicial después de la administración.

Resumen de la invención

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo anti-CD4 humanizado que no disminuye el número de células, que comprende una cadena ligera y una cadena pesada, teniendo la cadena ligera las tres CDRs de la cadena ligera KASQSVDYDGDSYMN, VASNLES y QQSLQDPPT y teniendo la cadena pesada las tres CDRs de la cadena pesada AYVIS, EIYPGSGSSYYNEKFKG y SGDGSRFVY, teniendo el anticuerpo una porción Fc no glicosilada.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención se proporcionan usos para dichos anticuerpos.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un procedimiento para inducir tolerancia en un primate por medio del uso de dichos anticuerpos mediante el uso de un régimen de dosificación que induce dicha tolerancia en un primate.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de un ejemplo del anticuerpo TRX1, así como las regiones CDRs y de armazón de las cadenas pesada y ligera.

La Figura 2 muestra las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de una realización del anticuerpo TRX1 presente, así como las regiones CDRs y de armazón de las cadenas pesada y ligera.

La Figura 3 muestra las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de otro ejemplo del anticuerpo TRX1, así como las regiones CDRs y de armazón de las cadenas pesada y ligera.

La Figura 4 muestra las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de una segunda realización del anticuerpo TRX1 presente, así como las regiones CDRs y de armazón de las cadenas pesada y ligera.

La Figura 5 muestra la respuesta inmune frente a antivenina en los primeros 68 días (es decir, la fase de tolerancia) de un estudio de grupos de mandriles a los que se suministró antivenina sola o junto con el anticuerpo TRX1.

La Figura 6 muestra la respuesta inmune frente a antivenina, subsiguiente a un estímulo con antivenina y con glóbulos rojos de oveja, en grupos de mandriles a los que se había suministrado antivenina sola o junto con el anticuerpo TRX1, 68 días antes del estímulo.

La Figura 7 muestra la respuesta inmune frente a antivenina, posterior a cada uno de los tres estímulos con antivenina, en grupos de mandriles a los que se había suministrado antivenina sola o junto con el anticuerpo TRX1, 68 días antes del primer estímulo.

La Figura 8 es un diagrama que representa la respuesta inmune frente a glóbulos rojos de oveja, después de la inducción de la tolerancia con TRX1 hacia la antivenina.

Descripción detallada de la invención

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento para inducir la tolerancia en un primate hacia un(os) antígeno(s) mediante el uso de un anticuerpo de la presente invención, tal y como se describe más adelante. El anticuerpo se administra en una cantidad y de acuerdo con un régimen de dosificación que es eficaz para inducir tolerancia en un primate. El anticuerpo es un anticuerpo que cuando está presente en una reacción mixta de linfocitos (MLR) primaria comparada con una reacción mixta de linfocitos en ausencia del anticuerpo, reduce la cantidad de células que son positivas para CD4 y CD25 (células CD4⁺ CD25⁺), lo que es el resultado de la reacción mixta de linfocitos. En una realización preferida, el anticuerpo es un anticuerpo que reduce la cantidad de tales células CD4⁺ CD25⁺ en al menos el 40% y preferiblemente en al menos el 60% y aún más preferiblemente en al menos el 70%.

De aquí en adelante, bajo la referencia "compuesto" se entiende que son los anticuerpos de la presente invención.

En una realización preferida, tal compuesto produce una población de células que inhibe una reacción mixta de linfocitos (MLR) primaria (realizada con células que no se han expuesto previamente al compuesto) reduciendo el número de células CD4⁺ CD25⁺ producidas en la MLR primaria. En una realización preferida, hay por lo menos una reducción del 10% y preferiblemente por lo menos una reducción del 20%. Los protocolos para realizar las reacciones mixtas de linfocitos descritas anteriormente, se describen en el Ejemplo 5.

Además, en una realización preferida, el compuesto es un compuesto que reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas en una reacción mixta de linfocitos primaria y genera una población de células en tal reacción mixta de linfocitos primaria que inhibe una reacción mixta de linfocitos secundaria. En una realización preferida, las células se generan en una reacción mixta de linfocitos primaria que se realiza en presencia del compuesto, cuyas células, cuando se añaden a la reacción mixta de linfocitos secundaria, reducen preferentemente el número de células CD4⁺ CD25⁺ generadas en tal reacción mixta de linfocitos secundaria, en comparación con una reacción mixta de linfocitos secundaria en ausencia de las células añadidas en al menos el 20%, más preferiblemente en al menos el 35%, y más preferiblemente en al menos el 50%.

Una inhibición de una MLR primaria o secundaria de tal población de células se comprueba por una reducción de la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺, producidas en la MLR, comparada con la MLR realizada en ausencia de tal población de células.

Por tanto, de acuerdo con un aspecto de la presente invención, un primate se trata con un compuesto que tiene las características tal y como se han descrito anteriormente (reducción de la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas en una MLR primaria in vitro, generando tal MLR primaria una población de células que reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas in vitro, en una MLR primaria y/o secundaria y que realiza preferentemente tal reducción en ambas MLRs, primaria y secundaria).

En una realización, las células generadas en la MLR primaria en presencia del compuesto, son células que cuando se añaden a una MLR secundaria (comparada con una MLR secundaria sin las células añadidas) reducen y/o eliminan la generación de una o varias citocinas; en particular, una o varias entre IL-2, IL-4 e IL-12 en la MLR secundaria. Generalmente tal reducción de por lo menos una entre IL-2, IL-4 e IL-12 es de al menos el 40%, preferiblemente de al menos el 60%.

Por tanto, un compuesto preferido es uno que genera a células en una MLR primaria que en una MLR secundaria, comparada con el testigo, reduce la producción de células CD4⁺ CD25⁺, o de una o varias o todas (preferiblemente todas) entre IL-2, IL-4 e IL-12 y reduce preferiblemente la producción a la vez de tales células y de tales citocinas.

En esta memoria se describe una detección o una prueba en la que los linfocitos T se exponen in vitro a un(os) material(es)... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-CD4 humanizado que no disminuye el número de células que comprende una cadena ligera y una cadena pesada, teniendo la cadena ligera las tres CDRs de la cadena ligera KASQSVDYDGDSYMN, VASNLES y QQSLQDPPT, y teniendo la cadena pesada las tres CDRs de la cadena pesada AYVIS, EIYPGSGSSYYNEKFKG y SGDGSRFVY, teniendo el anticuerpo una porción Fc no glicosilada.

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene una región constante de la cadena pesada gamma 1 humana.

3. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es una IgG1 humana.

4. Un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende adicionalmente las regiones de armazón de las cadenas pesada y ligera de las Figuras 2 ó 4.

5. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende adicionalmente la región constante de la cadena pesada de las Figuras 2 ó 4.

6. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado idéntico al anticuerpo humanizado mostrado en la Figura 2.

7. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado idéntico al anticuerpo humanizado mostrado en la Figura 4.

8. Un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho anticuerpo incluye CDRs que están exentas de un sitio de glicosilación.

9. Uso de un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la preparación de un medicamento para la inducción de la tolerancia hacia al menos un antígeno en un primate, en donde dicho anticuerpo reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas en una reacción mixta de linfocitos primaria in vitro y genera en dicha reacción mixta de linfocitos primaria, una población celular que reduce al menos uno de (x) la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas in vitro en al menos una reacción mixta de linfocitos primaria y secundaria, e (y) la cantidad de al menos una de IL-2, IL-4 e IL-12 en una reacción mixta de linfocitos secundaria.

10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el compuesto reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ en una reacción mixta de linfocitos primaria en al menos el 40%.

11. Uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el compuesto reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ en una reacción mixta de linfocitos primaria en al menos el 60%.

12. Uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicha población celular producida en la reacción mixta de linfocitos primaria reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas en una reacción mixta de linfocitos secundaria.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde las células CD4⁺ CD25⁺ producidas en la reacción mixta de linfocitos secundaria se reducen en al menos el 20%.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde las células CD4⁺ CD25⁺ producidas en la reacción mixta de linfocitos secundaria se reducen en al menos el 35%.

15. Uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde en la reacción mixta de linfocitos secundaria la generación de al menos una de IL-2, IL-4 e IL-12 se reduce en al menos el 40%.

16. Uso de un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un medicamento para la inducción de la tolerancia hacia al menos un antígeno en un primate, mediante la administración del anticuerpo, o de un fragmento del mismo, al primate en una cantidad y durante un tiempo eficaces para inducir la tolerancia hacia al menos un antígeno, estando presente dicho anticuerpo o fragmento en dicho primate cuando dicho antígeno está presente en dicho primate y administrándose en una dosis inicial de al menos 40 mg, induciendo dicho tratamiento una tolerancia hacia dicho, al menos uno, antígeno, siendo el anticuerpo un anticuerpo que en una reacción mixta de linfocitos primaria in vitro, reduce la cantidad de células CD4⁺ CD25⁺ producidas en dicha reacción mixta de linfocitos.

17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la dosis inicial es de al menos 70 mg.

18. Uso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde la dosis inicial es de al menos 400 mg.

19. Uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde la dosis inicial es de al menos 500 mg.

20. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde dicho anticuerpo se administra en al menos una dosis complementaria y dicha dosis complementaria es de al menos 40 mg.

21. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde dicho, al menos uno, antígeno es un antígeno extraño.

22. Una composición que comprende: