ANEXINA PARA AVERIGUAR EL RIESGO DE UN CÁNCER.

Método para diagnosticar un cáncer de próstata con el fin de discriminar entre un tejido de próstata canceroso y otro no canceroso,

que comprende las etapas separadas de - determinar la abundancia de por lo menos una proteína anexina A3 intracelular y/o - determinar la abundancia de por lo menos una proteína anexina A3 extracelular, usando unas muestras de orina o unas fracciones de las mismas en las que se observan unos más bajos niveles de una anexina A3 en el estado canceroso, en el que las muestras de orina o las fracciones de las mismas se obtienen a partir de una orina exprimida

El presente invento se refiere al diagnóstico de un cáncer de próstata, particularmente de los tractos urogenital y/o intestinal.

El cáncer es una de las causas principales de muerte de seres humanos en la civilización occidental y con frecuencia está vinculado con dificultades en lo que respecta a su diagnóstico.

Por ejemplo, el cáncer de próstata es una de las causas principales de muerte por cáncer en seres humanos, pero es una enfermedad heterogénea que es difícil de diagnosticar. Es casi imposible predecir el curso que adoptará un tumor individual. El estado actual de los marcadores de cánceres de próstata para diagnóstico está basado esencialmente en diferentes isoformas de un antígeno específico de la próstata (PSA, acrónimo de prostate specific antigen) y en su totalidad no es satisfactorio, al proporcionar falsos resultados negativos y falsos resultados positivos. Recientemente, se han sugerido diversos marcadores moleculares alternativos, procedentes de fluidos corporales o de un tejido de próstata. Se han identificado por lo menos tres diferentes subclases de cáncer de próstata, que parecen relacionados con el grado del tumor y con la incidencia de recurrencias y metástasis. La sintasa de ácidos grasos por si sola define diferentes signaturas moleculares para un cáncer de próstata. Además, está remanente una urgente necesidad de parámetros terapéuticos y diagnósticos más elaborados y confiables para caracterizar a los pacientes de acuerdo con su riesgo de progresión, con el fin de desarrollar nuevas estrategias de terapias multimodales apropiadas para tener un control mejorado de un cáncer individual.

El documento de solicitud de patente internacional WO 2004/079368 A se refiere a unos específicos enfoques proteómicos para identificar a unas proteínas que son expresadas en células de cáncer pero no en tejidos normales. Entre las proteínas dianas se menciona a una anexina A4.

El documento de solicitud de patente de los EE.UU. US 2004/096916 A1 se refiere a unos marcadores de tumores que se pueden usar para escrutar, diagnosticar, pronosticar e identificar subtipos de un carcinoma de células renales. Entre las proteínas que se han de usar como marcadores de tumores se mencionan las anexinas II, IV y V.

El documento US 2004/033502 A1 describe, entre otros, unos métodos para diagnosticar un cáncer esofágico en pacientes, que comprende la etapa de detectar el nivel de expresión en una muestra de tejido de dos o más genes específicos; se menciona a una anexina A10 como un posible gen diana.

El documento US 2003/232399 A1 describe métodos y composiciones para identificar y utilizar marcadores de tumores presentes en fluidos corporales, que se pueden usar más tempranamente en el proceso de una enfermedad y que no dependen de ningún fármaco contra tumores por sí mismo. Las anexinas I y II son mencionadas en una lista de marcadores para su inclusión en una lista de antígenos marcadores tumorales.

El documento US 2003/175736 A1 se refiere a composiciones y métodos para diagnósticos de cánceres, inclusive marcadores de cánceres. Entre otros, se describe un método para caracterizar a un tejido de próstata en un individuo, que comprende la detección de un marcador tal como una anexina A1, una anexina A4 y una anexina A11.

El documento US 2003/165954 A1 se refiere a perfiles y marcadores genéticos de cánceres y proporciona sistemas y métodos para escrutar unos fármacos que son efectivos para específicos pacientes y tipos de cánceres. La generación de un perfil de sensibilidad a los fármacos puede comprender la detección de un nivel de expresión en un gen de sensibilidad a los fármacos, p.ej. el ANXA4.

El documento US 2003/152923 A1 describe un sistema para diagnosticar formas agresivas de un melanoma maligno, que se basan en la expresión de ciertos genes de marcadores, entre los cuales se menciona a una anexina A2, dentro de una muestra de tumor.

El documento US 2002/168696 A1 concierne a unos métodos de escrutinio para la evaluación de diagnóstico y pronóstico de un cáncer. Por ejemplo, se proporcionan métodos para detectar una sobreproducción de proteínas anexinas I y II.

Lee y colaboradores (Journal of Chromatography B, volumen 815, páginas 203-213, 2005) se refieren a la revelación de enfermedades urológicas por técnicas proteómicas. Se menciona que en muestras de tejidos de cáncer renal, una anexina I y una anexina IV son reguladas ascendentemente.

Alaiya y colaboradores (Journal of Chromatography B, volumen 787, páginas 207-222, 2003) se refieren al perfilamiento de la expresión de proteínas en cánceres humanos de pulmón, mama, vejiga, renales, colorrectales y ováricos. Se mencionan diversas proteínas marcadoras de tumores, pero no anexinas.

Vaarala y colaboradores (Laboratory Investigation, volumen 80, páginas 1259-1269, 2000) se refieren a unos genes expresados diferencialmente dentro de linajes de células de cáncer de próstata LNCaP que reflejan cambios producidos durante la progresión de un cáncer de próstata. Entre los genes que se confirmó que eran expresados diferencialmente se encontraba una anexina I.

Ninguno de estos documentos menciona a una anexina A3.

El documento US 2003/108963 A1 se refiere a una diversidad de marcadores de cánceres, entre ellos a una anexina A3. En particular, fueron perfiladas unas muestras de ARN que se derivan de muestras de tejidos de próstata y tejidos que no son de próstata; y las que presentaban un aumento en la expresión en especímenes de tumores de próstata se seleccionaron para la secuenciación ulterior. Sin embargo, no se proporcionan datos concernientes a una proteína anexina A3.

El invento, en su forma más amplia, es definido en la reivindicación 1.

Un método para diagnosticar un cáncer de próstata para efectuar una discriminación entre un tejido de próstata canceroso y otro no canceroso, que comprende las etapas separadas de

- determinar la abundancia de por lo menos una proteína anexina A3 intracelular y/o

- determinar la abundancia de por lo menos una proteína anexina A3 extracelular, usando muestras de orina o fracciones de las mismas, en las que se observan en el estado canceroso unos niveles más bajos de una anexina A3, y en donde las muestras de orina o las fracciones de las mismas se obtienen a partir de una orina exprimida.

Después de la determinación de las abundancias intra- y extracelulares de por lo menos una proteína anexina se pueden determinar las relaciones de la abundancia extracelular por encima de la abundancia intracelular o al revés. Preferiblemente, se determinan las relaciones de la abundancia extracelular por encima de la abundancia intracelular. Las relaciones obtenidas son unos ventajosos parámetros de diagnóstico para un cáncer y/o para la discriminación entre un tejido canceroso y otro no canceroso.

De acuerdo con el presente invento, se entiende el término “extracelular” como el espacio extracelular que incluye a la superficie exterior de membranas plasmáticas de células.

De acuerdo con el presente invento, el término “tejido no canceroso” abarca un tejido sano y un tejido patógeno, en particular una hiperplasia prostática benigna, una prostatitis crónica, la enfermedad de Crohn, una colitis ulcerosa, un tejido inflamable y las fibrosis, en particular las fibrosis secundarias.

De acuerdo con el presente invento, se entiende el término “abundancia” como el nivel y la concentración intracelular y/o extracelular respectivamente de una proteína.

De acuerdo con el presente invento, los términos de “proteína anexina” y de “proteína” en general comprenden isoformas, mutantes, versiones truncadas y formas de las mismas que han sido modificadas después de la traducción. Las formas modificadas después de la traducción pueden incluir en particular unas formas proteínicas obtenibles mediante un tratamiento proteolítico.

En el caso de una forma preferida de realización, se determina la abundancia de una proteína anexina A3 conjuntamente con la abundancia de por lo menos una proteína anexina adicional. Con respecto a dicha proteína adicional, se hace referencia a la descripción que sigue.

Aquí se describe también que la abundancia de por lo menos una proteína anexina es determinada conjuntamente con la abundancia de una pequeña molécula o de un pequeño marcador... [Seguir leyendo]

1. Método para diagnosticar un cáncer de próstata con el fin de discriminar entre un tejido de próstata canceroso y otro no canceroso, que comprende las etapas separadas de

- determinar la abundancia de por lo menos una proteína anexina A3 intracelular y/o

- determinar la abundancia de por lo menos una proteína anexina A3 extracelular, usando unas muestras de orina o unas fracciones de las mismas en las que se observan unos más bajos niveles de una anexina A3 en el estado canceroso, en el que las muestras de orina o las fracciones de las mismas se obtienen a partir de una orina exprimida.

2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la abundancia de una proteína anexina A3 es determinada conjuntamente con la abundancia de por lo menos una anexina.

3. Método de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque la abundancia de una proteína anexina A3 es determinada conjuntamente con la abundancia de por lo menos una proteína adicional tomada del grupo que consiste en el amiloide P de suero, la isopeptidasa T, la proteína de fijación de ácidos grasos de tipo muscular, la galectina 1, la proteína de choque térmico 90, una BiP, la proteína disulfuro isomerasa, la proteína de fijación de ácidos grasos de tipo epidérmico, la enoíl coenzima A hidratasa y la nucleofosmina.

4. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 3, caracterizado porque la abundancia de una proteína anexina A3 es determinada conjuntamente con la abundancia de por lo menos una proteína adicional tomada del grupo que consiste en la familia 14-3-3, un proteasoma, la subunidad 2 de activador, la familia de las citoqueratinas, la proteína KNP-I alfa y la proteína KNP-I beta.

5. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 4, caracterizado porque la abundancia de una proteína anexina A3 es determinada conjuntamente con la abundancia de por lo menos un marcador en sangre

o suero.

6. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 5, caracterizado porque la abundancia de una proteína anexina A3 es determinada conjuntamente con la abundancia de por lo menos un marcador de células epiteliales.

7. Método de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque una anexina A8 se usa como otra proteína anexina.

8. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 7, caracterizado porque las muestras de orina o fracciones de las mismas son sometidas a un proceso de separación antes de determinar la abundancia de una anexina A3 o de por lo menos una proteína anexina para proporcionar sedimentos celulares y sobrenadantes.

9. Método de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado porque los sedimentos se usan para determinar la abundancia intracelular de una anexina A3 o de por lo menos una proteína anexina.

10. Método de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado porque los sobrenadantes se usan para determinar la abundancia extracelular de una anexina A3 o de por lo menos una proteína anexina.

11. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 10, caracterizado porque se añade por lo menos un agente quelador de cationes, particularmente EDTA y/o EGTA, antes de determinar la abundancia de una anexina A3 o de por lo menos una proteína anexina.

12. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 11, caracterizado porque la abundancia de la proteína es determinada mediante métodos inmunohistoquímicos.

13. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 12, caracterizado porque las muestras de orina exprimida o las fracciones de las mismas son recuperadas subsiguientemente a un masaje de próstata.

14. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 13, caracterizado porque las muestras de orina o las fracciones de la misma son purificadas.

15. Método de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 14, caracterizado porque se usan muestras o fracciones de las mismas de una orina obtenida por la mañana.

16. Métodos de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 a 12, en los que los niveles de anexinas se miden adicionalmente en las heces o en las células epiteliales del tracto intestinal.

17. Métodos de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 12 y 16, en los que los niveles de anexinas se usan para diagnosticar adicionalmente cánceres epiteliales del tracto gastrointestinal en cualquier fracción o preparación de heces o en cualquier superficie epitelial potencialmente productora de exosomas.

18. Métodos de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 hasta 12 y 16 hasta 17, en los que los niveles de anexinas se usan para diagnosticar adicionalmente un cáncer colorrectal.

19. Métodos de acuerdo con una de las precedentes reivindicaciones 1 a 18, en los que los métodos se combinan con la determinación de neutrófilos para discriminar unas condiciones inflamatorias con respecto de unos cánceres.

20. Método de acuerdo con la reivindicación 19, en el que la condición inflamatoria es la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerosa.