Compuesto o-ATP para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de aterosclerosis, linfoma y leucemia

Uso de o-ATP para el tratamiento de enfermedades que implican angiogénesis.

La presente invención se refiere en general a sustancias que actúan sobre la angiogénesis. Más precisamente, la invención se refiere al uso de o-ATP para el tratamiento de patologías que requieren la inhibición de la angiogénesis.

Antecedentes de la invención

Angiogénesis

La proliferación de células endoteliales es responsable del proceso de formación de vasos sanguíneos nuevos, conocido como angiogénesis. Los vasos recién formados proporcionan nutrientes y oxígeno a las células del tejido en el que se produce la angiogénesis. El proceso angiogénico es útil, por ejemplo, para la reparación de heridas, puesto que los tejidos en regeneración necesitan un suministro apropiado de sangre. En cambio, la angiogénesis es perjudicial en el caso de enfermedades tumorales, porque el suministro de sangre facilita la proliferación de células tumorales. Además, la neoangiogénesis es perjudicial cuando se desarrolla en las placas ateroscleróticas; de hecho en estas estructuras la generación de vasos nuevos debido a la producción de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular - vascular endothelial growth factor) por las células endoteliales y otras, como monocitos/macrófagos, soporta la conservación de las mismas placas. Por tanto, la inhibición de la proliferación de células endoteliales, o actividad antiangiogénica, es de notable interés en los tratamientos antitumorales y antiateroscleróticos.

Actividad biológica de o-ATP

La forma oxidada de ATP, conocida como o-ATP, se caracteriza por la presencia de dos grupos aldehído en las posiciones 2' y 3' del anillo ribofuranosilo. Puede prepararse mediante el tratamiento de ATP con una sal de ácido peryódico, tal como se da a conocer por P.N. Lowe et al., Preparation and chemical properties of periodate-oxidized adenosine triphosphate and some related compounds, Biochemical Society Transactions, vol. 7:1131-1133, 1979.

El o-ATP se usa comúnmente como un marcador de afinidad para sitios enzimáticos de nucleótidos (Easterbrook-Smith, B., Wallace, J.C. & Keech, D.B. (1976) Eur. J. Biochem. 62, 125-130), gracias a su capacidad de reaccionar con residuos de lisina no protonados que están presentes en los sitios de nucleótidos, formando bases de Schiff o derivados de dihidromorfolino (Colman, R.F. (1990) en The Enzymes -Sigman, D.S., y Boyer, P.D., eds- vol 19, págs. 283-323, Academic Press, San Diego). También se ha usado para estudiar la activación de plaquetas e inhibir la estimulación inducida por ATP de músculo de gallina (Pearce, P.H., Wright, J.M. Egan. C.M. & Scrutton, M.C. (1978) Eur. J. Biochem. 88, 543-554; Thomas, S.A., Zawisa, M.J., Lin, X. & Hume, R.I. (1991) Br. J. Pharmacol. 103, 1963-1969). Además, en líneas celulares de macrófagos, el o-ATP demostró que puede bloquear la permeabilización inducida por ATP de la membrana plasmática, reducir el nivel de hidrólisis de ATP exógeno mediante ecto-ATPasas de membrana e inhibir el hinchamiento, la vacuolización y la lisis celulares inducidos por ATP (Murgia et al. The Journal of Biological Chemistry, (1993) de The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, inc., vol. 268, n.º 11, página 8199). Se ha sugerido que el o-ATP tiene una actividad antagonista sobre el receptor purinérgico P2z/P2X7, debido al hecho de que el o-ATP inhibe de manera selectiva la liberación de IL-1ß (interleucina 1ß) (que es dependiente de LPS = lipopolisacárido) de células de la microglia que expresan P22/P2X7 (Ferrari D. et al., J. Exp. Med., (1997) vol. 185, N. 3, págs. 579-582).

Técnica anterior

El documento WO 02/11737, a nombre del solicitante, da a conocer el efecto antiinflamatorio y analgésico del o-ATP, usando inflamación unilateral de pata de rata provocada mediante inyección intraplantar de adyuvante completo de Freund (CFA) como modelo experimental.

El documento WO-A-9208456 da a conocer el uso de compuestos que inhiben la creatina cinasa u otras enzimas que participan en el metabolismo de purinas para el tratamiento o la prevención de tumores caracterizados por niveles elevados de estas enzimas. El compuesto puede ser un derivado de 2',3'-dialdehído del ATP, que corresponde a o-ATP.

Gory et al. notifican en Biochem, Biophys. Res. Comm., 52(2), 496-503, 1973 que el derivado de dialdehído del ATP (= o-ATP) es un inhibidor irreversible de la ribonucleótido reductasa de células de tumor de Ehrlich, y en Cancer Res., 38(3), 815-822, 1978 que el derivado de dialdehído del ATP inhibe la síntesis de ARN en núcleos aislados de células de tumor de Ehrlich.

Descripción de la invención

Ensayos in vitro en células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC), han mostrado que el o-ATP induce una reducción significativa de su capacidad proliferativa, incluso en presencia de un mitógeno. El efecto del o-ATP resultó ser superior que el inducido por vasostatina, un compuesto antiangiogénico conocido.

El uso de o-ATP para la inhibición de la angiogénesis tal como se especifica en las reivindicaciones es por tanto objeto de la presente invención. En particular, la invención proporciona un medicamento que contiene o-ATP como principio activo, útil para el tratamiento de patologías tal como se especifica en las reivindicaciones, cuya aparición o progresión implica angiogénesis. Las enfermedades mediadas por angiogénesis que pueden beneficiarse del tratamiento con o-ATP según la invención son procesos ateroscleróticos y tumores seleccionados de linfomas y leucemia.

Para su uso terapéutico, el o-ATP puede formularse con excipientes y vehículos farmacéuticamente aceptables, y administrarse por vía oral, tópica o parenteral. Las formas farmacéuticas adecuadas para las diferentes vías de administración comprenden comprimidos, píldoras, cápsulas, granulados, polvos, supositorios, jarabes, disoluciones, suspensiones, cremas, pomadas, geles, pastas, lociones, emulsiones, pulverizaciones. Pueden prepararse composiciones farmacéuticas tal como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. Co., NY, EE.UU., XVII Ed. La cantidad de principio activo por unidad de dosis oscila desde 0,01 hasta 100 mg por kg de peso corporal, que ha de administrarse una vez al día o más según el tipo y la gravedad de la patología. En general la dosis diaria oscilará desde 1 hasta 300 mg, preferiblemente desde 10 hasta 100 mg.

En otra realización, la invención se refiere a preparaciones combinadas de o-ATP y otras sustancias biológicamente activas para el tratamiento de patologías mediadas por angiogénesis tal como se especifica en las reivindicaciones. Según una realización preferida, el o-ATP se usa en combinación con sustancias antiateroscleróticas seleccionadas de fármacos hipolipemiantes o estatinas.

Los diferentes principios activos pueden administrarse o bien simultáneamente o por separado. La elección de la combinación específica de principios activos, su dosificación y modo de administración depende de la enfermedad específica, su resistencia a tratamientos farmacológicos, la tolerancia del paciente y otras variables que han de determinarse en cada caso.

Ejemplo 1

Ensayo de proliferación

Se aislaron células endoteliales humanas (HUVEC) de la vena umbilical, se contaron y sembraron en un número constante en placas de 96 pocillos. Se cultivaron las células tal como se describe (Jaffe, E.A. (1984) Biology of Endothelial Cells, Martinus Nighoff Publisher, Boston, EE.UU., págs. 1-260), con o sin (control) VEGF (50 ng/ml), en presencia de o-ATP (100 µM), y o-ATP+VEGF. Tras 24 horas de cultivo con o sin estímulo, se lavaron las células y se contaron con un microscopio óptico usando una cámara de Burker. Los resultados se muestran en la figura 1 y representan la media pm DE de 10 experimentos.

Ejemplo 2

Ensayo de permeabilidad

Se usaron cámaras Transwell para cultivos celulares (filtros de policarbonato de 0,4 µm, Costar). En resumen, se expusieron células endoteliales confluentes, en monocapa, a VEGF, o-ATP, ATP (300 µM), ATP+o-ATP, o-ATP+VEGF (en las concentraciones indicadas previamente) durante 1 h y se lavaron meticulosamente. Se añadió albúmina marcada con ¹²⁵I (NEN, Boston, MA) al compartimento superior; se añadió albúmina fría (1,5 mg/ml) al medio de cultivo para minimizar la transcitosis. Una hora tras la adición de albúmina marcada con ¹²⁵I a cada pocillo, se tomaron muestras...

1. Compuesto o-ATP para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de aterosclerosis, linfoma y leucemia.

2. Preparación terapéutica que contiene o-ATP en combinación con una sustancia antiaterosclerótica seleccionada de fármacos hipolipemiantes y estatinas, para el uso simultáneo, por separado o secuencial en el tratamiento de procesos ateroscleróticos.