Un procedimiento para recubrir partículas finas que tienen un tamaño promedio de partículas de 10 nm hasta 1.

000 nm y que forman un complejo de fármaco con uno o más miembro(s) seleccionado(s) de sistema lipídico, liposoma, partículas finas en emulsión, polímero natural, polímero sintético, coloide metálico, lípido catiónico, lípido aniónico y una preparación de partículas finas con membrana lipídica, que comprende las etapas de:

preparar una solución acuosa que contiene un disolvente orgánico polar en la que se suspende el complejo y se disuelve el lípido,

en el que el lípido se selecciona de fosfolípido, gliceroglicolípido, esfingoglicolípido, colesterol y lípido sintético, y

el disolvente orgánico polar es uno o más miembro(s) seleccionado(s) de un alcohol, un glicol y un políalquilenglicol;

recubrir las partículas finas con la membrana lipídica formada por el lípido mediante la reducción de la proporción del disolvente orgánico polar en la solución acuosa añadiendo agua o por evaporación del disolvente orgánico polar

Procedimiento de recubrimiento de partículas finas con película lipídica.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para recubrir partículas finas con membrana lipídica.

Técnica anterior

Es un hecho muy conocido que un fármaco se contiene en partículas finas para potenciar el efecto del fármaco, y que las partículas finas incluyen, por ejemplo, liposoma, emulsión de grasa, etc. Sus aplicaciones clínicas se llevan a cabo principalmente mediante inyecciones, particularmente por administración intravascular. Se ha sabido que las partículas finas administradas al vaso sanguíneo interactúan con los componentes de la sangre y, como resultado de la Interacción, las propias partículas finas o el fármaco, se destruyen (desintegran), o las partículas finas se opsonizan luego de lo cual se eliminan de la sangre (se eliminan como una sustancia extraña a través de un sistema reticuloendotelial). Con el fin de evitar esa eliminación, se ha estudiado, por ejemplo, la modificación del liposoma con polietilenglicol, [Stealth Liposomes, ed. by D. D. Lasic and F. Martin, CRC Press Inc., Florida, 93-102 (1995)].

Además, con el fin de administrar un ácido nucleico tal como un oligonucleótido, ADN y ARN a células blanco, se ha usado frecuentemente un complejo de un ácido nucleico con liposoma que comprende un lípido catiónico (a partir de aquí denominado liposoma lipídico catiónico), un polímero básico tal como poli-L-lisina y poliamidaamina. Sin embargo, se ha sabido que, cuando se administra un complejo de liposoma lipídico catiónico con un ácido nucleico por vía intravenosa, éste se distribuye fácilmente desde la sangre al hígado, pulmón, etc. [Biochim. Biophys. Acta, 1281,139-149 (1996); J. Controíled Release, 41,121-130 (1996)]. Por otro lado, S. Li, et al. han informado que, cuando se pone en contacto suero de ratón con un complejo liposoma lipídico catiónico/ADN, se ha desarrollado un aumento en el tamaño del complejo, agregación, desintegración del liposoma y liberación y desintegración del ADN [Gene Therapy, 5, 930-937 (1998); Gene Therapy, 6, 585-594 (1999)]. Con el fin de resolver esos problemas, se estudió la modificación del liposoma lipídico catiónico con polietilenglicol, y O. Meyer, et al. prepararon un complejo de oligodesoxinucleótido (ODN) con liposoma lipídico catiónico que contiene poíietilenglicol-fosfatidiletanolamina (PEG-PE) [J. Biol. Chem., 273, 15621-15627 (1998)]. Sin embargo, cuando se puso en contacto con una solución acuosa al 50% de plasma humano durante 4 horas, el 35% del ODN se disoció. Con el fin de reducir la disociación, D. Stuart y T. Alien disolvieron previamente el liposoma lipídico catiónico en cloroformo, mezclaron el disolvente resultante con una solución acuosa de ODN y metanol, y transfirieron un complejo de liposoma lipídico catiónico/ODN a la fase clorofórmica y lo sometieron a separación centrífuga. Además, extrajeron la fase de cloroformo, agregaron a ésta lípido-PEG, lípido neutro y agua para formar una emulsión W/O. Han intentado incluir ODN dentro del liposoma completamente formando la emulsión W/O de un modo similar al procedimiento de evaporación de fase reversa de F. Szoka, et al. [Biochim. Biophys. Acta, 1463,219-229 (2000)]. En años recientes, sin embargo, el uso de cloroformo no se considera deseable en vista de la seguridad. Además, D. McPhail, et al. prepararon una suspensión de vesícula en vesícula en la cual la vesícula de quitosano se coloca en el liposoma agregando una suspensión de vesícula (vesícula de quitosano) de palmitoilquitosano y colesterol a una capa delgada de fosfatidilcolina de yema de huevo y colesterol [Int. J. Pharmaceutics, 200, 73-86 (2000)]. Sin embargo, no hay descripción sobre la eficiencia y, cuando se intuye a partir del procedimiento de preparación, la eficacia de inclusión se supuso que era tan baja como del orden de un pequeño porcentaje, lo que, según se presume, es la causa de un problema en su uso práctico. A partir de dichos puntos de vista también, la contención conveniente y altamente eficiente de partículas finas con el uso de una vesícula cerrada es muy útil cuando se busca aplicación al tratamiento médico.

Además, hay algunos casos en los que muchos péptidos y proteínas que son útiles en el cuidado médico se descomponen rápidamente en el cuerpo vivo por acción de las enzimas o similares o se eliminan del cuerpo vivo como resultado de la generación de un anticuerpo por administraciones frecuentes, por lo cual su efecto ya no se ejerce. Por lo tanto, con un objetivo de potenciar la estabilidad de esos péptidos y proteínas en el cuerpo vivo, se ha intentado incluirlas dentro de un liposoma. Como medio de contenerlos en el liposoma, se han conocido, por ejemplo, un procedimiento de preparación de liposomas diseñado por Bangham, et al. [J. Mol. Biol., 13, 238 (1965)], un procedimiento de inyección de etanol [J. Cell Biol,, 66, 621 (1975)], un procedimiento de prensa francesa [FEBS Lett., 99, 210 (1979)], un procedimiento de congelamiento-descongelamiento [Arch. Biochem. Biophys., 212, 186 (1981)], un procedimiento de evaporación en fase reversa [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75,186 (1981)], un procedimiento de gradiente de pH (Patente Japonesa No. 2,572,554; Patente Japonesa No. 2,659,136; etc.) y similares. Para los compuestos de bajo peso molecular, un procedimiento de gradiente de pH es apropiado y también se ha contemplado un procedimiento mejorado de este tipo. Sin embargo, con respecto a péptidos y proteínas, no se ha logrado una contención invariablemente eficiente aún y, en el caso de la insulina marcada con fluorescencia, se contuvo hasta un grado de aproximadamente 5 a 40% pero no se contuvo en absoluto insulina sin marcar [Int. J. Pharmaceutics, 179, 85-95 (1999)]. Con el fin de potenciar el efecto terapéutico producido por péptidos y proteínas, es una exigencia desarrollar un procedimiento por el cual los péptidos y proteínas se contienen eficientemente dentro de vesículas cerradas.

Divulgación de la invención

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un procedimiento seguro, conveniente y eficiente para recubrir partículas finas con membrana lipídica con el fin de estabilizar un medicamento etc. contenido en dichas partículas finas. Cuando las partículas finas están contenidas en vesículas cerradas que comprenden membrana de bicapa lipídica o multicapa usando el mencionado procedimiento de recubrimiento, se puede suprimir la afección producida por los componentes en el cuerpo vivo particularmente en la sangre o en el tracto gastrointestinal y por el sistema reticuloendotelial y además, puede suprimirse la afección durante el período de conservación producida por cada una de las partículas finas o por un medio de dispersión en eI que las partículas finas se dispersan.

Los presentes inventores han encontrado que un complejo que comprende un fármaco soluble en agua y el lípido catiónico formado a causa de interacción electrostática no es soluble en una solución acuosa de etanol y que, aunque el fosfolípido es soluble en una solución acuosa de etanol que tiene una alta concentración de etanol, forma un liposoma debido a la formación de una membrana lipídica en una solución acuosa de etanol que tiene una baja concentración de etanol. Como resultado de investigaciones intensivas adicionales, se ha encontrado que un complejo de un medicamento con lípido puede recubrirse con una membrana lipídica que comprende lípido con polietilenglicol y fosfolípidos, cuando un derivado polimérico soluble en agua tal como lípido con polietilenglicol se agrega anteriormente a un complejo de un fármaco soluble en agua con lípido, la mezcla se dispersa en una solución acuosa de etanol que tiene una alta concentración de etanol, lípido con polietilenglicol y fosfolípido se disuelven en el líquido resultante y luego el contenido de etanol se reduce gradualmente.

De este modo, la presente invención se refiere a los siguientes puntos (1) hasta (19).

1. Un procedimiento para recubrir partículas finas que tienen un tamaño promedio de partículas de 10 nm hasta 1.000 nm y que forman un complejo de fármaco con uno o más miembro(s) seleccionado(s) de sistema lipídico, liposoma, partículas finas en emulsión, polímero natural, polímero sintético, coloide metálico, lípido catiónico, lípido aniónico y una preparación de partículas finas con membrana lipídica, que comprende las etapas de:

preparar una solución acuosa que contiene un disolvente orgánico polar en la que se suspende el complejo y se disuelve el lípido,

en el que el lípido se selecciona de fosfolípido, gliceroglicolípido, esfingoglicolípido, colesterol y lípido sintético, y

el disolvente orgánico polar es uno o más miembro(s) seleccionado(s) de un alcohol, un glicol y un políalquilenglicol;

recubrir las partículas finas con la membrana lipídica formada por el lípido mediante la reducción de la proporción del disolvente orgánico polar en la solución acuosa añadiendo agua o por evaporación del disolvente orgánico polar.

2. Un procedimiento para recubrir partículas finas que tienen un tamaño promedio de partículas de 10 nm hasta 1,000 nm y que forman un complejo de fármaco con uno o más miembro(s) seleccionado(s) de sistema lipídico, liposoma, partículas finas en emulsión, polímero natural, polímero sintético, coloide metálico, lípido catiónico, lípido aniónico y una preparación de partículas finas con membrana lipídica, que comprende las etapas de:

suspender las partículas finas en una solución acuosa que contiene un disolvente orgánico polar (líquido A),

en el que el disolvente orgánico polar es uno o más miembro(s) seleccionado(s) de un alcohol, un glicol y un polialquilenglicol;

disolver el lípido en un disolvente orgánico polar o una solución acuosa que contiene un disolvente orgánico polar que es igual o diferente de la solución acuosa anterior que contiene un disolvente orgánico polar (líquido B),

en el que el lípido se selecciona de fosfolípido, gliceroglicolípido, esfingoglicolípido, colesterol y lípido sintético, y

el disolvente orgánico polar es uno o más miembro(s) seleccionado(s) de un alcohol, un glicol y un polialquilenglicol;

mezclar el líquido A y el líquido B para obtener líquido C; y

recubrir las partículas finas con la membrana lipídica formada por el lípido mediante la reducción de la proporción del disolvente orgánico polar en el líquido C añadiendo agua o por evaporación del disolvente orgánico polar para obtener el líquido D.

3. El procedimiento para recubrir de acuerdo con la reivindicación 2, en el que las concentraciones del disolvente orgánico polar en el líquido A y el líquido B son de 60 a 90%.

4. El procedimiento para recubrir de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la concentración del disolvente orgánico polar en el líquido D es 50% o menor.

5. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que las partículas finas son aquellas que contienen uno o más miembro(s) seleccionado(s) de lípido con polietilenglicol, un alquil éter de polietilenglicol, un derivado de aceite de ricino con polietilenglicol, un éster de ácido graso de polietilenglicol sorbitano, estearato de polietilenglicol, un copolímero de etilenglicol con propilenglicol y un éster de glicerol.

6. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partículas finas son un complejo de un medicamento con lípido catiónico.

7. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partículas finas son un complejo de un medicamento con lípido aniónico.

8. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de tas reivindicaciones 1 a 5, en el que las partículas finas son un complejo de un medicamento, fosfolípido que contiene liposomas y una sal sódica de sulfato de dextrano.

9. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el fármaco es un fármaco seleccionado de un péptido, una proteína, un ácido nucleico, un compuesto de bajo peso molecular, un sacárido y un compuesto polimérico.

10. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el alcohol es etanol.

11. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el glicol es un propilenglicol.

12. El procedimiento para recubrir de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el polialquilenglicol es polietilenglicol.

13. Las partículas finas que pueden obtenerse por el procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.