Polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos: Glu Ala Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn Ile Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO:

2), en el que el polipéptido inhibe la calicreína plasmática, para su utilización en la prevención o en la reducción de la isquemia o en la prevención o en la reducción de la aparición de una respuesta inflamatoria sistémica asociada con un procedimiento quirúrgico en un paciente

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las proteasas están involucradas en una amplia gama de rutas biológicas. En particular, las proteasas de serina tales como calicreína, plásmido, elastasa, activador de plasminógeno urocinasa, trombina, inhibidor de coagulación humano asociado con lipoproteínas, y factores de coagulación tales como factores VIIa, IXa, Xa, XIa, y XIIa han estado implicados en rutas que afectan al flujo sanguíneo, por ejemplo, isquemia general y focal, invasión tumoral, fibrinólisis, pérdida de sangre perioperatoria, e inflamación. Los inhibidores de proteasas de serina específicos, por lo tanto, han recibido atención como dianas de fármacos potenciales para varias enfermedades isquémicas. [0002] Un inhibidor de este tipo, la aprotinina (también llamado inhibidor de tripsina pancreática bovina o BPTI), obtenido a partir de pulmón bovino, se ha aprobado en los Estados Unidos para su uso profiláctico en la reducción de la pérdida de sangre perioperatoria y la necesidad de transfusión en pacientes que sufren de derivación cardiopulmonar (CPB), por ejemplo, en el transcurso de un procedimiento de derivación de la arteria coronaria con injerto. La aprotinina se encuentra disponible comercialmente bajo el nombre comercial TRASYLOL® (Bayer Corporation Pharmaceutical Division, West Haven, Connecticut) y se había aprobado previamente para su uso para el tratamiento de la pancreatitis. La eficacia de la aprotinina se asocia con sus capacidades relativamente no específicas para inhibir una variedad de proteasas de serina, incluyendo calicreína plasmática y plásmido. Estas proteasas son importantes en una serie de rutas del sistema de activación por contacto (CAS). [0003] El CAS se activa inicialmente cuando la sangre total contacta con la superficie de los sustratos extraños (por ejemplo, caolín, vidrio, sulfato de dextrano, o superficies dañadas del hueso). La calicreína, una proteasa de serina, es una enzima de plasma que inicia la cascada del CAS, que conduce a la activación de neutrófilos, plasmina, coagulación y varias cininas. La calicreína se secreta como zimógeno (precalicreína) que circula como una molécula inactiva hasta que se activa mediante un evento proteolítico temprano en la cascada de activación por contacto. Claramente, la inhibición específica de la calicreína sería un enfoque muy atractivo para controlar la pérdida de sangre asociada con CPB y el inicio de la respuesta inflamatoria sistémica (SIR), tal como se encontraría durante, por ejemplo, varios procedimientos quirúrgicos invasivos. [0004] A pesar de ser el único compuesto con licencia para la prevención de pérdida de sangre perioperatoria en CPB para procedimientos de derivación de la arteria coronaria con injerto (CABG), la aprotinina no es tan ampliamente utilizada como cabría esperar. Existe una gran preocupación respecto al uso de este polipéptido bovino en pacientes que requieren CPB, y en particular el uso de este compuesto en procedimientos CABG. La aprotinina no es específica de la calicreína, sino que interactúa con otras enzimas (por ejemplo, plasmina) en múltiples rutas. Así, el mecanismo de acción de la aprotinina es muy especulativo, y la falta de comprensión exacta de lo que se ve afectado durante el tratamiento con aprotinina produce el riesgo de complicaciones durante el tratamiento. Una complicación citada con frecuencia es la trombosis sin control, debido a las acciones de la aprotinina en la ruta fibrinolítica. Existe una preocupación no sólo sobre esos casos hiperagudos, tales como trombosis de los vasos mayores en el período perioperatorio, sino también sobre la permeabilidad del injerto después del procedimiento CABG. Además, como proteína natural obtenida de pulmón bovino, la administración de la aprotinina en humanos puede provocar hipersensibilidad severa o reacciones anafilácticas o anafilactoides después de la primera y, más a menudo, después de la administración repetida a los pacientes. Esto es particularmente preocupante en el gran número de pacientes que tienen procedimientos repetidos de CABG. Además, existe una creciente preocupación pública sobre el uso de materiales procedentes de fuentes bovinas como un vector potencial para la transmisión de la encefalopatía espongiforme bovina a los humanos. [0005] Estas preocupaciones dejan claro que sigue habiendo una necesidad de medios y procedimientos más eficaces y más específicos para prevenir o reducir la pérdida de sangre perioperatoria y el inicio de SIR en un paciente sometido a cirugía que resulta en la activación del CAS, tal como procedimientos CABG en pacientes de CPB, o de reemplazo de cadera. El documento WO 95/21601 se refiere a dominios Kunitz homólogos a BPTI, que inhiben la calicreína, y para el uso terapéutico y de diagnóstico de estas proteínas.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente descripción, que incluye la invención, se basa en el descubrimiento de péptidos que inhiben las proteasas de serina. Las proteasas de serina tales como, por ejemplo, calicreína, están implicadas en, por ejemplo, rutas que conducen a la pérdida excesiva de sangre perioperatoria y el inicio de una respuesta inflamatoria sistémica. Los inhibidores de péptido de calicreína preferidos incluyen los descritos en las patentes US 6.333.402 y 6.057.287 de Markland et al. La presente descripción se dirige en parte a la utilización de los péptidos en procedimientos terapéuticos y composiciones adecuadas para su uso en la eliminación o en la reducción de varias isquemias, pero no limitado a la pérdida de sangre perioperatoria y el inicio de la respuesta inflamatoria sistémica. La pérdida de sangre perioperatoria se produce por procedimientos quirúrgicos invasivos que provocan la activación por contacto de componentes de complemento y los sistemas de coagulación/fibrinólisis. Más específicamente, la presente descripción proporciona procedimientos de utilización de inhibidores de calicreína para reducir o prevenir la pérdida de sangre perioperatoria y una respuesta inflamatoria sistémica en pacientes sometidos a procedimientos quirúrgicos invasivos, especialmente cirugías cardiotorácicas. [0007] En un caso, la presente descripción se dirige a un procedimiento para prevenir o reducir la isquemia en un paciente que comprende administrar al paciente una composición que comprende un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Gly Xaa13 Cys Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Cys Xaa31 Xaa32 Phe Xaa34 Xaa35 Gly Gly Cys Xaa39 Xaa40 Xaa41 Xaa42 Xaa43 Xaa44 Xaa45 Xaa46 Xaa47 Xaa48 Xas49 Xaa50 Cys Xaa52 Xaa53 Xaa54 Cys Xaa56 Xaa57 Xaa58 (SEQ ID NO: 1), en el que Xaa1, Xaa2, Xaa3, Xaa4, Xaa56, Xaa57 o Xaa58 son cada uno individualmente un aminoácido o están ausentes; Xaa10 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en Asp y Gln; Xaa11 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Asp, Gly, Ser, Val, Asn, Ile, Ala y Thr; Xaal3 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en Arg, His, Pro, Asn, Ser, Thr, Ala, Gly, Gln y Lys; Xaa15 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Arg, Lys, Ala, Ser, Gly, Met, Asn y Gln; Xaa16 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Ala, Gly, Ser, Asp y Asn; Xaa17 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Ala, Asn, Ser, Ile, Gly, Val, Gln y Thr; Xaa18 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: His, Leu, Gln y Ala; Xaa19 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en: Pro, Gln, Leu, Asn y Ile; Xaa21 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Trp, Phe, Tyr, His y Ile; Xaa22 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Tyr y Phe; Xaa23 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Tyr y Phe; Xaa31 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Glu, Asp, Glu, Asn, Ser, Ala, Val, Leu, Ile y Thr; Xaa32 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Glu, Gln, Asn Asp, Pro, Thr, Leu, Ser, Ala, Gly y Val; Xaa34 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Thr, Ile, Ser, Val, Ala, Asn, Gly y Leu; Xaa35 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en: Tyr, Trp y Phe; Xaa39 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Glu, Gly, Ala, Ser y Asp; Xaa40 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Gly y Ala; Xaa43 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Asn y Gly; Xaa45 es un aminoácido seleccionado del grupo consistente en: Phe y Tyr, y en el que el polipéptido inhibe la calicreína. [0008] En un caso particular, la isquemia es pérdida de sangre perioperatoria, debido a un procedimiento quirúrgico...

1. Polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos: Glu Ala Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn Ile Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO: 2), en el que el polipéptido inhibe la calicreína plasmática, para su utilización en la prevención o en la reducción de la isquemia o en la prevención

o en la reducción de la aparición de una respuesta inflamatoria sistémica asociada con un procedimiento quirúrgico en un paciente.

2. Polipéptido según la reivindicación 1, para su utilización en la prevención o en la reducción de la isquemia asociada con la pérdida de sangre perioperatoria debido a un procedimiento quirúrgico realizado en un paciente.

3. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en la reivindicación 2, en el que el procedimiento quirúrgico es una cirugía cardiotorácica.

4. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en la reivindicación 3, en el que la cirugía cardiotorácica es una derivación cardiopulmonar o una derivación de la arteria coronaria con injerto.

5. Polipéptido según la reivindicación 1, para su utilización en la prevención o en la reducción de la aparición de una respuesta inflamatoria sistémica asociada con una cirugía cardiotorácica.

6. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en la reivindicación 5, en el que la cirugía cardiotorácica es una derivación cardiopulmonar o una derivación de la arteria coronaria con injerto.

7. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el procedimiento quirúrgico es una cirugía cardíaca pediátrica.

8. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en la reivindicación 1 o en la reivindicación 2, en el que el procedimiento quirúrgico es un trasplante de pulmón o un trasplante de hígado ortotópico.

9. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el procedimiento quirúrgico incluye la utilización de circulación extracorpórea.

10. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se indica en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el procedimiento quirúrgico incluye un traumatismo óseo.

11. Polipéptido según la reivindicación 1, para la utilización que se

indica en la reivindicación 1 o en la reivindicación 2, en el que el procedimiento 5 quirúrgico incluye el reemplazo de cadera o una fractura esternal.

12. Utilización de un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos: Glu Ala Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn Ile Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys

10 Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO: 2), en el que el polipéptido inhibe la calicreína plasmática, en la preparación de un medicamento para prevenir o reducir la isquemia o para la prevención o la reducción de la aparición de una respuesta inflamatoria sistémica asociada con un procedimiento quirúrgico en un paciente.

15 13. Utilización según la reivindicación 12, tal como también se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11.