NUEVA PROTEINA DE FIJACION DEL FOSFATO, COMPOSICIONES FARMACEUTICAS QUE LO CONTIENEN Y SUS UTILIZACIONES.

Proteína, caracterizada porque comprende o está constituida por:

- la secuencia SEC ID nº 1, o

- cualquier secuencia homóloga de la secuencia SEC ID nº 1, que tiene una homología de por lo menos 80% con la secuencia SEC ID nº 1, con la condición de que dicha secuencia homóloga se una al fosfato

Nueva proteína de fijación del fosfato, composiciones farmacéuticas que lo contienen y sus utilizaciones.

La presente invención tiene por objeto una nueva proteína, procedente del suero humano, de fijación del fosfato, unas composiciones farmacéuticas que la contienen, así como sus utilizaciones, en particular en el marco del tratamiento de la hiperfosfatemia y de las enfermedades cardiovasculares o de la artritis.

El fosfato es una molécula muy importante implicada en numerosos mecanismos biológicos. El fosfato se encuentra en particular en los fosfolípidos, en el mecanismo de producción de energía (ATP, ADP), en los procesos de señalización celular, en la composición del material genético en los huesos (en forma de fosfato de calcio).

La hiperfosfatemia es una patología relacionada con un exceso de fosfato en el organismo y provoca en particular un aumento de los riesgos de enfermedades cardiovasculares, favoreciendo los procesos de ateroesclerosis y de calcificación de las arterias (Dorozhkin y Epple, 2002; Amann et al., 2003; Blazheevich et al., 1975). Efectuándose la calcificación a nivel de las articulaciones, la hiperfosfatemia puede asimismo provocar artritis (pseudo-gota).

Las sales de fosfato de calcio producidas en el suero durante una hiperfosfatemia precipitan en los tejidos blandos con calcificación ectópica en diferentes tejidos: vasos (accidentes vasculares cerebrales o cardiacos), articulaciones (pseudo-gota), cristalino, intersticio renal (nefrocalcinosis), subcutáneas (prurito), pulmonares, pancreáticas.

De esta manera, la mitad de los fallecimientos en las personas que padecen insuficiencia renal se debe a unas enfermedades cardiovasculares relacionadas con la hiperfosfatemia. A este respecto, ciertos quelantes del fosfato que complejan el fosfato en la luz intestinal se utilizan actualmente como medicamento. Sin embargo, todos estos quelantes no son fisiológicos. Por ello se derivan ciertas complicaciones o restricciones en cuanto a su utilización.

Las preparaciones que contienen magnesio están limitadas por la aparición de trastornos digestivos (diarrea) y se deben prohibir debido al riesgo de hipermagnesemia. Asimismo, la prescripción de hidróxido de aluminio, utilizado durante mucho tiempo debido a su eficacia, se debe evitar, o por lo menos limitar a periodos muy cortos, debido al riesgo de intoxicación alumínica (anemia hipocroma microcitaria, osteomalacia, miopatía, demencia).

La prescripción de sales de calcio es el mejor medio para corregir al mismo tiempo la hipocalcemia y la hiperfosforemia, permitiendo por un lado aumentar la cantidad de calcio absorbido por el intestino delgado a pesar del déficit en calcitriol y, por otro lado complejar el fósforo en la luz intestinal en forma de fosfato de calcio que se eliminará en las heces. Sin embargo, el inconveniente principal de los quelantes que contienen calcio es que inducen una hipercalcemia que, en ciertas series, ha podido ser observada en 20% de los enfermos. Este riesgo ha conducido a realizar otros productos capaces de limitar la hiperfosforemia.

El medicamento más utilizado actualmente es el Renagel® (Ramsdell; 1999). Se trata de un polímero catiónico, no absorbible capaz de quelatar el fosfato.

La presente invención tiene por objetivo proporcionar un nuevo quelante proteico fisiológico que se une al fosfato, que no necesita la utilización de otros iones que pueden provocar unas complicaciones, y que ofrece perspectivas más amplias de utilización que los quelantes actuales.

La presente invención se refiere a una proteína, caracterizada porque comprende o esta constituida por:

La presente invención se refiere a una proteína tal como se ha definido anteriormente, caracterizada porque comprende o está constituida por:

La secuencia SEC ID nº 2 corresponde a la proteína humana de fijación del fosfato. Esta nueva proteína ha sido aislada en el plasma humano y su estructura tridimensional muestra que pertenece a la clase de los "phosphate binding protein" (proteínas de fijación del fosfato: PBP). Se denominará asimismo a continuación HPBP (proteína humana de fijación del fosfato).

La secuencia SEC ID nº 3 corresponde a una proteína homóloga de la proteína de secuencia SEC ID nº 2, que presenta un porcentaje de identidad de aproximadamente 90% con la secuencia SEC ID nº 2, y que presenta las mismas propiedades de fijación al fosfato que la secuencia SEC ID nº 2.

La propiedad de fijación del fosfato de las secuencias de la invención se pueden verificar mediante el ensayo siguiente de fijación del fosfato mediante marcaje radioactivo:

La presente invención se refiere asimismo a una secuencia nucleotídica que codifica para una proteína tal como se ha definido anteriormente.

La presente invención se refiere asimismo a un vector recombinante, en particular plásmido, cósmido, fago o ADN de virus, que contiene una secuencia nucleotídica tal como se ha definido anteriormente.

Según un modo de realización ventajoso, la presente invención se refiere a un vector recombinante tal como se ha definido anteriormente, que contiene los elementos necesarios para la expresión en una célula hospedante de los polipéptidos codificados por la secuencia nucleotídica tal como se ha definido anteriormente, insertada en dicho vector.

La presente invención se refiere asimismo a una célula hospedante, seleccionada en particular de entre las bacterias, los virus, las levaduras, los hongos, las plantas o las células de mamíferos, siendo dicha célula hospedante transformada, en particular con la ayuda de un vector recombinante tal como se ha definido anteriormente.

La presente invención se refiere asimismo a una composición farmacéutica que comprende a título de sustancia activa, una proteína tal como se ha definido anteriormente, en particular SEC ID nº 2 o SEC ID nº 3, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención se refiere asimismo a una composición farmacéutica tal como se ha definido anteriormente, en la que la proteína de la invención, en particular SEC ID...

1. Proteína, caracterizada porque comprende o está constituida por:

2. Proteína según la reivindicación 1, caracterizada porque comprende o está constituida por:

3. Secuencia nucleotídica que codifica para una proteína tal como la definida según la reivindicación 1 ó 2.

4. Vector recombinante, plásmido, cósmido, fago o ADN de virus, que contiene una secuencia nucleotídica según la reivindicación 3.

5. Vector recombinante según la reivindicación 4, que contiene los elementos necesarios para la expresión en una célula hospedante de los polipéptidos codificados por una secuencia nucleotídica según la reivindicación 3, insertados en dicho vector.

6. Célula hospedante aislada, seleccionada de entre las bacterias, las levaduras, las células de hongos, las células de plantas o las células de mamíferos, siendo dicha célula hospedante transformada con la ayuda de un vector recombinante según una de las reivindicaciones 4 ó 5.

7. Composición farmacéutica que comprende a título de sustancia activa una proteína según la reivindicación 1 ó 2, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Composición farmacéutica según la reivindicación 7, que comprende a título de sustancia activa una proteína representada por la secuencia SEC ID nº 2 o SEC ID nº 3.

9. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, en la que la proteína tal como la definida según la reivindicación 1 ó 2 está en asociación con una variante de la proteína paraoxonasa, de SEC ID nº 4, SEC ID nº 5, SEC ID nº 6, SEC ID nº 7, SEC ID nº 8, SEC ID nº 9, SEC ID nº 10 o SEC ID nº 11.

10. Utilización de una proteína según la reivindicación 1 ó 2, para la preparación de un medicamento destinado a la prevención o al tratamiento de la artritis o de enfermedades relacionadas con una hiperfosfatemia, tales como las enfermedades cardiovasculares o, en asociación con una variante de la proteína paraoxonasa de SEC ID nº 4, SEC ID nº 5, SEC ID nº 6, SEC ID nº 7, SEC ID nº 8, SEC ID nº 9, SEC ID nº 10 o SEC ID nº 11, en el marco de la profilaxia o del tratamiento de las intoxicaciones provocadas por unos insecticidas o unos agentes neurotóxicos tales como el soman, el VX, el sarin o el tabun, o en el marco del tratamiento de la ateroesclerosis.

11. Producto de combinación que comprende por lo menos una proteína según la reivindicación 1 ó 2, y por lo menos una variante de la proteína paraoxonasa de SEC ID nº 4, SEC ID nº 5, SEC ID nº 6, SEC ID nº 7, SEC ID nº 8, SEC ID nº 9, SEC ID nº 10 o SEC ID nº 11, para una utilización simultánea, separada o espaciada en el tiempo destinado a la profilaxia o al tratamiento de las intoxicaciones provocadas por unos insecticidas o unos agentes neurotóxicos tales como el soman, el VX, el sarin o el tabun.

12. Método de dosificación de la proteína tal como la definida según la reivindicación 1 ó 2, siendo dicho método seleccionado de entre

13. Aplicación del método de dosificación según la reivindicación 12

14. Aplicación según la reivindicación 13 para el diagnóstico in vitro de enfermedades relacionadas con una hiperfosfatemia tales como las enfermedades cardiovasculares relacionadas con la formación de placas de ateromas, o para el diagnóstico in vitro de una predisposición de un individuo para desarrollar una de las enfermedades mencionadas anteriormente.

15. Aplicación según la reivindicación 13 para el diagnóstico in vitro de enfermedades relacionadas con una hipofosfatemia, o para el diagnóstico in vitro de una predisposición de un individuo para desarrollar estas enfermedades.