METODO INMUNOCROMATOGRAFICO PARA DETECTAR LA PRESENCIA DE ALERGENOS EN ALIMENTOS PROCESADOS.
Método inmunocromatográfico para detectar la presencia de alérgenos en alimentos procesados.
La presente invención se refiere a un método inmunocromatográfico para la detección de alérgenos en alimentos procesados. Más particularmente, se refiere a la detección de proteínas lácteas o de huevo mediante la utilización de anticuerpos policlonales específicos de {be}-lactoglobulina u ovomucoide
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200801913.
Solicitante: UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA..
Nacionalidad solicitante: España.
Provincia: ZARAGOZA.
Inventor/es: SANCHEZ PANIAGUA,LOURDES, CALVO REBOLLAR,MIGUEL, MATA VALLESPIN,LUIS, PEREZ CABREJAS,MA. DOLORES, DE LUIS PEREZ,RUTH, LAVILLA MARTIN,MARIA.
Fecha de Solicitud: 26 de Junio de 2008.
Fecha de Publicación: .
Fecha de Concesión: 28 de Septiembre de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/53 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
Clasificación PCT:
- G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
Fragmento de la descripción:
Método inmunocromatográfico para detectar la presencia de alérgenos en alimentos procesados.
La presente invención se refiere a un método inmunocromatográfico para la detección de alérgenos en alimentos procesados. Más particularmente, se refiere a la detección de proteínas lácteas o de huevo mediante la utilización de anticuerpos policlonales específicos de ß-lactoglobulina u ovomucoide.
Estado de la técnica anterior
Las proteínas de la leche y del huevo son muy utilizadas en la industria alimentaria debido a sus buenas propiedades funcionales, pero también constituyen una de las principales causas de alergia en alimentos. El tipo de población más afectada por estas alergias suele ser la infantil.
El único tratamiento eficaz de la alergia alimentaria es evitar la ingesta del alimento sensibilizante, mediante una dieta de eliminación estricta. Por ello, resulta muy importante para un individuo alérgico conocer si un alimento contiene el componente que le causa la alergia, para evitar su consumo.
Desde el año 2003, la Directiva Europea (2003/89/EC) obliga a indicar en la etiqueta de los alimentos todos los ingredientes, y especialmente los que pueden provocar alergias e intolerancias. Además, estos materiales pueden encontrarse en los alimentos como consecuencia de una contaminación durante el transporte de las materias primas o durante el procesado. Por ello, es necesario disponer de técnicas específicas, sensibles y rápidas para su detección, con el objetivo de asegurar que se cumple la legislación vigente y para proteger al consumidor alérgico.
La mayoría de los trabajos desarrollados para la determinación de alérgenos en alimentos están dirigidos a la detección de proteínas de cacahuete y de gluten, si bien existen algunos trabajos para la detección de otras proteínas alergénicas derivadas de otros alimentos como huevo, leche, pescado y algunos vegetales (Matsuda, R., et al., 2006, J. AOAC Int., vol. 89, pp. 1600-1608; Poms, R.E., et al., 2005, Food Addit. Contam., vol. 22, pp. 104-112).
Las técnicas más utilizadas para la detección de estos alérgenos, en alimentos, son las técnicas genéticas basadas en la detección de ADN y las técnicas inmunoquímicas basadas en la detección de proteínas. Estas últimas constituyen las técnicas de elección ya que las alergias están causadas por componentes de naturaleza proteica. Entre las técnicas inmunoquímicas más utilizadas se encuentran las técnicas de inmunoblotting previa separación de las proteínas por electroforesis y sobretodo, las técnicas de ELISA en placa (Poms, R.E., Klein, C.L., y Anklam, E., 2004, Food Addit. Contam. 21, 1-31). Algunos de los ensayos de ELISA se encuentran ya comercializados, o en fase de comercialización.
En los últimos años, la aplicación de las técnicas de inmunocromatografía para la detección de proteínas específicas está alcanzando un gran auge y desplazando a las técnicas de ELISA en placa en algunos campos como el ámbito de la medicina y en la detección de materiales transgénicos.
Explicación de la invención
La presente invención proporciona un test de inmunocromatografía, de gran rapidez y especificidad, para detectar la presencia de proteínas lácteas o de huevo en alimentos, y más particularmente en alimentos procesados, utilizando anticuerpos específicos frente a estas proteínas.
La elección de estas proteínas se realiza en base a su alta inmunogenicidad y a su alta termorresistencia, siendo esta última propiedad muy importante cuando se analizan alimentos procesados que han sido sometidos a tratamientos térmicos.
Por ejemplo, la ß-lactoglobulina de la leche y el ovomucoide del huevo son proteínas solubles que se encuentran en una concentración considerable en dichos alimentos. El ovomucoide constituye un 11% de las proteínas de la clara del huevo y la ß-lactoglobulina el 50% de las proteínas del lactosuero bovino. El ovomucoide es la proteína más termorresistente de la clara del huevo y la ß-lactoglobulina junto con la a-lactalbúmina (cuya concentración es 4 veces menor que la de la ß-lactoglobulina) las más termorresistentes del lactosuero. La propiedad de estas proteínas de presentar una alta termorresistencia indica que mantienen su inmunorreactividad, es decir, su capacidad para reaccionar con anticuerpos específicos obtenidos frente a ellas, al ser sometidas a un tratamiento térmico.
Las técnicas de inmunocromatografía presentan las ventajas generales que tienen las técnicas inmunoquímicas convencionales, como son las de poseer una alta especificidad y sensibilidad y que la preparación de la muestra es muy sencilla. Además, las técnicas inmunocromatográficas presentan algunas ventajas adicionales importantes entre las que destaca la rapidez, con una duración total que es menor a 10 minutos y la sencillez operativa, ya que si se utiliza como método cualitativo, los resultados pueden observarse a simple vista y ser utilizados como pruebas de campo, incluso a nivel doméstico, no requiriendo en este caso la utilización de ningún equipamiento.
Existe también la posibilidad de determinar los resultados de forma semicuantitativa en un laboratorio utilizando un lector. Puede ser utilizado por personal no entrenado y es también susceptible de ser presentado en forma de kit, de modo que se simplifique al máximo la manipulación por la persona encargada del análisis. Este sistema permite además realizar el análisis de un número elevado de muestras.
Por ello, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un método para la fabricación de conjugados, que han de ser adecuados para su uso en una técnica inmunocromatografica y que comprenden microesferas de poliestireno tapizadas con anticuerpos. Este método para la fabricación de conjugados comprende los siguientes pasos fundamentales:
Previamente, se seleccionan las proteínas de entre aquellas capaces de mantener en gran parte su inmunorreactividad, o sea su capacidad para reaccionar con anticuerpos específicos, tras ser sometidas a un tratamiento térmico. Por ejemplo, las proteínas ß-lactoglobulina bovina o el ovomucoide que además son cuantitativamente importantes en la leche y en el huevo.
Por ello, en una realización preferida de este método para la fabricación de conjugados, los anticuerpos son específicos frente al antígeno ovomucoide o ß-lactoglobulina.
Una vez obtenidos los antisueros frente a las proteínas concretas, se aíslan los anticuerpos específicos, por ejemplo utilizando un inmunoadsorbente que contenga la proteína insolubilizada.
Sin embargo, el paso más delicado se corresponde con el primer aspecto de la presente invención, que es el de la conjugación de los anticuerpos específicos con las microesferas de poliestireno coloreadas. En este sentido, se presentaron varias dificultades. En el caso de agregación de las esferas, visualizada mediante microscopía, se observó que éstas no ascendían por la membrana. Para solventar este inconveniente inicial, se sonica y microfiltra, de tal forma que con la agitación se disgregen parte de los agregados y los no disgregados se eliminen por filtración.
Sin embargo, en la filtración se puede producir una pérdida importante de las esferas al quedar retenidas en el filtro. Para evitar este problema, se adicionan tampones con diferente pH (entre 5.2 y 7.5) y diferente relación de volumen entre los reactivos y las esferas (entre 4/1 y 20/1) en las diferentes etapas de conjugación.
Otra realización preferida del método para la fabricación de conjugados se refiere a las microesferas de poliestireno, que son preferiblemente carboxiladas y coloreadas y su diámetro se encuentra en el rango de entre 0.1 µm y 0.4 mm.
Otro aspecto de la invención, se refiere a los conjugados obtenibles por el método de fabricación anteriormente descrito.
Un tercer aspecto de la invención se refiere a un método de análisis inmunocromatográfico para la detección de alérgenos en alimentos procesados que comprende:
Reivindicaciones:
1. Método para la fabricación de conjugados que comprenden microesferas de poliestireno tapizadas con anticuerpos, adecuados para su uso en una técnica inmunocromatografica, que comprende:
2. Método para la fabricación de conjugados según reivindicación 1, donde los anticuerpos son específicos frente al antígeno de ovomucoide o de ß-lactoglobulina.
3. Método para la fabricación de conjugados según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 donde las microesferas de poliestireno son carboxiladas y coloreadas.
4. Conjugados obtenibles por el método de fabricación según cualquiera de las reivindicaciones 1-3.
5. Método de análisis inmunocromatográfico para la detección de alérgenos en alimentos procesados que comprende:
6. Método según la reivindicación anterior, donde los anticuerpos son específicos frente al antígeno de ovomucoide o de ß-lactoglobulina.
7. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde los anticuerpos control son anti-inmunoglobulinas de conejo.
8. Kit para la detección de alérgenos en una muestra de alimento procesado, que comprende:
9. Uso del kit según reivindicación 8 para la detección de alérgenos en alimentos que contengan leche o huevo.
Patentes similares o relacionadas:
Dispositivos modulares para puntos de atención y usos de los mismos, del 29 de Julio de 2020, de Labrador Diagnostics LLC: Un sistema para la detección automatizada de un analito a partir de una muestra de fluido corporal, que comprende: un dispositivo de fluidos que comprende: […]
Anticuerpos del OPGL, del 15 de Julio de 2020, de AMGEN FREMONT INC.: Un anticuerpo, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde: a) la cadena pesada comprende: 1) una secuencia de aminoácidos recogida […]
Detección de interacciones proteína a proteína, del 15 de Julio de 2020, de THE GOVERNING COUNCIL OF THE UNIVERSITY OF TORONTO: Un método para medir cuantitativamente la fuerza y la afinidad de una interacción entre una primera proteína de membrana o parte de la misma y una […]
ANTICUERPO MONOCLONAL O UNA PORCIÓN DE UNIÓN A ANTÍGENO DEL MISMO QUE SE UNE A LA PROTEÍNA L DEL VIRUS PARAINFLUENZA HUMANO (PIV); MÉTODO Y KIT PARA DETECTAR AL VIRUS PIV, del 2 de Julio de 2020, de PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE: La invención presenta la generación de anticuerpos monoclonales, o fragmentos de los mismos, que reconocen la proteína L del virus parainfluenza humano (PIV), donde dichos […]
ANTICUERPOS MONOCLONALES ESPECÍFICOS PARA EL ANTÍGENO PB2 DEL VIRUS DE LA INFLUENZA HUMANA (FLU), SECUENCIAS NUCLEOTÍDICAS; MÉTODO Y KIT DE DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN PRODUCIDA POR FLU, del 2 de Julio de 2020, de PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE: La invención presenta la generación de anticuerpos monoclonales, o fragmentos de los mismos, que reconocen la proteína PB2 del virus de la influenza humana (Flu), […]
Dispositivo para la detección de analitos, del 1 de Julio de 2020, de TECHLAB, INC.: Un dispositivo para detectar por lo menos una sustancia de interés en una muestra líquida, comprendiendo el dispositivo: (a) una unidad que […]
Un ensayo de la respuesta inmunológica mediada por células, del 17 de Junio de 2020, de Cellestis Limited: Un método para medir una actividad de respuesta inmunológica mediada por células, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar una composición de incubación […]
Método de deducción de un valor de positividad de biomarcador en porcentaje para células seleccionadas presentes en un campo de visión, del 10 de Junio de 2020, de NOVARTIS AG: Método de deducción de un valor para el % de positividad de biomarcador (PBP) para todas las células u, opcionalmente, uno o más subconjuntos de las […]