GEN Y PROTEINA MN.
Un ácido nucleico aislado caracterizado porque tiene actividad reguladora del promotor MN,
contiene al menos 16 nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre las siguientes secuencias de nucleótidos:
(a) la secuencia de nucleótidos del promotor MN según lo mostrado en la figura 6 anexa y las secuencias de nucleótidos complementarias a dicha secuencia de nucleótidos del promotor MN; y
(b) las secuencias de nucleótidos que tienen una homología del al menos 80% con las secuencias de nucleótidos de (a) y con los complementos de dichas secuencias de nucleótidos
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E05076222.
Solicitante: INSTITITE OF VIROLOGY.
Nacionalidad solicitante: Eslovaquia.
Dirección: SLOVAK ACADEMY OF SCIENCES, DUBRAVSKA CESTA 9,842 46 BRATISLAVA.
Inventor/es: ZAVADA,JAN, PASTOREKOVA,SILVIA, PASTOREK,JAROMIR.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 15 de Junio de 1995.
Fecha Concesión Europea: 17 de Febrero de 2010.
Clasificación PCT:
- C07K14/82 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Productos de traducción de oncogenes.
- C12N15/62 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
- C12N15/85 C12N 15/00 […] › para células animales.
- C12N9/88 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Liasas (4.).
Clasificación antigua:
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Italia, Liechtensein.
Fragmento de la descripción:
Gen y proteína MN.
Campo de la invención
La presente invención pertenece al área general de la Genética Médica y a los campos de la Ingeniería Bioquímica y la Inmunoquímica. Más específicamente, se refiere a la identificación de un nuevo gen, el gen MN, un gen celular que codifica a la proteína MN. Los inventores del presente documento descubrieron que las proteínas MN están asociadas con la tumorigenicidad. Las pruebas indican que la proteína MN parece representar un tipo potencialmente nuevo de oncoproteína. La identificación del antígeno MN, así como de los anticuerpos específicos del mismo, en muestras de pacientes proporciona la base para los análisis de diagnóstico/pronóstico del cáncer.
Antecedentes de la invención
Se detectó un nuevo agente cuasi-vírico que tenía propiedades bastante poco comunes por su capacidad para complementar mutantes del Virus de la Estomatitis Vesicular (VSV) con la proteína G superficial lábil al calor en células HeLa (línea celular derivada del adenocarcinoma cervical humano) que habían sido co-cultivadas con células de carcinoma de mama humano. [Zavada et al., Nature Net Biol., 240: 124 (1972); Zavada et al., J. Gen. Virol., 24: 327 (1974); Zavada, J, Arch. Virol., 50: l (1976); Zavada, J., J. Gen. Virol., 63: 15-24 (1982): Zavada y Zavadova, Arch. Virol. 118: 189 (1991)]. El agente cuasi-vírico fue denominado MaTu, pues se suponía que derivaba de un tumor de mama humano.
Había un relevante interés médico por estudiar y caracterizar a MaTu, pues parecía que era un tipo completamente nuevo de parásito molecular de células vivas y que procedía, posiblemente, de un tumor humano. Zavada et al., Publicación internacional número WO 93/18152 (publicada el 1 de septiembre de 1993), describen la dilucidación de la naturaleza biológica y molecular de MaTu, que resultó en el descubrimiento del gen y de la proteína MN. Los inventores descubrieron que MaTu es un sistema de dos componentes que tiene un componente transmisible exógeno, MX, y un componente celular endógeno, MN. Se descubrió que el componente MN era un gen celular, que mostraba sólo muy poca homología con las secuencias de ADN conocidas. Se descubrió que el gen MN estaba presente en el ADN cromosómico de todos los vertebrados analizados y que su expresión estaba muy correlacionada con la tumorigenicidad.
El agente transmisible exógeno MX de MaTu se identificó como el Virus de la Coriomeningitis Linfocítica (LCMV) que infecta de manera continua a las células HeLa. Los inventores descubrieron que la expresión de MN en las células HeLa está regulada positivamente por la densidad celular y que también su nivel de expresión es aumentado por la infección continua con LCMV.
Los resultados de la investigación proporcionados en la presente memoria muestran que las células transfectadas con ADNc de MN sufren cambios que indican una transformación maligna. Otros descubrimientos de la investigación indican que la interrupción del control del ciclo celular es uno de los mecanismos mediante los que MN puede contribuir al complejo proceso del desarrollo tumoral.
En la presente memoria, se describen la clonación y la secuenciación del gen MN y la producción recombinante de proteínas MN. Se proporcionan la secuencia de ADNc de MN de longitud completa [SEC. ID. N.º 1], la secuencia de aminoácidos deducida de la misma [SEC. ID. N.º 2], una secuencia genómica de longitud completa para MN [SEC. ID. N.º 5], que incluye una secuencia promotora propuesta [SEC. ID. N.º 27]. El gen MN comprende once exones [SEC. ID. N.º 28-38] y diez intrones [SEC. ID. N.º 39-48]. También se describe en la presente memoria una región de 1,4 kilobases [SEC. ID. N.º 49] en la mitad de la secuencia genómica de MN, que tiene la característica de una típica isla rica en CpG y que contiene múltiples sitios de unión putativos para los factores de transcripción AP2 y Spl.
También se describen anticuerpos preparados frente a proteínas/polipéptidos. Las proteínas/los polipéptidos MN se pueden usar en los análisis serológicos según esta invención para detectar los anticuerpos específicos de MN. Además, en los inmunoanálisis según esta invención, se pueden usar proteínas/polipéptidos MN y/o anticuerpos reactivos con el antígeno MN para detectar y/o cuantificar el antígeno MN. Tales análisis pueden ser de diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad neoplástica/pre-neoplástica.
Resumen de la invención
En una realización, la presente invención proporciona un ácido nucleico aislado caracterizado porque tiene actividad reguladora del promotor MN, contiene al menos 16 nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre las siguientes secuencias de nucleótidos:
Preferiblemente, tal ácido nucleico aislado comprende una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos:
Más preferiblemente, tal ácido nucleico aislado comprende una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos:
En otra realización, la presente invención proporciona un vector caracterizado porque comprende tal ácido nucleico aislado.
En otra realización más, la presente invención proporciona un ácido nucleico aislado caracterizado porque contiene al menos 16 nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada entre las siguientes secuencias de nucleótidos:
Reivindicaciones:
1. Un ácido nucleico aislado caracterizado porque tiene actividad reguladora del promotor MN, contiene al menos 16 nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre las siguientes secuencias de nucleótidos:
2. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 1, en el que comprende una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos:
3. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 2, en el que comprende una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos:
4. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 2, en el que comprende una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos:
5. Un vector caracterizado porque comprende un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
6. Un ácido nucleico aislado caracterizado porque contiene al menos 16 nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre las siguientes secuencias de nucleótidos:
7. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 6, en el que las secuencias de nucleótidos de (c) tienen una homología del al menos 90% con las secuencias de nucleótidos de (a) y (b).
8. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 6, en el que dicha secuencia de nucleótidos se selecciona entre:
9. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 6, en el que es de 16 a 50 nucleótidos de longitud, preferiblemente, de 19 a 45 nucleótidos de longitud, y funciona como un cebador de la reacción en cadena de la polimerasa para las secuencias de ácidos nucleicos de MN.
10. Un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en la reivindicación 6, en el que es de al menos 27 nucleótidos de longitud o es de al menos 29 nucleótidos de longitud o es de al menos 50 nucleótidos de longitud o es de al menos 100 nucleótidos de longitud o es de al menos 150 nucleótidos de longitud.
11. Un ácido nucleico aislado caracterizado porque contiene al menos 150 nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos seleccionada de entre las siguientes secuencias de nucleótidos: la secuencia de nucleótidos del nucleótido 3.302 al nucleótido 3.771 de la figura 3 anexa y la secuencia de nucleótidos complementaria a la misma.
12. Un vector caracterizado porque comprende un ácido nucleico aislado según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11.
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