Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéutico y la composición preparada en un método que comprende

- extracción de un material vegetal en cloruro de metileno,

- contacto del material extraído con un sistema cromatográfico de separación, y

- elución del sistema cromatográfico de separación con una fase móvil polar para obtener una composición,

en donde el material vegetal es de Mammea Americana, en donde la composición tiene actividad antimicrobiana, y en donde la composición farmacéutica se utiliza como un medicamento

Extractos anti-bacterianos a partir de Mammea americana.

Campo de la invención

Esta invención se refiere al aislamiento y el uso de los compuestos extraídos y purificados de una planta, que tienen actividad anti-microbiana y anti-micobacteriana.

Antecedentes de la invención

El género Mycobacterium incluye numerosas especies bacterianas que causan enfermedad en el hombre, otros mamíferos, y aves. Por ejemplo, M. tuberculosis es el agente causal de la enfermedad infecciosa más frecuente en el mundo de hoy, la tuberculosis. The World Health Organization (WHO) reportó que 1.7 billones de personas (o aproximadamente un tercio de la población mundial) están o han sido infectados en algún momento de sus vidas por la M. tuberculosis. Kochi, A. Tubercle 72:1-6 (1991). Se estima que 10 a 15 millones de personas en EE. UU., tienen infecciones latentes. Morbidity and Mortality Weekly Report 39(RR-8):9-12 (1990). Se calcula que 8 millones de nuevos casos clínicos de tuberculosis ocurren en todo el mundo por año y aproximadamente 3 millones de personas mueren cada año. Morbidity and Mortality Weekly Report 42 (49):961-964 (1993).

Las micobacterias del complejo MAC (fundamentalmente M. avium y M. intracellulare) son patógenos oportunistas en pacientes con SIDA. Aproximadamente el 43% de los pacientes con SIDA en etapas avanzadas de la enfermedad sufren infecciones por MAC. Nightingale et al., J. Infect. Dis. 165:1082-1085 (1992). Además de las infecciones relacionadas con el SIDA, se piensa que M. paratuberculosis, una subespecie de M. avium se asocia con la enfermedad de Crohn, una enfermedad inflamatoria del intestino. Chiodini, R. J. Clin. Micro. Rev. 2:90-117 (1989).

Las micobacterias adicionales que se consideran patógenos humanos, incluyen M. leprae, M kansasii, M. marinum, complejo M. fortuitum, M. bovis, M. scrofulaceu, y M. ulcerans. Baron, S., editor, MEDICAL MICROBIOLOGY, Second Edition, pages 562-564 Addison-Wesley Pub. Co., Menlo Park, CA (1996); Wayne, L. G. et al., Clin. Micro. Rev. 5:1-25 (1992). Existe un estimado de 5.5 millones de casos de infecciones de M. leprae en todo el mundo. Nordeen, S. K. et al., Int. J. Lepr. 63:282-287 (1993).

M. paratuberculosis también causa una inflamación intestinal en rumiantes, más comúnmente conocida como enfermedad de Johne. Thoen, C. O. et al., Rev. Infect. Dis. 3:960-972 (1981). El ganado que resulta positivo para M. paratuberculosi se sacrifica y destruye. La incidencia entre los rebaños en todo el país normalmente oscila entre el 3% y 18%. Merkal, R. S. et al., J. Am. Vet. Med. Assoc. 190:676-680 (1987). El impacto financiero de esta enfermedad en la industria láctea excede textdollar1.5 billones anualmente. Whitlock, R. PROCEED. OF THE THIRD INTERNAT. COLLOQ. PARATUBERCUL., pp.514-522 (1991). M. bovis es otra micobacteria de importancia en medicina veterinaria. M. fortuitum es una bacteria del suelo que ha sido aislada de lesiones en animales y humanos. M. avium causa una enfermedad en los pollos, una grave preocupación para la industria avícola. M. marinum infecta los animales de sangre caliente y el pescado; también ha sido aislado a partir de granulomas superficiales en las extremidades de humanos.

Los extractos de varias cientos de especies de plantas han sido probados a la fecha para actividad anti-cancerosa, anti-microbiana, anti-bacteriana y, algunas veces, anti-micobacteriana. El extracto total o, algunas veces el aceite del tejido de planta que va desde hoja, tronco, y raíz, se demostró que tiene varios niveles de actividad. En la mayoría de los casos, la composición química del material no ha sido descrita. Para una revisión, ver Newton et al., Phytother. Res., 14:303-322 (2000). Ver también Soliman et al., Flavour and Fragrance Journal, 9(1): 29-33 (1994); Hebda, Dissertation Abstracts International, 53(4-C): 737 (1991); Robbs, Dissertation Abstracts International, 58(6-B): 3009 (1997); Kurtulik, Dissertation Abstracts International, 43(4-B): 1050 (1982); Oguntimein, Dissertation Abstracts International, 42(02-B): 577 (1981); Frame et al., P. R. Health Sci. J., 17: 243-252 (1998); Lall et al., J Ethnopharmacol, 66: 347-354 (1999); y Rastogi et al., FEMS Immuno. Med. Microbiol. 20: 267-273 (1998). Por lo tanto, permanece una necesidad para la identificación de compuestos químicos puros y efectivos anti-micobacteriano. Generalmente, los resultados fueron decepcionantes en lo que respecta a la identificación de extractos de planta de plomo con actividad antimicobacteriana. Ver Newton (2000) supra. Sin embargo, ver Rejab et al., Phytotherapy Research, 14: 303-322 (2000), George et al., Phytotherapy Research, 14: 303-322 (2000), y Lall et al, supra.

La naturaleza lipoidal de la pared celular micobacteriana parece contribuir a la supervivencia de la micobacteria haciéndolas resistentes al secado y condiciones ácidas o alcalinas. Por ejemplo, las micobacterias sobreviven a condiciones ácidas o alcalinas y a la esterilización con calor de duración limitada. Se ha demostrado que el Mycobacterium es una bacteria dura, difícil de controlar. Nuevas micobacterias infectivas se pueden recuperar después de varios meses de cultivos viejos o superficies contaminadas. Se necesitan nuevos agentes que puedan controlar la contaminación bacteriana.

Un nuevo temor de tuberculosis ha resultado de los reportes sobre brotes con cepas resistentes a multifármacos de M. tuberculosis (MTB) en los Estados Unidos. Estas cepas son resistentes a al menos la mayoría de los fármacos antituberculóticos importantes, isoniacida y rifampicina. La frecuencia de la tuberculosis resistente a los multifármacos en EE. UU., se reporto que es 3-7% y cerca del 19% en New York. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de nuevos y efectivos agentes antimicobacterianos para reemplazar o adicionar a aquellos en uso en la actualidad.

Resumen de la invención

En un aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéutico y una composición preparada por el método descrito a continuación, en donde la composición farmacéutica se utiliza como un medicamento para inhibir particularmente el crecimiento de un mycobacterium.

De acuerdo con la invención, la composición se prepara en un método que comprende la extracción de un material vegetal en cloruro de metileno, contacto del material extraído con un sistema cromatográfico de separación, y la elución del sistema cromatográfico de separación con una fase móvil polar para obtener una composición. El material vegetal se obtiene de Mammea Americana y la composición tiene actividad antimicrobiana.

De acuerdo con incluso otro aspecto de la invención, se proporciona un método para inhibir el crecimiento de un mycobacterium, que comprende la administración de la composición obtenida por el método anterior. La micobacteria es M. avium, M. bovis, M. intracellulare, M. kansaii, M. leprae, M. marinum, M. phlei, M. scrofulaceum, M. smegmatis, M. fortuitum, M. tuberculosis, o M. ulcerans.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un análisis por Cromatografía de Gases/Espectroscopia de Masas (GC/MS) de una fracción activa de Mammea Americana. El material se preparó por combinación de 4 corridas de HPLC, se concentra a 1 gota a la cual se le adicionaron aproximadamente 0.3 ml de metanol. 10 µl se analizaron por GC/MS. Los picos fueron identificados. El pico a 13 minutos es el cobaltoceno, 1,1',2,2',3,3'.4,4'-octomet, el pico pasados justo 30 minutos es estigmastan-3,5-dieno, y el pico pasados justo 36 minutos es la friedelina.

La Figura 2 es un análisis de Gas Masa/Espectroscopia de Masas (GC/MS) de una fracción activa de Marchantaceae polymorpha (ejemplos comparativos). El material se preparó por combinación de 8 corridas de HPLC, se concentró a 1 gota a la cual se le adicionaron aproximadamente 0.3 ml de metanol. Se analizaron 10 µl por GC/MS. Los picos fueron identificados. El pico a 13 minutos es el cobaltoceno, 1,1',2,2.'',3,3',4,4'-octomet.

La Figura 3 es un análisis Gas Masa/Espectroscopia de Masas (GC/MS) de una fracción activa de Callistemon citrinus (ejemplos comparativos). El material se preparó por combinación de 4 corridas de HPLC, se concentró a 1 gota a la cual se le adicionaron aproximadamente...

1. Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéutico y la composición preparada en un método que comprende

- extracción de un material vegetal en cloruro de metileno,

- contacto del material extraído con un sistema cromatográfico de separación, y

- elución del sistema cromatográfico de separación con una fase móvil polar para obtener una composición,

en donde el material vegetal es de Mammea Americana, en donde la composición tiene actividad antimicrobiana, y en donde la composición farmacéutica se utiliza como un medicamento.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicha planta es Mammea Americana mamey Amarillo.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicha composición comprende estigmastan-3,5-dieno y opcionalmente cobaltoceno-octomet.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde la actividad antimicrobiana es contra un mycobacterium.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, en donde el mycobacterium es M. avium, M. bovis, M. intracellulare, M. kansaii, M. leprae, M. marinum, M. phlei, M. scrofulaceum, M. smegmatis, M. fortuitum, M. tuberculosis, o M. ulcerans.

6. Un método para inhibir el crecimiento de un mycobacterium in vitro, que comprende la administración de una composición como se define en la reivindicación 1.

7. El método de la reivindicación 6, en donde dicho mycobacterium es M. avium, M. bovis, M. intracellulare, M. kansaii, M. leprae, M. marinum, M. phlei, M. scrofulaceum, M. smegmatis, M. fortuitum, M. tuberculosis, o M. ulcerans.

8. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para inhibir el crecimiento de un mycobacterium.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en donde dicho mycobacterium está en un mamífero y dicho mamífero es un humano o un bovino.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 8 o 9, en donde dicho medicamento es para ser administrado por vía oral.

11. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde dicha composición comprende un portador farmacéutico, estigmastan-3,5-dieno, y cobaltoceno-octomet.