Un método de diagnóstico, seguimiento o determinación de la probabilidad de un trastorno renal en un ser humano,

en donde dicho método discrimina entre un trastorno renal y una afección que no afecta a los riñones, dicho método comprende los pasos de

i) determinar la concentración de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) humana en una muestra de un fluido corporal del ser humano,

ii) comparar dicha concentración con un valor de corte predeterminado, dicho valor de corte es de 250 ng/mL o un valor más alto, tal como un valor entre 250 ng/mL y 525 ng/mL, elegido para excluir concentraciones menores de NGAL asociadas con afecciones que no afectan a los riñones, en donde una concentración por encima del valor de corte es indicativa de un trastorno renal

Determinación de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) como marcador de diagnóstico para trastornos renales.

Campo de la invención

La presente divulgación se refiere a métodos para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades humanas por medio de la medida en un fluido corporal de la lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) humana, la concentración anormal de la cual es indicativa de una enfermedad o grupo de enfermedades, en este caso trastornos del riñón que producen función renal disminuida, incluyendo los causados por lesión isquémica (debido a suministro sanguíneo deteriorado al riñón) o exposición a agentes nefrotóxicos o rechazo de un riñón trasplantado. Los métodos son particularmente útiles para la detección temprana de la respuesta renal a lesión isquémica, las consecuencias clínicas o patológicas de la cual típicamente son insuficiencia renal aguda (IRA), necrosis tubular aguda (NTA) o nefropatía tubulointersticial aguda (NTIA), y también se pueden usar para seguir el curso de trastornos renales incluyendo la respuesta a medidas terapéuticas.

Antecedentes de la invención

La detección de lesión isquémica renal que puede producir IRA, NTA ó NTIA ha dependido hasta ahora de los signos clínicos, tales como oliguria y retención de líquidos, combinado con los resultados de pruebas químicas en sangre y orina que muestran una baja excreción de sodio, niveles de creatinina y urea en sangre aumentados y crecientes y, si se mide, una baja depuración de creatinina. Estos signos son indicativos de la presencia de la afección establecida. También se han analizado varios marcadores urinarios de daño tubular renal. De éstos, alfa 1-microglobulina, beta 2-microglobulina (Penders y Delanghe, JR, 2004) y N-acetil-beta-D-glucosaminidasa (NAG) (Kotanko et al., 2000) están aumentados en casos de NTA establecida, pero pueden aparecer sólo 4 ó 5 días después de lesión isquémica o tóxica en animales experimentales. La molécula de lesión renal 1 (KIM-1) también está aumentada en la orina de pacientes con NTA, pero la evolución temporal, aunque probablemente temprana, no se ha establecido en pacientes humanos (Han et al., 2002). La proteína rica en cisteína 61 (CYR61) alcanza un máximo en orina de 6 a 9 horas después de la lesión isquémica en animales experimentales (Muramatsu et al., 2002). Sin embargo, los niveles en seres humanos son todavía desconocidos. Otros marcadores que se han estudiado incluyen clusterina (Aulitzky et al., 1992) y prostaglandina D-sintasa de tipo lipocalina (L-PGDS) (Tsuchida et al., 2004); su utilidad para el diagnóstico temprano o predicción de NTA aún no está clara. Como resultado de la evolución temporal en general lenta de la aparición de estas moléculas marcadoras en orina después de exponer el riñón a isquemia o agentes nefrotóxicos, no han entrado en el uso general para el diagnóstico temprano o trastornos renales inmediatos producidos por estas lesiones.

La lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) también se conoce como lipocalina de neutrófilos (NL; HNL en el caso de lipocalina de neutrófilos humana), lipocalina 2 (LCN2), proteína de 25 kDa relacionada con la alfa 2-microglobulina (en rata) o 24P3 (en ratón). En rata, también se ha denominado, lipocalina relacionada con neu (NRL), ya que su gen se sobreexpresa en tumores mamarios iniciados por el oncogén neu (HER2/c-erbB-2) (Stoesz y Gould, 1995). NGAL es una glicoproteína de 25 kDa aislada primero de los gránulos de leucocitos polimorfonucleares (Triebel et al., 1992; Kjeldsen et al., 1993). Contiene un puente disulfuro y forma una proporción de dímeros y una proporción de menor de trímeros. Está asociada con la colagenasa humana de tipo IV de neutrófilos de 92 kDa, también llamada metaloproteinasa de matriz 9 (MMP-9) o gelatinasa B, bien como monómero formando un complejo de aparentemente 115 kDa (Monier et al., 2000; Yan et al., 2001) o como dímero, formando un complejo de aparentemente 125 kDa (Yan et al., 2001). Se han identificado estos complejos en la orina de pacientes con varios cánceres, incluyendo cánceres de la próstata, vejiga, riñón y mama.

WO2004/088276 A2 describe la determinación de la probabilidad de desarrollar un trastorno renal en un ser humano, en donde se determina la concentración relativa de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) humana en asociación con creatinina y por lo que un nivel elevado que está por encima de un nivel de corte, que es niveles detectables frente a niveles no detectables en orina, es indicativo de un trastorno renal.

NGAL se dio a conocer inicialmente como un marcador de activación de neutrófilos, que se libera a la sangre cuando los microorganismos invasores, en particular bacterias piógenas, causan la desgranulación de los neutrófilos y la exocitosis de las proteínas de los gránulos. Como tal, se cree que la medida de los niveles elevados de NGAL en una muestra de plasma o suero de un ser humano es indicativa de que el individuo padece una inflamación, especialmente una producida por una infección bacteriana (Venge, 2000; patente de EE. UU. 6136526; solicitud de PCT WO95/29404). A este respecto, pero en contradicción con su derivación específica de neutrófilos reivindicada, se identificó NGAL (24P3) como una proteína de fase aguda de tipo 1 en ratón, donde su expresión esta principalmente localizada en el hígado durante la respuesta de fase aguda (Liu y Nilsen-Hamilton, 1995).

La solicitud de patente de EE. UU. 2004/0219603 describe el uso de NGAL como un biomarcador en orina para detectar el inicio temprano de la lesión celular tubular renal. Sin embargo, no se describe si o cómo se puede discriminar la lesión celular tubular renal de la inflamación sistémica o infección bacteriana como la causa del nivel elevado de NGAL.

Compendio de la invención

Se ha encontrado ahora de forma sorprendente que los niveles de NGAL debidos a lesión renal en general son más altos que los niveles de NGAL producidos por afecciones inflamatorias, infecciosas o cancerosas que no afectan a la función renal. Esto ha permitido el establecimiento de métodos para el diagnóstico y/o seguimiento de un trastorno renal en un paciente que distingue trastornos renales de otros trastornos que no afectan al riñón. Mediante trastorno renal se quiere decir cualquier alteración de la función, incluyendo las correlaciones estructurales y ultraestructurales de esa alteración, bien del riñón como un todo o de una o más estructuras celulares de las que se compone, que va más allá de los mecanismos reguladores que mantienen el estado saludable normal. Ejemplos no exclusivos de tales trastornos incluyen afecciones asociadas con isquemia renal tales como necrosis tubular aguda (NTA) o nefropatía tubulointersticial aguda (NTIA), y también incluye insuficiencia renal agua (IRA) o insuficiencia renal crónica (IRC) de cualquier causa, glomerulonefritis agua y crónica de cualquier causa, nefropatía debida a obstrucción urinaria, nefropatía debida a hipertensión, nefropatía asociada con pre-eclampsia o toxemia de embarazo, rechazo o enfermedad recurrente de un riñón trasplantado, así como enfermedades congénitas y neoplásicas del riñón.

Según esto, la presente invención proporciona métodos para el diagnóstico y/o seguimiento de lesión renal en seres humanos, que comprende medir un nivel de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) humana en una muestra de fluido corporal, preferiblemente orina, obtenida del paciente. Los niveles elevados de NGAL son indicativos de lesión renal si son mayores que los niveles menos elevados especificados de NGAL producidos en otros trastornos que no afectan necesariamente a la función renal, tales como afecciones inflamatorias o infecciosas o cánceres. De esta manera, en un primer aspecto, la invención se refiere a un método de diagnóstico, seguimiento o determinación de la probabilidad de un trastorno renal en un ser humano, en donde dicho métodos discrimina entre un trastorno renal y otra afección que no afecta al riñón, dicho método comprende los pasos de

1. Un método de diagnóstico, seguimiento o determinación de la probabilidad de un trastorno renal en un ser humano, en donde dicho método discrimina entre un trastorno renal y una afección que no afecta a los riñones, dicho método comprende los pasos de

2. El método de la reivindicación 1, en donde la muestra es una muestra de orina.

3. El método de la reivindicación 1, en donde la muestra es una muestra de plasma o suero.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la otra afección es un trastorno inflamatorio y el valor de corte se elige para excluir concentraciones menores de NGAL asociadas con trastornos inflamatorios.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el método además discrimina entre un trastorno renal y un trastorno infeccioso y el valor de corte se elige para excluir las concentraciones menores de NGAL asociadas con trastornos infecciosos.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el método además discrimina entre un trastorno renal y un trastorno canceroso y el valor de corte se elige para excluir las concentraciones menores de NGAL asociadas con trastornos cancerosos.

7. El método de seguimiento de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende el paso adicional de repetir los pasos i) y ii) una o más veces.

8. El método de seguimiento de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende el paso adicional de repetir los pasos i) y ii) a las 24 horas, por ejemplo a las 12 horas, tal como a las 6 horas, por ejemplo a las 3 horas.

9. El método de seguimiento de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende el paso adicional de repetir los pasos i) y ii) después de que se haya iniciado o completado un tratamiento del trastorno renal.

10. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el trastorno renal es una lesión renal posisquémica.

11. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el trastorno renal es un trastorno que puede producir insuficiencia renal aguda, necrosis tubular aguda o nefropatía tubulointersticial aguda.

12. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el trastorno renal está producido por un agente nefrotóxico.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende el paso adicional de comparar dicha concentración con un segundo valor de corte, dicho segundo valor de corte se elige para excluir concentraciones menores de NGAL no asociadas con un grado de trastorno renal que requiere tratamiento del paciente por diálisis, en donde una concentración por encima del valor de corte es indicativo de un trastorno renal que requiere tratamiento por diálisis.

14. El método de la reivindicación 13, en donde dicho segundo valor de corte está entre 1000 ng/mL y 3000 ng/mL, tal como 1250 ng/mL, o 1500 ng/mL, o 1750 ng/mL, o 2000 ng/mL, o 2250 ng/mL, o 2750 ng/mL.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde NGAL se mide por medio de una molécula que se une específicamente a NGAL.

16. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el fluido corporal es orina.

17. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el fluido corporal es sangre o plasma o suero.