COMPOSICION COSMETICA O FARMACEUTICA PARA USO TOPICO PARA PREVENIR O TRATAR LA ALOPECIA ANDROGENETICA.

Composición para uso tópico en el sector cosmético o farmacéutico,

que comprende la 3-ß-hidroxiesteroido-óxido-reductasa (3-ß-HSOR) y la 17-a-hidroxiesteroido-óxido-reductasa (17-a-SOR), que tienen ambas un PM de aproximadamente 100.000 D, una coenzima que consiste en nicotinamido-adenin-dinucleótido (NAD) y un vasodilatador complejado con fosfolípidos en solución, comprendiendo dicho vasodilatador en un derivado de ácido nicotínico

Composición cosmética o farmacéutica para uso tópico para prevenir o tratar la alopecia androgenética.

La presente invención se refiere a una composición útil en el tratamiento cosmético-terapéutico de prevención y/o curación de la alopecia o, en general, del defluvium capilar anómalo.

En particular, la presente invención se refiere a una composición enzimática que permite oponerse a las causas que provocan la pérdida de cabello.

Tal como se conoce, la pérdida de cabello es debida a diversas causas, entre ellas la más fiable es atribuible a la acción de enzimas concretas que actúan a nivel de las hormonas sexuales ayudando en su transformación en direcciones determinadas. Así, por ejemplo, en el hombre, la testosterona se puede convertir fácilmente, bajo ciertas condiciones, en dihidrotestosterona que es la principal responsable de la atrofia y de la muerte de los bulbos capilares. Esta reacción de reducción se puede catalizar de hecho mediante la 5-alfa-reductasa presente en las gónadas y próstata masculinas.

Por otro lado, la capacidad general que disponen ciertas enzimas de actuar en un sentido oxidativo o reductor, según las condiciones funcionales, ha inducido a los científicos a buscar combinaciones de enzimas y otros tipos de sustancias para orientar en el sentido deseado la reacción en cuestión. Véase, por ejemplo, en este sentido la Patente de Estados Unidos 5 756 092, la Patente de Japón 62 012 721 y el documento WO 01/66702.

En particular, el último documento mencionado, es decir, la solicitud de Patente internacional WO 01/66702 A1, se refiere a la utilización de 3-a-hidroxiesteroido-óxido-reductasa (3-a-HSOR) y una coenzima con la intención de oxidar la dihidrotestosterona (DHT), convirtiéndola de este modo en una forma posiblemente neutra con respecto a los bulbos capilares.

Las pruebas llevadas a cabo por el solicitante de la presente solicitud, con la misma intención que la solicitud mencionada anteriormente han mostrado, sin embargo, que la combinación propuesta de 3-a-oxidoreductasas con NADP(H)/NAD(H) no es suficiente a efectos de conseguir el efecto deseado. El solicitante ha completado los estudios y ha observado que una combinación de 3-ß-hidroxiesteroido-deshidrogenasa (3-ß-HSD) y/o 17-a-hidroxiesteroido-deshidrogenasa (17-a-HSD), que tiene un peso molecular de aproximadamente 100.000 D, con nicotinamido-adenin-dinucleótido (NAD) en presencia de fosfolípidos obtiene el objetivo buscado.

Por lo tanto, el objetivo de la presente invención es dar a conocer una composición de hidroxiesteroido-deshidrogenasa (HSD), nicotinamido-adenin-dinucleótido (NAD) y fosfolípidos en un medio acuoso adecuado para la aplicación directa en el cuero cabelludo. Dado que, en presencia de, por ejemplo, 3-ß-HSD y 17-ß-HSD, así como de NAD, la testosterona cambia a 4-androsterona-3,17-diona, que está presente en el organismo únicamente como producto de excreción (orina), se intentó conseguir las HSD, cuya acción oxidante será similar a la de dichas sustancias, actuará no sólo in vitro, sino también in vivo (piel), sin desequilibrar el equilibrio hormonal interno, y que será obtenible de una manera relativamente sencilla.

Sabiendo además que una única enzima no es en general suficiente para catalizar ciertas transformaciones bioquímicas, se caracterizó y probó un grupo de enzimas que comprendían sustancialmente 3-ß-hidroxiesteroido-deshidrogenasa (3-ß-HSD) y 17-a-hidroxiesteroido-deshidrogenasa (17-a-HSD), que tienen un peso molecular de aproximadamente 100.000 Dalton y que son extraíbles de cultivos de microorganismos, tales como Pseudomonas testos- teroni.

El objetivo de la presente invención se define en las reivindicaciones.

Esta enzima, o mejor el grupo de enzimas, se encontró por tanto en 3-ß-hidroxiesteroido-deshidrogenasa (3-ß-HSD) y 17-a-hidroxiesteroido-deshidrogenasa (17-a-HSD), que tienen un peso molecular igual a 100.000 Dalton y que son extraíbles de cultivos de microorganismos, tales como Pseudomonas testosteroni.

Se cultivó Pseudomonas testosteroni en un medio mínimo que contenía un 0,2% de dihidrotestosterona (DHT) como la única fuente de energía y, después de una selección y purificación adecuadas mediante cultivos líquidos posteriores en un entorno microhalófilo e incubación a 37ºC, se trató mediante sonicación a efectos de lisar las paredes celulares y obtener el caldo de cultivo. A continuación, se sometió éste último a ultrafiltración estableciendo el tamaño de corte del grupo de enzimas resultantes en 150.000 y 100.000 con el objetivo de dejar fuera las 3-a-hidroxiesteroido-deshidrogenasas que tienen un peso molecular de aproximadamente 47000, y para aislar en cambio la 3-ß-hidroxiesteroido-deshidrogenasa y la 17-a-hidroxiesteroido-deshidrogenasa con un peso molecular de aproximadamente 100.000 D. A continuación, el líquido ultrafiltrado se concentró y se liofilizó para obtener un polvo higroscópico, en el que dichas enzimas seleccionadas tienen una concentración no inferior a un 75%.

A continuación, al polvo con actividad enzimática obtenido de esta manera se añadió NAD (nicotinamido-adenin-dinucleótido) y el total se disolvió en agua y alcohol al 20%, a lo que se añadió una cantidad de fosfolípidos de origen vegetal, suficiente para formar una mezcla semisólida que a continuación se amasó de manera intensa en un mezclador magnético durante 12 horas. A continuación, se añadió agua a la mezcla semisólida a efectos de obtener el desarrollo de los liposomas y, después de una centrifugación a 5000 rpm durante 30 minutos, se concentró la suspensión acuosa al vacío para conseguir la eliminación total de los disolventes y la formación de un polvo que se rehidratará para producir complejos de liposomas y fosfolípidos. Es esencial señalar en este aspecto que la coenzima utilizada fue la nicotinamido-adenin-dinucleótido no hidrogenada (denominada NAD y no NAD(H)).

Se probó in vitro la solución activa de 3-ß-HOSR y 17-a-HSOR, NAD y fosfolípidos para verificar y determinar la absorción a través de membranas semipermeables de origen artificial o natural. Para este fin, se utilizaron celdas de vidrio termostatizadas del tipo Franz siguiendo el protocolo estándar según las sugerencias UNIPRO (Cosmesi Dermatologica, año 12, No. 61, Abril-Junio 1997, página. 31-40) con ligeros cambios.

La figura 1 muestra esquemáticamente en sección longitudinal el tipo de celda utilizada con los ajustes perti- nentes.

Se utilizó piel de cerdo fresca después de reducir el grosor a 1 mm mediante dermoabrasión, eliminar de manera precisa las partes grasas y mantener inalterada la capa callosa, la epidermis y una parte de la verdadera piel. Mediante una máquina sacabocados ("dinking") se obtuvieron membranas circulares con un diámetro de 20 mm, que, a continuación, se examinaron a través de un microscopio electrónico para verificar la ausencia de irregularidades o daños y se colocaron inmediatamente juntas en celdas de tipo Franz con la verdadera piel hacia el líquido receptor (hacia abajo) y la capa callosa hacia el líquido dador (hacia arriba). La duración de cada prueba fue de 24 horas. Cada celda de vidrio sustancialmente cilíndrica utilizada tenía un radio de 20 mm con una superficie circular de intercambio de 12,56 cm² y contenía un volumen de líquido receptor de 22 ml. El líquido receptor de la prueba estaba formada por agua destilada estéril que tenía la siguiente composición salina: NaCl 0,14 M + K₂HPO₄ 2 mM + KH₂PO₄ 0,4 mM, con la adición de 100 IU de penicilina y 100 mg de estreptomicina por ml. La termorregulación se obtuvo mediante una circulación continua del líquido a través de un sistema de termostato/criostato de LKB a 33º pm 1ºC. A intervalos de tiempo regulares de 15 minutos, se efectuó mediante una jeringa una extracción de 10 µl (10 mg) de líquido receptor, para calcular la cantidad de complejo examinado que pasa a través de la membrana del cerdo al líquido receptor por unidad de tiempo.

El complejo enzimático disuelto en agua y analizado presentaba la siguiente composición: 0,5% de 3-ß-HSOR + 17-a-HSOR; 0,5% de NAD y 99% de fosfolípidos. Con fines comparativos, en una prueba paralela se sustituyeron los fosfolípidos por una cantidad igual (99%) de un vehículo inerte formado por maltodextrinas. A efectos de actuar bajo las mismas condiciones de presión osmótica, tanto la muestra de prueba como la de referencia se disolvieron en cantidades iguales de líquido...

1. Composición para uso tópico en el sector cosmético o farmacéutico, que comprende la 3-ß-hidroxiesteroido-óxido-reductasa (3-ß-HSOR) y la 17-a-hidroxiesteroido-óxido-reductasa (17-a-SOR), que tienen ambas un PM de aproximadamente 100.000 D, una coenzima que consiste en nicotinamido-adenin-dinucleótido (NAD) y un vasodilatador complejado con fosfolípidos en solución, comprendiendo dicho vasodilatador en un derivado de ácido nicotínico.

2. Composición, según la reivindicación 1, caracterizada porque comprende también agentes auxiliares, aditivos, fármacos y principios activos.

3. Composición, según la reivindicación 1 ó 2, para su uso como medicamento.

4. Composición, según la reivindicación 1 ó 2, para su uso en el tratamiento de la alopecia humana.