METODO DE DETECCION Y CULTIVO DE PARTICULAS BIOLOGICAS QUE SE DUPLICAN AUTONOMAMENTE Y QUE SE PUEDEN FILTRAR ESTERILMENTE.

NUEVAS PARTICULAS BIOLOGICAS QUE SE DUPLICAN DE FORMA AUTONOMA Y QUE SE PARECEN A LAS BACTERIAS,

CON PROPIEDADES MUY SORPRENDENTES, QUE SE DESCUBRIERON EN UN CULTIVO DE CELULAS Y OTRAS MUESTRAS BIOLOGICAS QUE SE ALEGABAN ESTERILES DE ACUERDO CON LOS METODOS DE TESTADO QUE SE PRACTICAN EN LA ACTUALIDAD. ESTOS AGENTES DE CRECIMIENTO LENTO LLAMADOS NANOBACTERIAS SON MAS PEQUEÑOS QUE CUALQUIER BACTERIA CON PARED CELULAR CONOCIDA. PASAN A TRAVES DE FILTROS ESTERILES, INCLUSO CON POROS DE UN TAMAÑO INFERIOR A SU DIAMETRO. NO SE PUEDEN CULTIVAR EN NINGUN MEDIO BIOLOGICO ESTANDAR. SE SUELEN DETECTAR, CON LOS METODOS DE AISLAMIENTO Y DETECCION QUE SE INDICAN AQUI, EN SUERO HUMANO O ANIMAL. ESTA PATENTE SE REFIERE A METODOS DE CULTIVO, DETECCION, PURIFICACION, Y ELIMINACION DE ESTAS PARTICULAS, Y DESCRIBE LOS AGENTES NECESARIOS PARA ELLO. LAS PARTICULAS QUE SE DUPLICAN DE FORMA AUTONOMA SE PUEDEN CULTIVAR EN RPMI 1640, O EN DMEM, O EN OTROS MEDIOS DE CULTIVO DE CELULAS. SE PUEDE OBTENER UN CRECIMIENTO OPTIMO AÑADIENDO AL MEDIO DE CULTIVO 10-20% DE SUERO BOVINO FETAL ESTERIL. LA ADICION DE PEQUEÑAS CANTIDADES DE SELENOMECIONINA D, L O L JUNTO CON LOS PRECURSORES NUCLEOTIDOS PUEDE MEJORAR EL CRECIMIENTO. EL CULTIVO DA COMIENZO POR LA ADICION DE LA MUESTRA DE TEST AL MEDIO EN UN FRASCO DE CULTIVO CELULAR QUE SE INCUBA LUEGO BAJO CONDICIONES ESTANDAR DE CULTIVOS DE CELULAS DE MAMIFEROS DURANTE AL MENOS 15 DIAS. LAS MUESTRAS BIOLOGICAS SE FILTRAN PREFERIBLEMENTE CON FILTROS ESTERILES ANTES DEL CULTIVO A TRAVES DE FILTROS DE 0.22 MICRONES. EL CRECIMIENTO DE NANOBACTERIAS, SI ESTA PRESENTE, SE PUEDE VER UTILIZANDO UN MICROSCOPIO DE ALTO AUMENTO. SE PUEDEN HACER MAS VISIBLES LOS ORGANISMOS CON MANCHAS DE ADN Y MANCHAS DE INMUNIDAD, LO CUAL SE PUEDE HACER DE FORMA SEPARADA O SIMULTANEA RESPECTO A UNA PREPARACION FIJA. LAS NANOBACTERIAS SE PUEDEN CULTIVAR SIN CELULAS MAMIFERAS, PERO ES UTIL EL CO-CULTIVO JUNTO CON UNA LINEA CELULAR ADHERENTE COMO LA 3T6 PORQUE LAS CELULAS 3T6 PUEDEN ABSORBER NANOBACTERIAS EN SU INTERIOR. ESTO AYUDA AL MANCHADO DE LAS PREPARACIONES. LOS AGENTES INTRACELULARES NO SE PIERDEN DURANTE LA FIJACION Y EL MANCHADO. LOS ANTIGENOS NANOBACTERIALES SE PUEDEN PREPARAR MEDIANTE METODOS DE CULTIVO ESPECIFICO, COSECHA, PURIFICACION Y SOLUBILIZACION. LA INMUNIZACION DE CONEJOS CON EL ANTIGENO SOLUBILIZADO (TRATAMIENTO CON PROTEINASA K Y CON 1 N HCI) PRODUCE ANTICUERPOS ALTAMENTE ESPECIFICOS A LAS NANOBACTERIAS. LA IRRADIACION DE RAYOS GAMMA DE SUERO DE CULTIVOS A 2.5-4.0 MEGARADES, PREFERIBLEMENTE EN ADICION AL TRATAMIENTO QUE UTILIZA ANTICUERPOS UNIDOS DE FASE SOLIDA, PERMITE LA PREPARACION DE SUERO LIBRE DE NANOBACTERIAS. LA UTILIZACION DE ESTE SUERO CREA UN MEDIO ESTERIL DE CULTIVO PARA EL CULTIVO Y DETECCION DE NANOBACTERIAS. EL MANCHADO DOBLE QUE COMBINA LA MANCHA HOECHST NO. 33528 Y LA INMUNOFLUORESCENCIA DISTINGUE ESPECIFICAMENTE LAS NANOBACTERIAS DE OTROS CONTAMINANTES DE CULTIVOS DE CELULAS.