Variantes del antígeno de células madre de próstata (PSCA) y subsecuencias de las mismas.

Un procedimiento in vitro para detectar la presencia de un polinucleótido de PSCA en una muestra de ensayoderivada de un individuo como un indicador de la presencia de cáncer que comprende:



poner en contacto la muestra con una sonda que se une específicamente al polinucleótido de PSCA, ydetectar la unión de la sonda con el polinucleótido de PSCA, seleccionándose el polinucleótido de PSCA del grupoque consiste en:

(a) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993;

(b) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 521 es T;

(c) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 578 es C;

(d) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 649 es G;

(e) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 653 es T;

(f) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 721 es A;

(g) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 781 es A;

(h) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 788 es G;

(i) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al993, en el que el resto nucleotídico en 989 es A; y

(j) un polinucleótido completamente complementario de un polinucleótido de una cualquiera de (a) a (i);en el que la etapa de detección comprende comparar una cantidad de unión de la sonda que se uneespecíficamente al polinucleótido de PSCA con la cantidad de unión de la sonda al polinucleótido en una muestra detejido normal correspondiente, y en el que la presencia de polinucleótido de PSCA elevado en la muestra de ensayoen relación con la muestra de tejido normal proporciona un indicio de la presencia de cáncer.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/017231.

Solicitante: AGENSYS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 2225 COLORADO BOULEVARD SANTA MONICA CA 90404 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: JAKOBOVITS, AYA, CHALLITA-EID, PIA, M., RAITANO, ARTHUR, B., GE,WANGMAO.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K14/47 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de mamíferos.
  • C07K14/705 C07K 14/00 […] › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
  • C12Q1/68 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • G01N33/574 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para el cáncer.

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Fragmento de la descripción:

Variantes del antígeno de células madre de próstata (PSCA) y subsecuencias de las mismas

Campo técnico

La invención descrita en el presente documento se refiere a genes y sus proteínas codificadas, denominadas PSCA, expresadas en ciertos cánceres, y a procedimientos de diagnóstico y terapéuticos y a composiciones útiles en el tratamiento de cánceres que expresan PSCA.

Antecedentes de la técnica El cáncer es la segunda causa principal de muerte humana junto a enfermedades coronarias. En todo el mundo, miles de personas mueren de cáncer cada año. Solamente en los Estados Unidos, como ha notificado la Sociedad Americana del Cáncer, el cáncer provoca la muerte de más de medio millón de personas anualmente, con más de 1, 2 millones de nuevos casos diagnosticados cada año. Mientras que las muertes de enfermedad coronaria han estado reduciéndose significativamente, las resultantes de cáncer generalmente están en aumento. Se predice que en la primera parte del próximo siglo el cáncer se convertirá en la principal causa de muerte.

En todo el mundo, varios cánceres destacan como los principales causante de muerte. En particular, carcinomas de pulmón, próstata, mama, colon, páncreas y ovario representan las principales causas de muerte por cáncer. Estos y virtualmente todos los demás carcinomas comparten una característica letal común. Con muy pocas excepciones, la enfermedad metastásica de un carcinoma es letal. Además, incluso para los pacientes con cáncer que inicialmente sobreviven a sus cánceres primarios, la experiencia habitual ha mostrado que sus vidas se alteran de forma drástica. Muchos pacientes con cáncer experimentan fuertes ansiedades impulsadas por la consciencia del potencial de recurrencia o fallo de tratamiento. Muchos pacientes con cáncer experimentan debilidades físicas después del tratamiento. Además, muchos pacientes con cáncer experimentan recurrencia.

En todo el mundo, el cáncer de próstata es el cuarto cáncer más prevalente en hombres. En Norteamérica y el Norte de Europa, es con diferencia el cáncer más habitual en hombres y es la segunda causa de muerte por cáncer en hombres. En los Estados Unidos solamente, más de 30.000 hombres mueren anualmente de esta enfermedad, superado sólo por el cáncer de pulmón. A pesar de la magnitud de estas cifras, no existe tratamiento eficaz para cáncer de próstata metastásico. La prostatectomía quirúrgica, radioterapia, terapia de ablación hormonal, castración quirúrgica y quimioterapia continúan siendo las principales modalidades del tratamiento. Desafortunadamente, estos tratamientos son ineficaces para muchos y con frecuencia están asociados con consecuencias no deseables.

Con respecto al diagnóstico, la falta de un marcador tumoral de próstata que pueda detectar de forma precisa tumores localizados de etapa temprana sigue siendo una limitación significativa en el diagnóstico y tratamiento de esta enfermedad. Aunque el ensayo de antígeno específico de próstata de suero (PSA) ha sido una herramienta muy útil, sin embargo su especificidad y utilidad general se considera ampliamente insuficiente en varios aspectos importantes.

El progreso en la identificación de marcadores específicos adicionales para cáncer de próstata ha mejorado por la generación de xenotrasplantes de cáncer de próstata que pueden recapitular diferentes etapas de la enfermedad en ratones. Los xenotrasplantes de LAPC (Cáncer de Próstata de Los Ángeles) son xenotrasplantes de cáncer de próstata que han sobrevivido al pase en ratones inmunodeficientes combinados graves (SCID) y han mostrado la capacidad de imitar la transición de dependencia de andrógenos a independencia de andrógenos (Klein y col., 1997, Nat. Med. 3: 402) . Marcadores de cáncer de próstata más recientemente identificados incluyen PCTA-1 (Su y col., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7252) , antígeno de membrana específico de próstata (PSM) (Pinto y col., Clin Cancer Res 1996 Sep 2 (9) : 1445-51) , STEAP (Hubert, y col., Proc Natl Acad Sci USA. 1999 Dec 7; 96 (25) : 145238) y antígeno de células madre de próstata (PSCA) (Reiter y col., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 1735) .

Aunque marcadores previamente identificados tales como PSA, PSM, PCTA y PSCA han facilitado intentos de diagnosticar y tratar cáncer de próstata, existe la necesidad de identificación de marcadores adicionales y dianas terapéuticas para cánceres de próstata y relacionados para mejorar adicionalmente el diagnóstico y la terapia.

El carcinoma de células renales (RCC) representa aproximadamente el 3 por ciento de los tumores malignos adultos. Una vez que los adenomas alcanzan un diámetro de 2 a 3 cm, existe potencial de malignidad. En el adulto, los dos tumores renales malignos principales son adenocarcinoma de células renales y carcinoma de células transicionales de la pelvis renal o uréter. La incidencia de adenocarcinoma de células renales se estima en más de 29.000 casos en los Estados Unidos y más de 11.600 pacientes murieron de esta enfermedad en 1998. El carcinoma de células transicionales es menos frecuente, con una incidencia de aproximadamente 500 casos por año en los Estados Unidos.

La cirugía ha sido la terapia primaria para adenocarcinoma de células renales durante muchas décadas. Hasta recientemente, la enfermedad metastásica ha sido refractaria para cualquier terapia sistémica. Con los recientes desarrollos en terapias sistémicas, particularmente inmunoterapias, el carcinoma de células renales metastásico puede enfocarse de forma agresiva en pacientes apropiados con una posibilidad de respuestas duraderas. Sin embargo, sigue existiendo una necesidad de terapias eficaces para estos pacientes.

De todos los nuevos casos de cáncer en los Estados Unidos, el cáncer de vejiga representa aproximadamente el 5 por ciento en los hombres (quinta neoplasia más habitual) y 3 por ciento en las mujeres (octava neoplasia más habitual) . La incidencia está aumentando lentamente, de forma simultánea con una población crecientemente más vieja. En 1998, hubo una estimación de 54.500 casos, incluyendo 39.500 en hombres y 15.000 en mujeres. La incidencia ajustada por edad en los Estados Unidos es 32 por 100.000 para hombres y 8 por 100.000 en mujeres. La relación hombre/mujer histórica de 3:1 puede reducirse en relación con los patrones de tabaquismo en mujeres. Hubo una estimación de 11.000 muertes de cáncer de vejiga en 1998 (7.800 en hombres y 3.900 en mujeres) . La incidencia del cáncer de vejiga y la mortalidad aumentan fuertemente con la edad y serán un problema creciente a medida que la población se hace más vieja.

La mayoría de los cánceres de vejiga recurren en la vejiga. El cáncer de vejiga se trata con una combinación de resección transuretral de la vejiga (TUR) y quimioterapia intravesicular o inmunoterapia. La naturaleza multifocal y recurrente del cáncer de vejiga señala las limitaciones de la TUR. La mayoría de los cánceres invasivos de músculo no se curan por TUR solamente. La cistectomia radical y derivación urinaria es el medio más eficaz para eliminar el cáncer pero porta un impacto innegable en la función urinaria y sexual. Continúa existiendo la necesidad de modalidades de tratamiento que sean beneficiosas para pacientes con cáncer de vejiga.

Se estima que 130.200 casos de cáncer colorrectal se produjeron en 2000 en los Estados Unidos, incluyendo 93.800 casos de cáncer de colon y 36.400 de cáncer rectal. Los cánceres colorrectales son los terceros cánceres más habituales en hombres y mujeres. Las tasas de incidencia se redujeron significativamente durante 1992-1996 (-2, 1 % por año) . La investigación sugiere que estas reducciones se han debido al aumento de la exploración y retirada de pólipos, evitando la progresión de pólipos a cánceres invasivos. Hubo una estimación de 56.300 muertes (47.700 de cáncer de colon, 8.600 de cáncer rectal) en 2000, lo que supone aproximadamente 11 % de todas las muertes por cáncer en Estados Unidos.

En la actualidad, la cirugía es la forma más habitual de terapia para cáncer colorrectal y para cánceres que no se han propagado, es con frecuencia curativa. Se administra quimioterapia, o quimioterapia más radiación, antes o después de la cirugía a la mayoría de los pacientes cuyo cáncer ha perforado en profundidad la pared del intestino o se ha propagado a los ganglios linfáticos. En ocasiones es necesaria una colostomía permanente (creación de una abertura abdominal para eliminación de residuos corporales) para cáncer de colon y se requiere de forma infrecuente... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un procedimiento in vitro para detectar la presencia de un polinucleótido de PSCA en una muestra de ensayo derivada de un individuo como un indicador de la presencia de cáncer que comprende:

poner en contacto la muestra con una sonda que se une específicamente al polinucleótido de PSCA, y detectar la unión de la sonda con el polinucleótido de PSCA, seleccionándose el polinucleótido de PSCA del grupo que consiste en:

(a) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993;

(b) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 521 es T;

(c) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 578 es C;

(d) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 649 es G;

(e) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 653 es T;

(f) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 721 es A;

(g) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 781 es A;

(h) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 788 es G;

(i) un polinucleótido que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 11, desde el resto nucleotídico número 424 al 993, en el que el resto nucleotídico en 989 es A; y

(j) un polinucleótido completamente complementario de un polinucleótido de una cualquiera de (a) a (i) ;

en el que la etapa de detección comprende comparar una cantidad de unión de la sonda que se une específicamente al polinucleótido de PSCA con la cantidad de unión de la sonda al polinucleótido en una muestra de tejido normal correspondiente, y en el que la presencia de polinucleótido de PSCA elevado en la muestra de ensayo en relación con la muestra de tejido normal proporciona un indicio de la presencia de cáncer.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el polinucleótido de PSCA es un ADNc producido a partir de la muestra por transcripción inversa.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el polinucleótido es un ARNm.

4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de la próstata, vejiga, riñón, colon, pulmón, ovario, mama y páncreas.

5. Un procedimiento in vitro para detectar la presencia de una proteína PSCA que tiene una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº: 14, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 y 28 en una muestra de ensayo derivada de un individuo como un indicador de la presencia de cáncer que comprende:

poner en contacto la muestra con un anticuerpo o fragmento del mismo que se une específicamente a la proteína PSCA, y detectar una cantidad de unión del anticuerpo o fragmento del mismo con la proteína PSCA en la muestra de ensayo y comparar la unión del anticuerpo o fragmento del mismo con la proteína en una muestra de tejido normal, en el que la presencia de proteína PSCA elevada en la muestra de ensayo en relación con la muestra de tejido normal proporciona un indicio de la presencia de cáncer.

6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el anticuerpo o fragmento del mismo es monoclonal.

7. El procedimiento de la reivindicación 5 ó 6 en el que la etapa de detección comprende comparar una cantidad de unión de un anticuerpo que se une específicamente con la proteína PSCA en la muestra de ensayo y en una muestra normal correspondiente.

8. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el cáncer se selecciona del grupo del consiste en cáncer de la próstata, vejiga, riñón, colon, pulmón, ovario, mama y páncreas.

Fig. 2A

La secuencia de ADNc (SEC ID Nº: 3) y aminoácidos (SEC ID Nº: 6) de PSCA v.1. La secuencia Kozak se muestra en negrita, la metionina de partida está subrayada. La fase abierta de lectura se extiende desde el ácido nucleico 18 al 389 incluyendo el codón de parada.

Fig. 2B

La secuencia de ADNc (SEC ID Nº: 1) y aminoácidos (SEC ID Nº: 4) de PSCA v.2. La secuencia Kozak se muestra en negrita, la metionina de partida está subrayada. La fase abierta de lectura se extiende desde el ácido nucleico 56 al 427 incluyendo el codón de parada.

Fig. 2C

La secuencia de ADNc (SEC ID Nº: 7) aminoácidos (SEC ID Nº: 10) de PSCA v.3. La secuencia Kozak se muestra en negrita, y la metionina de partida está subrayada. La fase abierta de lectura se extiende desde el ácido nucleico 423 al 707 incluyendo el codón de parada.

Fig. 2D

La secuencia de ADNc (SEC ID Nº: 11) y aminoácidos (SEC ID Nº: 14) de PSCA v.4. La metionina de partida está subrayada. La fase abierta de lectura se extiende desde el ácido nucleico 424 al 993 incluyendo el codón de parada.

Fig. 2E

La secuencia de ADNc (SEC ID Nº: 15) y aminoácidos (SEC ID Nº: 18) de PSCA v.5. La metionina de partida está subrayada. La fase abierta de lectura se extiende desde el ácido nucleico 910 al 1479 incluyendo el codón de parada.

Fig. 2F

La secuencia de ADNc (SEC ID Nº: 19) y aminoácidos (SEC ID Nº: 20) de PSCA v.6. La secuencia Kozak se muestra en negrita, la metionina de partida está subrayada. La fase abierta de lectura se extiende desde el ácido nucleico 83 al 427 incluyendo el codón de parada.

Fig. 2G

Variantes de SNP de PSCA v.2, PSCA v.7 a v.18. Las proteínas PSCA v.7 a v.18 tienen 123 aminoácidos. Las Variantes PSCA v.7 a v.18 son variantes con diferencia de nucleótido sencillo de PSCA v.2, y codifican la misma proteína que v.2. Aunque estas variantes de SNP se muestran por separado, también pueden aparecer en cualquier combinación y en cualquiera de las variantes de transcrito enumeradas anteriormente en las Figuras 2A a 2F.

Variante Posición de ácido nucleico Variación de ácido nucleico Variación de aminoácido PSCA v.7 367 C/T Variante silenciosa PSCA v.8 424 A/C Variante silenciosa PSCA v.9 495 C/G Variante silenciosa PSCA v.10 499 C/T Variante silenciosa PSCA v.11 563 C/T Variante silenciosa PSCA v.12 567 G/A Variante silenciosa PSCA v.13 627 G/A Variante silenciosa PSCA v.14 634 T/G Variante silenciosa PSCA v.15 835 G/A Variante silenciosa PSCA v.16 847 G/A Variante silenciosa PSCA v.17 878 G/A Variante silenciosa PSCA v.18 978 C/G Variante silenciosa

Fig. 2H

Variantes de SNP de PSCA v.4, PSCA v.19 a v.30. Las proteínas PSCA v.19 a v.30 tienen 189 aminoácidos. Las variantes de PSCA v.19 a v.30 son variantes con diferencia de nucleótido sencillo de PSCA v.4. Las proteínas PSCA v.9, v.10, v.11, v.24 y v.25 difieren de PSCA v.1 en un aminoácido. PSCA v.23, v.28, v.29 y v.30 codifican la misma proteína que v.4. Aunque estas variantes de SNP se muestran por separado, también pueden aparecer en cualquier combinación y en cualquiera de las variantes de transcrito v.3 y v.4.

Variante Posición de ácido nucleico Variación de ácido nucleico Posición de amionácido Variación de aminoácido PSCA v.19 521 C/T 33 P/L PSCA v.20 578 A/C 52 Y/S PSCA v.21 649 C/G 76 H/D PSCA v.22 653 C/T 77 P/L PSCA v.23 717 C/T 98 Variante silenciosa PSCA v.24 721 G/A 100 A/T PSCA v.25 781 G/A 120 G/S PSCA v.26 788 T/G 122 I/S PSCA v.27 989 G/A 189 R/Q PSCA v.28 1001 G/A Variante silenciosa PSCA v.29 1032 G/A Variante silenciosa PSCA v.30 1132 C/G Variante silenciosa

Fig. 3A Secuencia de aminoácidos de PSCA v.1 (SEC ID Nº: 6) . La proteína PSCA v.1 tiene 123 aminoácidos.

Fig. 3B Secuencia de aminoácidos de PSCA v.3 (SEC ID Nº: 10) . La proteína PSCA v.3 tiene 94 aminoácidos.

Fig. 3C Secuencia de aminoácidos de PSCA v.4 (SEC ID Nº: 14) . La proteína PSCA v.4 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3D Secuencia de aminoácidos de PSCA v.6 (SEC ID Nº: 20) . La proteína PSCA v.6 tiene 114 aminoácidos.

Fig. 3E Secuencia de aminoácidos de PSCA v.19 (SEC ID Nº: 21) . La proteína PSCA v.19 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3F Secuencia de aminoácidos de PSCA v.20 (SEC ID Nº: 22) . La proteína PSCA v.20 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3G Secuencia de aminoácidos de PSCA v.21 (SEC ID Nº: 23) . La proteína PSCA v.21 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3H Secuencia de aminoácidos de PSCA v.22 (SEC ID Nº: 24) . La proteína PSCA v.22 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3I Secuencia de aminoácidos de PSCA v.24 (SEC ID Nº: 25) . La proteína PSCA v.24 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3J Secuencia de aminoácidos de PSCA v.25 (SEC ID Nº: 26) . La proteína PSCA v.25 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3K Secuencia de aminoácidos de PSCA v.26 (SEC ID Nº: 27) . La proteína PSCA v.26 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 3L Secuencia de aminoácidos de PSCA v.27 (SEC ID Nº: 28) . La proteína PSCA v.27 tiene 189 aminoácidos.

Fig. 4

Alineamiento de PSCA v.4 (SEC ID Nº: 14) con homólogos conocidos Alineamiento con antígeno de células madre de próstata humana (gi 27482160) (SEC ID Nº: 30) Puntuación = 277 bits (708) , Expectativa .

8. 74 Identidades = 187/189 (98%) , Positivos = 187/189 (98%)


 

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