Sistema para tratar y prevenir cáncer de mama.

Una composición farmacéutica para inducir una respuesta inmunológica frente a una célula que expresa un antígeno asociado con cáncer de mama en un ser humano que tiene cáncer de mama o con riesgo de desarrollar cáncer de mama,

que comprende:

(a) un primer vector que contiene uno o más segmentos de ADN que codifican (i) mucina (MUC) o una porción antigénica de la misma o una versión modificada de la misma, en el que la versión modificada de la misma comprende SEC ID NO: 2, y (ii) antígeno carcinoembriónico (CEA) o una porción antigénica del mismo o una versión modificada del mismo, en el que la versión modificada del mismo comprende SEC ID NO: 4, y

(b) al menos un segundo vector que contiene uno o más segmentos de ADN que codifican (i) MUC o una porción antigénica de la misma o una versión modificada de la misma, en el que la versión modificada de la misma comprende SEC ID NO: 2, y (ii) CEA o una porción antigénica del mismo o una versión modificada del mismo, en el que la versión modificada del mismo comprende SEC ID NO: 4,

en el que el segundo vector es para la administración al ser humano a intervalos regulares tras la administración del primer vector.

Sistema para tratar y prevenir cïncer de mama CAMPO DE LA INVENCIïN

La presente invenciïn se refiere al campo de inmunizaciones, y al uso de inmunoterapia de direccionamiento especïfico para tratar cïncer de mama, y/o afectar a la progresiïn de tal cïncer. La presente invenciïn tambiïn se refiere a vectores y mïtodos que implican inmunoterapia del cïncer humano.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIïN

El cïncer de mama es una enfermedad que mata alrededor de 45.000 mujeres cada aïo en los Estados Unidos de Amïrica solo. Alrededor de 180.000 nuevos casos de cïncer de mama son diagnosticados anualmente, y se estima que una de cada ocho mujeres desarrollan cïncer de mama anualmente. Sin embargo, el diagnïstico del “cïncer de mama” comprende un nïmero de cïlulas cancerosas genïticamente diversas. Como resultado, diferentes tumores de mama tienen diferentes pronïsticos y responden de forma diferente a regïmenes de tratamiento. Por ejemplo, los tumores de mama que expresan HER-2/neu tienen peor pronïstico que los tumores que no expresan HER-2/neu. Ademïs, debido a la inestabilidad genïtica conocida, el patrïn de expresiïn gïnica de las cïlulas cancerosas cambia durante diferentes etapas de la enfermedad, asï como en respuesta a los regïmenes de tratamiento.

Actualmente, un patïlogo clasifica las cïlulas tumorales segïn sus patrones inmunohistolïgicos y usando micromatrices de ADNc y otros mïtodos de medida de la expresiïn gïnica, y/o mediante mïtodos de detecciïn de mutaciones, todos los cuales estïn comercialmente disponibles. La informaciïn se usa para clasificar tumores y, en algunos casos, proporcionar pronïstico para pacientes con el tumor. Sin embargo, en sïlo unos pocos mïtodos de tratamiento, la clasificaciïn es de uso prïctico cuando se determinan los regïmenes de tratamiento, debido a que la mayorïa de los mïtodos terapïuticos actualmente disponibles son no discriminatorios y estïn dirigidos generalmente contra cïlulas que se dividen rïpidamente. Actualmente, un individuo diagnosticado con cïncer de mama se puede tratar con cirugïa, terapia hormonal, quimioterapia, y/o radiaciïn. Si el paciente desarrolla enfermedad metastïsica, se necesita radiaciïn y quimioterapia de dosis elevada para extirpar el cïncer en ïreas remotas tales como el cerebro, hueso, e hïgado. La mayorïa de terapias actualmente disponibles para el tratamiento de cïncer de mama son tïxicas, peligrosas, no especïficas, costosas, y muchas son ineficaces, especialmente en el tratamiento de enfermedad metastïsica.

Por lo tanto, aunque la exactitud en el diagnïstico de tipos especïficos de cïncer de mama ha mejorado significativamente, sïlo unos pocos tratamientos se pueden diseïar actualmente para el usuario para satisfacer las necesidades especïficas de un paciente individual, teniendo en cuenta las diferencias en el perfil de expresiïn y/o mutaciones en los diferentes tipos de cïlulas cancerosas. Por ejemplo, el cïncer de mama en el que las cïlulas cancerosas expresan un mayor nïmero de receptores de estrïgenos es sensible al tratamiento con bloqueadores del receptor de estrïgenos, tales como tamoxifeno, mientras que el cïncer con cïlulas que no tienen nïmero excesivo de receptores de estrïgenos no responderï a tal tratamiento.

Como resultado de los avances en genïtica, ya se ha identificado un gran nïmero de genes implicados en diferentes tipos de cïncer de mama, incluyendo BRCA1 (Herencia Mendeliana del Hombre en Lïnea (OMIM) #113705) , BRCA2 (OMIM #600185) , BRCATA (OMIM #600048) , BRCA3 (OMIM #605365) , BWSCR1A (OMIM #602631) , el gen TP53 (OMIM #191170) , el gen BRIP1 (OMIM #605882) , y el gen RB1CC1 (OMIM #606837) en 8q11. Se han encontrado mutaciones en el gen del receptor de andrïgenos (AR; OMIM #313700) en el cromosoma X en casos de cïncer de mama masculino (OMIM #313700.0016) . Se encontrï una mutaciïn en el gen RAD51 (OMIM #179617) en pacientes con cïncer de mama familiar (OMIM #179617.0001) . Se ha demostrado que el alelo 1100delC del gen CHEK2 (OMIM #604373.0001) confiere una mayor susceptibilidad a cïncer de mama en mujeres, y especialmente en los hombres. Ademïs, los genes NCOA3 (OMIM #601937) y ZNF217 (OMIM #602967) , situados en 20q, sufren amplificaciïn en cïncer de mama; cuando se sobreexpresan, estos genes confieren fenotipos celulares consistentes con un papel en la formaciïn de tumores (Anzick et al., Science 277: 965-968, 1997; Collins et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 95: 8703-8748, 1998) . Ademïs, el gen PPM1D (OMIM #605100) en 17q estï normalmente amplificado en cïncer de mama, y parece conducir a la transformaciïn celular al abolir la actividad supresora del tumor p53 (OMIM #191170) (Bulavin et al., Nature Genet. 31: 210-215, 2002) . Por lo tanto, serïa ventajoso desarrollar un sistema de tratamiento que pudiese utilizar la informaciïn especïfica que se puede obtener del anïlisis genïtico y de expresiïn. Ademïs, serïa ïtil desarrollar un sistema que se pudiese adaptar adicionalmente para tratar todos los tipos diferentes de cïnceres de mama. Tal sistema serïa menos tïxico y proporcionarïa un tratamiento mïs eficaz que los regïmenes no especïficos disponibles hasta la fecha.

Un enfoque reciente al tratamiento del cïncer es la inmunoterapia, que se basa en la observaciïn de que las cïlulas tumorales humanas expresan una variedad de antïgenos asociados a tumores (TAAs) que no se expresan, o que se expresan mïnimamente, en tejidos normales. Estos antïgenos, que incluyen antïgenos de tumores vïricos, proteïnas oncogïnicas celulares, y antïgenos de diferenciaciïn especïficos de tejidos, pueden servir como dianas para el sistema inmunitario del hospedante y provocar respuestas que dan como resultado la destrucciïn del tumor. Esta respuesta inmunitaria estï mediada principalmente por linfocitos; las cïlulas T en general, y los linfocitos T

citotïxicos restringidos a MHC clase I en particular, desempeïan un papel central en el rechazo de tumores. Desafortunadamente, como se evidencia por la elevada incidencia de cïncer en la poblaciïn, la respuesta inmunitaria frente a cïlulas neoplïsicas fracasa a menudo a la hora de eliminar los tumores. El objetivo de la inmunoterapia activa frente al cïncer es aumentar respuestas antitumorales, particularmente respuestas de cïlulas T, a fin de dar como resultado de forma mïs eficaz una reducciïn tumoral.

La mayorïa de los intentos en la inmunizaciïn activa frente a antïgenos del cïncer han utilizado como inmunïgenos cïlulas tumorales completas o fragmentos de cïlulas tumorales. Sin embargo, este enfoque no proporciona reproducibilidad o control sobre los antïgenos precisos incluidos en cada inmunizaciïn.

La clonaciïn de genes que codifican antïgenos asociados a tumores ha abierto nuevas posibilidades para la inmunoterapia de cïncer basada en el uso de vacunas recombinantes o sintïticas contra el cïncer. Tsang et al., J. Natl. Cancer Inst. 87: 982-90 (1995) ; Kawakami et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6458-62 (1994) . En aïos recientes, se ha gastado mucho esfuerzo en la “terapia gïnica” como medio para combatir el cïncer. La expresiïn “terapia gïnica” se ha usado para describir una amplia variedad de mïtodos que usan tïcnicas de biotecnologïa recombinante para suministrar una variedad de diferentes materiales a una cïlula. Tales mïtodos incluyen, por ejemplo, el suministro de un gen, ARN antisentido, un agente citotïxico, etc., mediante un vector a una cïlula de mamïfero, preferiblemente una cïlula humana, ya sea in vivo o ex vivo. La mayorïa del trabajo inicial se ha enfocado en el uso de vectores retrovïricos para transformar estas cïlulas. Este foco ha resultado de la capacidad de los retrovirus para infectar cïlulas e integrar su material genïtico en la cïlula hospedante con eficiencia elevada. El vector retrovïrico es tïpicamente un virus modificado, tal como el virus de la leucemia murina de Moloney (MMLV) , al que se le han suprimido sus secuencias de empaquetamiento para evitar el empaquetamiento de todo el genoma retrovïrico.

Sin embargo, se han dado a conocer numerosas dificultades con los retrovirus. Un problema que se ha desarrollado se observï inicialmente como una ventaja clave de los retrovirus, principalmente su capacidad para integrarse en el cromosoma. Sin embargo, tal integraciïn puede ser problemïtica, dependiendo del sitio cromosïmico de la inserciïn vïrica. Un gran nïmero de otros virus, que se creyï inicialmente que eran enormemente episïmicos en naturaleza, tal como el virus adenoasociado (AAV) , tambiïn han resultado tener esta propiedad. Aunque es ventajoso a la hora de provocar la expresiïn a largo plazo, tambiïn proporciona el potencial para problemas tales... [Seguir leyendo]

1. Una composiciïn farmacïutica para inducir una respuesta inmunolïgica frente a una cïlula que expresa un antïgeno asociado con cïncer de mama en un ser humano que tiene cïncer de mama o con riesgo de desarrollar cïncer de mama, que comprende:

(a) un primer vector que contiene uno o mïs segmentos de ADN que codifican (i) mucina (MUC) o una porciïn antigïnica de la misma o una versiïn modificada de la misma, en el que la versiïn modificada de la misma comprende SEC ID NO: 2, y (ii) antïgeno carcinoembriïnico (CEA) o una porciïn antigïnica del mismo

o una versiïn modificada del mismo, en el que la versiïn modificada del mismo comprende SEC ID NO: 4, y

(b) al menos un segundo vector que contiene uno o mïs segmentos de ADN que codifican (i) MUC o una porciïn antigïnica de la misma o una versiïn modificada de la misma, en el que la versiïn modificada de la misma comprende SEC ID NO: 2, y (ii) CEA o una porciïn antigïnica del mismo o una versiïn modificada del mismo, en el que la versiïn modificada del mismo comprende SEC ID NO: 4,

en el que el segundo vector es para la administraciïn al ser humano a intervalos regulares tras la administraciïn del primer vector.

2. Uso de la composiciïn farmacïutica de la reivindicaciïn 1 para la preparaciïn de un medicamento para inducir una respuesta inmunolïgica frente a una cïlula que expresa un antïgeno asociado con cïncer de mama en un ser humano que tiene cïncer de mama o con riesgo de desarrollar cïncer de mama.

3. La composiciïn farmacïutica de la reivindicaciïn 1, o el uso de la reivindicaciïn 2, en el que la composiciïn farmacïutica comprende ademïs factor estimulante de colonias de granulocitos-macrïfagos (GM-CSF) .

4. La composiciïn farmacïutica de la reivindicaciïn 1 ï 3, o el uso de la reivindicaciïn 2 ï 3, en el que la composiciïn farmacïutica comprende ademïs al menos una molïcula coestimulante.

5. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 4, en el que la molïcula coestimulante es codificada por al menos uno de los vectores.

6. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 5, en la que el al menos uno de los vectores que codifican la molïcula coestimulante contiene al menos B7.1, LFA-3 e ICAM-1 como genes coestimulantes.

7. La composiciïn farmacïutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-6, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2-6, en la que los vectores primero y segundo son vectores poxvïricos.

8. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 7, en la que los vectores primero y segundo se seleccionan del grupo que consiste en: un vector de virus orthopox; un vector de virus avipox; un vector de virus suipox; un vector de virus capropox; un vector de virus leporipox; y un vector de iridovirus, en la que los vectores primero y segundo pueden ser vectores poxvïricos iguales o diferentes.

9. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 7, en la que al menos uno de los vectores poxvïricos es un vector poxvïrico con replicaciïn alterada o que no se replica.

10. La composiciïn farmacïutica o uso de cualquiera de las reivindicaciones 7-9, en la que el primer vector es un vector de virus orthopox, y el segundo vector es un vector de virus avipox.

11. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 10, en la que el vector orthopox es virus de la vacuna.

12. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 11, en la que el virus de la vacuna es virus de la vacuna Wyeth o un virus de la vacuna atenuado.

13. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 12, en la que el virus de la vacuna atenuado es MVA o NYVAC.

14. La composiciïn farmacïutica o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en la que el vector orthopox se administra antes de que se administre el vector avipox.

15. La composiciïn farmacïutica o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en la que el vector orthopox se administra en una a tres administraciones a intervalos establecidos, y el vector avipox se administra en mïltiples administraciones a intervalos establecidos.

16. La composiciïn farmacïutica o uso de la reivindicaciïn 15, en la que el intervalo establecido es 20 dïas a 90 dïas.

17. La composiciïn farmacïutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-16, o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2-16, en la que la mucina es MUC-1.

18. La composiciïn farmacïutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-16, o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2-16, en la que la versiïn modificada de mucina es una MUC flotante y contiene cinco a quince repeticiones en tïndem.

19. La composiciïn farmacïutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-16, o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2-16, en la que la mucina es una MUC-1 flotante o una mini-MUC-1 flotante que tiene seis repeticiones en tïndem.

20. La composiciïn farmacïutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-19, o uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2-19, en la que el uno o mïs segmentos de ADN comprende SEC ID NO: 1 y SEC ID NO: 3, o codifica SEC ID NO: 2 y SEC ID NO: 4.

Figura 1 Mapa de endonucleasas de restricciïn del plïsmido pT2137

Figura 2 Esquema del vector rV-MUC-1

Figura 3 Mapa de endonucleasas de restricciïn del plïsmido pT8016

Figura 4 Generaciïn del virus de la vacuna recombinante rV-CEA (6D) /TRICOM

Figura 5 Mapa de endonucleasas de restricciïn del plïsmido pT2187

Figura 6 Generaciïn del virus de la viruela aviar recombinante rF-CEA (6D) /TRICOM

FIGURA 7 SECUENCIA DE wMUC-l (6) , SEC. ID. NO: 1

FIGURA 8 SECUENCIA DE AMINOïCIDOS DE wMUC-l (6) , SEC. ID. NO: 2

FIGURA 9 SECUENCIA DE ADN DE wCEA (6D) , SEC. ID. NO: 3

Plïsmidos de PANVAC-F pT1154 y pT8150

FIGURA 11