Recipiente destinado al cultivo de células, específicamente de linfocitos T.

Recipiente (1) para llevar a cabo una etapa de un procedimiento de cultivo in vitro de células, que comprende:

- una primera y una segunda hojas

(2,3) de material termoplástico flexible solidarizadas una con otra en la proximidad de su periferia para formar un volumen interior;

- una vía de acceso (4) a dicho volumen que está preparada para permitir la introducción de las células;

- un costura de sellado (6) entre las hojas que está preparada para formar, en el volumen interior, dos compartimientos (7,8) que se comunican entre ellos y con la vía de acceso (4), dicha costura de sellado (6) es discontinua y está asociada de manera estanca a un borde (9) del recipiente (1).

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E08290019.

Solicitante: MACO PHARMA.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: RUE LORTHIOIS 59400 MOUVAUX FRANCIA.

Inventor/es: HERON, ANTOINE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > EQUIPOS PARA ENZIMOLOGIA O MICROBIOLOGIA (instalaciones... > C12M1/00 (Equipos para enzimología o microbiología)

PDF original: ES-2467941_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Recipiente destinado al cultivo de células, específicamente de linfocitos T

La invención se relaciona con un recipiente destinado al cultivo de células in vitro.

El recipiente está destinado al cultivo de células en suspensión y específicamente al cultivo in vitro de los linfocitos T, en 5 particular linfocitos T que infiltran los tumores (TIL) .

Una técnica promisoria de tratamiento de los tumores es la inmunoterapia adoptiva. Según esta técnica, se toman células linfoides de un paciente, estimuladas y amplificadas in vitro antes de ser reinyectadas en el paciente.

La estimulación es realizada por adición de interleucina 2 (IL 2) y/o en presencia de células madre alogénicas no proliferantes. En este último caso, es necesario concentrar las células en un espacio confinado a fin de favorecer su 10 comunicación.

Es por esto que esta etapa de estimulación es generalmente realizada en recipientes de cultivo abiertos como el matraz de fondo redondo.

Sin embargo, este cultivo en sistema abierto no es compatible con un uso clínico de rutina. En efecto, en un contexto médico, los recipientes de cultivo deben presentar garantías en materia de confinamiento de las células, de prevención de los riesgos de contaminación y errores técnicos de manipulación. Luego dichos recipientes deben respetar las reglas estrictas de buena práctica de los productos transfundibles para el acondicionamiento cerrado y la transferencia de las células.

Existen bolsas flexibles para cultivar células utilizadas en la terapéutica humana, específicamente en el contexto del desarrollo de los protocolos clínicos de expansión ex vivo de las células cepas hematopoyéticas tomadas de la 20 extracción de médula ósea, sangre periférica y sangre de cordón. Los documentos US 6 297 046 y EP 471 947 ilustran estas bolsas flexibles destinadas al cultivo de células.

Sin embargo, estas bolsas flexibles, colocadas de manera aplanada en la incubadora durante la fase de cultivo, no están adaptadas para el cultivo de TIL con células madre alogénicas, ya que éstas no permiten concentrar las células en un espacio confinado a fin de favorecer su comunicación.

Conviene desarrollar un recipiente y un procedimiento de cultivo que puedan respetar las buenas prácticas, específicamente en términos de confinamiento y riesgo de contaminación.

A tal efecto, la invención propone un recipiente para llevar a cabo una etapa de un procedimiento de cultivo in vitro de células, que comprende:

-una primera y segunda hojas de material termoplástico flexible solidarizadas una con la otra en la proximidad 30 de sus periferias para formar un volumen interior;

- una vía de acceso a dicho volumen que está preparada para permitir la introducción de las células;

- una costura de sellado entre las hojas que está preparada para formar, en el volumen interior, dos compartimientos que se comunican entre ellos y con la vía de acceso, dicha costura de sellado siendo discontinua y estando asociada de manera estanca a un borde del recipiente.

Otros objetos y ventajas de la invención se presentarán a lo largo de la descripción que continúa con referencia a los dibujos anexados en los cuales:

- La figura 1 representa de manera esquemática una vista de una cara del recipiente según un modo de realización,

-la figura 2 representa de manera esquemática una vista de una cara del recipiente según otro modo de 40 realización de la invención, como su ubicación durante el estímulo de las células.

- la figura 3 representa de manera esquemática un corte transversal del recipiente de la figura 1.

- la figura 4 representa de manera esquemática una vista de una cara del recipiente según un tercer modo de realización, el recipiente conteniendo células y un medio de cultivo.

-la figura 5 representa de manera esquemática un sistema cerrado comprendiendo un recipiente de 45 emergencia, un recipiente de estimulación y un recipiente de amplificación de los linfocitos T.

El cultivo de células consiste en hacer crecer células fuera de su organismo ("ex-vivo") o de su medio original, con un objeto terapéutico, de experimentación científica o de producción biotecnológica.

Durante un procedimiento de cultivo de células, una de las primeras etapas consiste en aislar células a partir de un organismo viviente. En el caso de los linfocitos T infiltrando el tumor (TIL) , esta etapa comprende la emergencia de los linfocitos T contenidos en un tumor. Esta etapa se realiza por ejemplo, por inmersión de fragmentos tumorales del tumor en un medio de cultivo.

El medio de cultivo puede ser un medio de base disponible en el mercado, como Medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) , Medio Esencial Minimo (MEM) , CMRL, EMEM, RPMI1640, DMEM/F-10, DMEM/F12 o un medio de cultivo disponible en el mercado como X-VIVOTM.

Este medio de cultivo puede ser complementado con diversos aditivos utilizados comúnmente por un experto. Entre los aditivos, se pueden citar cera o un sustituto de la cera, aminoácidos no esenciales, la L-glutamina, vitaminas, antibióticos, beta-mercaptoetanol, factores de crecimiento, citoquinas, etc.

Otra etapa de un procedimiento de cultivo consiste en mantener, hacer proliferar y/o amplificar las células aisladas. Esta etapa es generalmente realizada poniendo las células en suspensión en un medio de cultivo, específicamente diferente del utilizado para el aislamiento de las células.

Las células pueden igualmente experimentar diferentes tratamientos como la diferenciación, la activación o la estimulación. Dichos tratamientos se realizan generalmente por adición en el medio de cultivo de sustancias o células específicas, según el objeto de investigación.

En el caso de los linfocitos T, específicamente TIL, éstos son estimulados por ejemplo en presencia de células madre alogénicas no proliferantes y de interleucina 2.

Estas diferentes etapas se realizan en recipientes específicos con el tipo de células y con el tipo de tratamiento experimentado por las células.

La invención propone un recipiente para llevar a cabo una etapa de un procedimiento de cultivo in vitro de células, específicamente células no adherentes. En particular, el recipiente permite el cultivo de células provenientes de una o varias poblaciones en un espacio confinado.

Por ejemplo, el recipiente es utilizado para la estimulación de los linfocitos infiltrando el tumor (TIL o Tumor Infiltrating Lymphocytes) por cocultivo con otras células como las células madre alogénicas no proliferantes.

Según las figuras 1 y 3, el recipiente 1 comprende una primera y una segunda hojas 2, 3 de material termoplástico flexible solidarizadas una con la otra con proximidad en su periferia para formar un volumen interior.

Los ejemplos de materiales termoplásticos flexibles son el policloruro de vinilo, el alcohol polivinílico, el polietileno tereftalato o el poliestireno. Otros ejemplos son el EVA, poliolefinas como el polipropileno, el polietileno y/o el polibutadieno, o polímeros fluorados como el etileno-propileno fluorado (FEP) , el PFA Teflón® o el politretrafluoretileno (PTFE) . Estos últimos ejemplos de material presentan la ventaja de ser permeables en los gases y esterilizables.

Según una realización posible, las hojas son selladas. No obstante, las hojas pueden igualmente estar solidarizadas por un método diferente, específicamente por encolado.

El recipiente comprende al menos una vía de acceso 4 al volumen interior que está preparada para permitir la introducción de las células. Según una variante, esta vía de acceso permite igualmente la recuperación de las células.

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Reivindicaciones:

1. Recipiente (1) para llevar a cabo una etapa de un procedimiento de cultivo in vitro de células, que comprende:

- una primera y una segunda hojas (2, 3) de material termoplástico flexible solidarizadas una con otra en la 5 proximidad de su periferia para formar un volumen interior;

- una vía de acceso (4) a dicho volumen que está preparada para permitir la introducción de las células;

- un costura de sellado (6) entre las hojas que está preparada para formar, en el volumen interior, dos compartimientos (7, 8) que se comunican entre ellos y con la vía de acceso (4) , dicha costura de sellado

(6) es discontinua y está asociada de manera estanca a un borde (9) del recipiente (1) .

2. Recipiente (1) según la reivindicación 1, caracterizado porque la vía de acceso (4) está prevista en el borde (14) del recipiente que está opuesto al borde (9) al que la costura de sellado está asociada.

3. Recipiente (1) según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque comprende dos vías de acceso (4, 5) en el 15 volumen interior, respectivamente para la introducción y la recuperación de las células.

4. Recipiente (1) según la reivindicación 3, caracterizado porque una vía de acceso (4, 5) drena hacia cada uno de los compartimientos (7, 8) .

5. Recipiente según una cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque los compartimientos (7, 8) están formados respectivamente entre un borde (10, 11) de dicho recipiente y la costura de sellado (6) .

6. Recipiente (1) según la reivindicación 5, caracterizado porque la costura de sellado (6) se extiende paralelamente en los bordes (10, 11) longitudinales de dicho recipiente (1) .

7. Recipiente (1) según la reivindicación 6, caracterizado porque la costura de sellado (6) está prevista próxima a un borde (10) longitudinal para formar dos compartimientos (7, 8) de amplitud diferente.

8. Recipiente (1) según la reivindicación 6 o 7, caracterizado porque los compartimientos (7, 8) se comunican

transversalmente entre ellos, entre el extremo de la costura de sellado (6) y un borde transversal (14) de dicho recipiente.

9. Recipiente (1) según una cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la costura de sellado (6) está formado por una sucesión de puntos que están regularmente espaciados.

10. Recipiente (1) según la reivindicación 9, caracterizado porque los puntos de sellado poseen una longitud comprendida entre 1 mm y 5 mm, los espacios entre ellos presentando una longitud comprendida entre 1 mm y 1 cm.