Procedimiento industrial de encapsulación de material biológico con vistas a una conservación a temperatura ambiente con ensayo de estanqueidad bajo vacío del encapsulado.

Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico en un contenedor con vistas a suconservación,

a su recuperación y a su utilización ulterior, que comprende la sucesión de las etapas siguientes:

- preparación del material biológico con puesta en disolución,

- control de la calidad del material biológico así preparado,

- marcado del contenedor con registro de la identificación,

- introducción de este material biológico en dicho contenedor bajo atmósfera controlada,

- deshidratación del material biológico,

- cierre del contenedor bajo atmósfera controlada y protegido de la luz,

- ensayo de estanqueidad del contenedor colocando el contenedor cerrado en un recinto colocado bajo vacío,detectando el gas o la mezcla de gases de la atmósfera controlada introducida y aprisionada en el contenedorque se escapa del contenedor bajo el efecto del vacío, y

- puesta en estación de almacenamiento cuando el ensayo es favorable.

Procedimiento industrial de encapsulación de material biológico con vistas a una conservación a temperatura ambiente con ensayo de estanqueidad bajo vacío del encapsulado.

La presente invención se refiere a un procedimiento industrial de encapsulación de material biológico, en particular del ADN, más particularmente con vistas a una conservación a temperatura ambiente.

Se conoce la patente EP 1 075 515 que describe un procedimiento de conservación del ADN de larga duración en 10 una cápsula metálica, inoxidable y estanca.

El documento WO 2004/033729, que representa el estado de la técnica más próximo, describe un procedimiento de preparación de una muestra de material biológico en un contenedor con vistas a su conservación, a su recuperación y a su utilización ulterior, que comprende las etapas siguientes: preparación del material biológico, marcado del

contenedor con registro de la identificación, introducción de este material biológico en dicho contenedor bajo atmósfera controlada, deshidratación del material biológico, cierre del contenedor bajo atmósfera controlada, y puesta en estación de almacenamiento cuando el ensayo es favorable.

Este ADN se encapsula en atmósfera neutra y con un grado de higrometría muy bajo, con el fin de permitir la 20 conservación a temperatura ambiente, evitando así la utilización de medios de refrigeración y/o congelación complejos y costosos.

Este procedimiento se puede aplicar a cualquier material biológico de origen humano, animal o vegetal y comprende en particular: los tejidos; las celulas; los microorganismos tales como las bacterias, los hongos, las algas 25 monocelulares; los virus; las proteinas; los acidos nucleicos tales como ADN, ARN.

El material biológico se utiliza para aplicaciones cada vez más numerosas, tanto en el campo de la investigación como en otros muchos campos, tales como las biotecnologías, la salud, el medioambiente, el agroalimenticio, la identificación, la justicia, la criminalística, y se vuelve imperativo constituir unos bancos de muestras de material

biológico o biotecas.

Un banco de muestras exige una clasificación y una identificación de un rigor absoluto.

De hecho, un tratamiento manual posible a escala de laboratorio no está adaptado para la constitución de dichas 35 biotecas.

Conviene por lo tanto concebir unas cadenas automatizadas para la realización de muestras de material biológico partiendo del material biológico inicial hasta su utilización. Esta utilización puede ocurrir en un intervalo de tiempo muy variable, hasta varias décadas más tarde.

Dicha cadena debe prever las etapas siguientes: preparación de la muestra de material biológico y control de su calidad, colocación en un contenedor y conservación de dicha muestra, y después recuperación del material biológico con vistas a su utilización a partir de la muestra de material biológico así conservada. Durante todas estas etapas, es necesario asegurar el dominio de la calidad y el seguimiento de todas las muestras.

Para ello, es necesario prever un contenedor idéntico para todas las muestras con el fin de permitir las manipulaciones llevadas a cabo por los diferentes autómatas y los intercambios de muestras entre usuarios, por ejemplo.

Es necesario asimismo asegurar la conservación a temperatura ambiente en condiciones que limitan las degradaciones del material biológico, permitir un marcado para clasificar estas muestras y clasificarlas, alcanzando al mismo tiempo el objetivo principal: hacer posible la recuperación del material biológico y su utilización.

Este contenedor debe permitir una manipulación mediante el procedimiento según la invención, de manera 55 automatizada, y en particular gracias a unos soportes de tipo gradilla que respetan el formato de las microplacas en el estándar denominado SBS, marca depositada por la compañía SBS.

El procedimiento según la presente invención consiste en recurrir a este contenedor y en prever una sucesión de etapas con el fin de tratar el material biológico de manera industrial.

El procedimiento según la presente invención se describe ahora en detalle según un modo de realización particular y optimizado.

El procedimiento de preparación de muestras de material biológico según la presente invención se define en la 65 reivindicación 1.

El procedimiento según la presente invención cubre asimismo la utilización de la muestra preparada después de la realización de las etapas anteriores de la reivindicación 1.

Este procedimiento de utilización consiste en la sucesión de las etapas siguientes:

-identificación de un contenedor determinado dispuesto sobre una gradilla mediante lectura del marcado,

-apertura por punzonado del tapón del contenedor,

-redisolución de material biológico en el contenedor,

-extracción del material biológico recuperado, y

-utilización en particular con fines de análisis.

La invención se describe ahora en detalle.

El procedimiento según la presente invención consiste por lo tanto en preparar el material biológico, en purificarlo y en ponerlo en disolución.

Si es necesario, este material biológico se reparte en varias muestras de menor volumen en función de las necesidades y del volumen inicial de material disponible, es la operación de alicuotado durante la cual, o previamente, se controla la calidad de la muestra. Además, se clasifica cada muestra y/o cada alícuota.

El control de calidad del material biológico es, por ejemplo, la combinación de técnicas tales como una medición de densidad óptica, una medición de fluorescencia, un gel de electroforesis, una dosificación de proteínas o una amplificación molecular. Cada muestra controlada y que cumple los criterios de calidad debe ser introducida en un contenedor.

Los parámetros relativos a este contenedor son muy importantes.

Para la aplicación del procedimiento, el contendor elegido es metálico y de forma cilíndrica, obtenido por deformación de metal, de tipo embutición profunda. El metal es ventajosamente acero inoxidable 304L, o referenciado de manera más metalúrgica bajo la calidad Z2CN18-10.

Las dimensiones de este contenedor, en este caso un diámetro de 7 mm, una longitud de 18 mm de envolvente cilíndrica y un grosor de pared de 0, 25 mm, se seleccionan por numerosas razones.

En primer lugar, estas dimensiones se definen para que cada contenedor pueda ser recibido en el pocillo de una microplaca estándar, en particular una microplaca en el estándar SBS.

Además, la calidad de acero inoxidable permite, además de las cualidades intrínsecas relacionadas con el material, tal como la resistencia a la corrosión, por un lado una excelente deformabilidad que permite una producción de este tipo de contenedor por embutición profunda con una gran precisión y una total reproducibilidad, y esto a un coste muy ventajoso y, por otro lado, una buena aptitud para la soldadura.

Evidentemente, un contenedor cilíndrico se podría obtener a partir de un cilindro y de un primer tapón soldado, pero este modo de realización sería sólo un equivalente técnico. Tendría como inconveniente necesitar una soldadura suplementaria y presentaría un riesgo suplementario de fuga, razón por la cual la presente invención elige un contenedor obtenido de manera monolítica a partir de una sola pieza deformada mecánicamente.

Además, el contenedor debe ser referenciado antes de recibir el material biológico, en el sentido en el que es necesario en un procedimiento automatizado como el de la presente invención permitir un seguimiento total.

Este marcado se realiza preferentemente mediante un láser. Éste puede efectuar un marcado únicamente por contraste en la superficie del material por un cambio de estado de esta superficie, muy legible a primera vista, y sobre todo por cualquier ojo electrónico. Es posible asimismo grabar, es decir atacar la materia.

Más particularmente, el marcado se posiciona en el fondo exterior del contenedor y comprende, a título de identificador, un código matricial Data Matriz y/o una cadena de caracteres alfanuméricos.

Otra solución consiste en recurrir a una etiqueta RFID, que utiliza las ondas de radiofrecuencias para identificar cada contenedor y para añadir otras informaciones si fuese necesario.

Se debe señalar que dicho marcado aplicado comprende una etiqueta que asegura la protección de la antena RFID, siendo la antena el elemento activo y por lo tanto protegido. Este marcado puede ser considerado como perenne.

El contenedor así marcado se posiciona en una gradilla... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico en un contenedor con vistas a su conservación, a su recuperación y a su utilización ulterior, que comprende la sucesión de las etapas siguientes: 5

-preparación del material biológico con puesta en disolución,

-control de la calidad del material biológico así preparado,

- marcado del contenedor con registro de la identificación,

-introducción de este material biológico en dicho contenedor bajo atmósfera controlada,

-deshidratación del material biológico, 15

-cierre del contenedor bajo atmósfera controlada y protegido de la luz,

-ensayo de estanqueidad del contenedor colocando el contenedor cerrado en un recinto colocado bajo vacío,

detectando el gas o la mezcla de gases de la atmósfera controlada introducida y aprisionada en el contenedor 20 que se escapa del contenedor bajo el efecto del vacío, y

-puesta en estación de almacenamiento cuando el ensayo es favorable.

2. Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico según la reivindicación 1, caracterizado porque siendo el contenedor metálico y comprendiendo un tapón, el cierre está asegurado por soldadura de este tapón sin calentamiento térmico.

3. Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico según la reivindicación 2, caracterizado porque la soldadura se efectúa mediante soldadura con la ayuda de un haz láser de tipo láser YAG pulsado. 30

4. Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico según la reivindicación 3, caracterizado porque la atmósfera controlada está compuesta por un gas inerte o por una mezcla de gases inertes secos para evitar cualquier reacción de hidrólisis química o enzimática y de oxidación de dicho material biológico.

5. Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la puesta en estación de almacenamiento prevé la colocación de cada contenedor sobre una gradilla, una identificación de la gradilla y un registro de la posición de dicho contenedor sobre la gradilla.

6. Procedimiento de preparación de una muestra de material biológico según cualquiera de las reivindicaciones 40 anteriores, caracterizado porque la deshidratación se realiza bajo una puesta bajo vacío.

7. Procedimiento de utilización de la muestra preparada, después de la realización del procedimiento de preparación de la muestra según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque comprende las etapas siguientes:

-identificar un contenedor determinado, dispuesto en una gradilla, mediante lectura del marcado,

-abrir por punzonado del tapón del contenedor,

-volver a disolver el material biológico en el contenedor,

-extraer el material biológico así recuperado, .

50. utilizar el material biológico extraído, en particular con fines de análisis.