Polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica y polinucleótidos que codifican el mismo.

Proceso para degradar un material que contiene almidón, que comprende: tratamiento del material que contiene almidón con una composición enzimática que comprende una o más

(diferentes) enzimas amilolíticas en presencia de un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de:

(i) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº: 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante de polipéptido maduro de SEC ID nº: 3.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/062955.

Solicitante: NOVOZYMES, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1445 DREW AVENUE DAVIS, CA 95616 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: HARRIS, PAUL, WOGULIS,MARK.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/31 (Genes que codifican proteínas microbianas, p. ej. enterotoxinas)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/56 (que actúan sobre compuestos glicosílicos (3.2), p. ej. amilasa, galactosidasa, lisozima)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/63 (Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/67 (Métodos generales para favorecer la expresión)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones... > C12N9/24 (actúan sobre compuestos glicosílicos (3.2))

PDF original: ES-2526867_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica y polinucleótidos que codifican el mismo Antecedentes de la invención Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a procesos para degradar materiales que contienen almidón utilizando una composición enzimática que comprenden enzimas amilolíticas y polipéptidos que tienen actividad potenciadora amilolítica. La invención también se refiere a procesos para producir productos sacarificados a partir de un material que contiene almidón utilizando una composición enzimática que comprende enzimas amilolíticas y un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica. Por último, la invención se refiere a procesos para producir un producto de fermentación utilizando una composición enzimática que comprende enzimas amilolíticas y un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica.

Descripción de las técnicas relacionadas [0002] El almidón es un carbohidrato complejo compuesto por dos componentes principales: amilopectina y amilosa. La amilosa es una molécula de cadena lineal mientras que la amilopectina es una molécula ramificada. La amilosa está compuesta por moléculas de D-glucosa que están enlazadas por enlaces alfa-1, 4-glicosídicos. La amilopectina está compuesta por moléculas de D-glucosa que están enlazadas por enlaces alfa-1, 4-glicosídicos al igual que moléculas de D-glucosa enlazadas por enlaces alfa-1, 6-glicosídicos. Los enlaces alfa-1, 6-glicosídicos generan ramificación. La proporción de amilosa a amilopectina varía entre las fuentes de almidón.

El almidón se puede hidrolizar en carbohidratos más simples por ácidos, varias enzimas o una combinación de los mismos. El grado de conversión se cuantifica típicamente por equivalencia de dextrosa (DE) , que se refiere a la fracción de los enlaces glucósidos en el almidón que han sido escindidos. Las enzimas primarias usadas para hidrolizar el almidón en carbohidratos más simples son endoamilasas, exoamilasas y enzimas desramificantes, que hidrolizan la amilosa y la amilopectina. La amilosa es hidrolizada principalmente por amilasas, mientras que la amilopectina también requiere enzimas desramificantes tales como pululanasas (E.C. 3.2.1.41) para la hidrólisis completa. Las endoamilasas, la más común es la alfa-amilasa (E.C. 3, 2, 1, 1) , son específicas para los alfa-1, 4-enlaces de amilosa y amilopectina. Las exoamilasas tienen la capacidad de hidrolizar tanto alfa-1, 4-enlaces como alfa-1, 6-enlaces de amilosa y amilopectina. Un ejemplo común es la amiloglucosidasa (E.C. 3.2.1.20) . La beta-amilasa es una enzima que tiene la capacidad de hidrolizar los alfa-1, 4-enlaces de amilosa. Las enzimas desramificantes, por ejemplo pululanasas, hidrolizan alfa-1, 6enlaces en la amilopectina. Productos de hidrólisis de enzimas desramificantes son principalmente maltotriosa y maltosa.

Hay muchos productos alimenticios que se producen a partir de almidón, incluyendo, por ejemplo, maltodextrina, un producto de almidón ligeramente hidrolizado (DE 10-20) usado como espesante y relleno de sabor insípido, varios jarabes de maíz (DE 30-70) , soluciones viscosas usadas como edulcorantes y espesantes en muchos tipos de alimentos procesados, dextrosa (DE 100) , glucosa comercial, preparada por la hidrólisis completa del almidón, y jarabe rico en fructosa, hecho mediante el tratamiento de soluciones de dextrosa con la enzima glucosa (xilosa) isomerasa, hasta que una fracción sustancial de la glucosa se convierte en fructosa.

Sería ventajoso en la técnica mejorar la conversión enzimática de materiales que contienen almidón.

La presente invención proporciona tales procesos.

Resumen de la invención [0007] La presente invención se refiere a procesos para degradar un material que contiene almidón, que comprende: el tratamiento del material que contiene almidón con una composición enzimática que comprende una o más enzimas amilolíticas (diferentes) en presencia de un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de:

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº : 3.

(a) licuefacción del material que contiene almidón con una alfa-amilasa; y

La presente invención también se refiere a procesos para producir un producto sacarificado a partir de un material que contiene almidón, incluyendo:

(b) sacarificación del material que contiene almidón licuado con una composición enzimática que comprende una o más enzimas amilolíticas (diferentes) ;

donde el paso (a) , el paso (b) o los pasos (a) y (b) se realizan en presencia de un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº : 3.

Además, la presente invención se refiere a procesos para producir un producto de fermentación, que comprende:

(a) sacarificación de un material que contiene almidón con una composición enzimática que comprende una o más enzimas amilolíticas (diferentes) en presencia de un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de:

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº : 3; y

(b) fermentación del material que contiene almidón sacarificado con uno o más microorganismos de fermentación (diferentes) para producir un producto de fermentación.

Por último, la presente invención se refiere a procesos para producir un producto de fermentación a partir de un material que contiene almidón, que comprende:

(a) licuefacción del material que contiene almidón con una alfa-amilasa;

(b) sacarificación del material que contiene almidón licuado con una composición enzimática que comprende uno o más (diferentes) enzimas amilolíticas; y

(c) fermentación del material que contiene almidón sacarificado en presencia de uno o varios (diferentes) organismos fermentantes para producir el producto de fermentación;

donde el paso (a) , el paso (b) o los pasos (a) y (b) se realizan en presencia del polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de:

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº : 3. Breve descripción de las figuras [0011]

La figura 1 muestra un mapa de restricción de pPH48.

La figura 2 muestra la secuencia de ADN genómico y la secuencia de aminoácidos deducida de un polipéptido de Neurospora crassa FGSC 2489 que tiene actividad potenciadora amilolítica... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Proceso para degradar un material que contiene almidón, que comprende: tratamiento del material que contiene almidón con una composición enzimática que comprende una o más (diferentes) enzimas amilolíticas en presencia de 5 un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de:

(i) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante de polipéptido maduro de SEC ID nº : 3.

2. Proceso según la reivindicación 1, que comprende además la recuperación del material que contiene almidón degradado. 15

3. Proceso para producir un producto sacarificado a partir de un material que contiene almidón, que comprende:

(a) licuefacción del material que contiene almidón con una alfa-amilasa; y

(b) sacarificación del material que contiene almidón licuado con una composición enzimática que comprende una o más (diferentes) enzimas amilolíticas;

donde el paso (a) , el paso (b) o los pasos (a) y (b) se realizan en presencia de un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado del grupo que consiste en: 25

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al 30 menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante de polipéptido maduro de SEC ID nº : 3.

4. Proceso según la reivindicación 3, que comprende además (c) recuperación del producto sacarificado a partir del material que contiene almidón sacarificado.

5. Proceso para producir un producto de fermentación, que comprende:

(a) sacarificación de un material que contiene almidón con una composición enzimática que comprende una o más (diferentes) enzimas amilolíticas en presencia de un polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de:

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al 45 menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº : 3; y

(b) fermentación del material que contiene almidón sacarificado con uno o más (diferentes) microorganismos fermentativos para producir un producto de fermentación.

6. Proceso según la reivindicación 5, que comprende además (c) recuperación del producto de fermentación a partir de la fermentación.

7. Proceso para producir un producto de fermentación a partir de un material que contiene almidón, que comprende: 55 (a) licuefacción del material que contiene almidón con una alfa-amilasa;

(b) sacarificación del material que contiene almidón licuado con una composición enzimática que comprende una o más (diferentes) enzimas amilolíticas; y

(c) fermentación del material que contiene almidón sacarificado en presencia de uno o más (diferentes) organismos fermentativos para producir el producto de fermentación;

donde el paso (a) , el paso (b) o los pasos (a) y (b) se realizan en presencia del polipéptido que tiene actividad potenciadora amilolítica seleccionado de: 65

(i) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de SEC ID nº : 4;

(ii) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº : 3.

8. Proceso según la reivindicación 7, que comprende además (d) recuperación del producto de fermentación a partir de la fermentación.