Métodos para inmunocontracepción específica para ciertas especies de animales.

Un método para identificar un péptido que se une específicamente a la zona pelúcida de ovocitos de una especie animal diana,

comprendiendo dicho método:

(a) poner en contacto ovocitos que han sido aislados a partir de la especie animal diana y ovocitos que han sido aislados a partir de una o más especies animales no diana con una biblioteca de fagos;

(b) seleccionar fagos a partir de la biblioteca que se une específicamente a los ovocitos de la especie animal diana, identificando con ello péptidos que se unen a la zona pelúcida de ovocitos de la especie animal diana.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/039806.

Solicitante: AUBURN UNIVERSITY.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 570 Devall Drive Auburn, AL 36832 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: BAKER,HENRY,J, SAMOYLOVA,TATIANA I, COX,NANCY, DITCHKOFF,STEPHEN, VAN KAMPEN,KENT.

Fecha de Publicación: 15 de Enero de 2013.

Clasificación Internacional de Patentes:

A61K39/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53).
C07K14/705 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).

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Fragmento de la descripción:

Métodos para inmunocontracepción específica para ciertas especies de animales

ANTECEDENTES

El presente tema tratado se refiere a los campos de la selección de péptidos y polipéptidos, la inmunología y la contracepción dirigida en animales. En particular, el presente tema tratado se refiere a métodos para seleccionar péptidos y polipéptidos que se unen a la zona pelúcida (ZP) de los ovocitos.

La sobrepoblación de animales de múltiples especies que incluyen animales domésticos, agresivos y salvajes produce diversos problemas económicos, de salud y de seguridad. Por ejemplo, los jabalís provocan significativos daños físicos en cultivos agrícolas, suelos, viñedos, plantaciones de árboles, césped, agrupaciones de plantas raras, hábitats de vida salvaje, sitios arqueológicos y vehículos (Véase Ditchkoff SS, West BC. Ecology and management of feral hogs. Human-Wildlife Conflicts 2007; 1 (2) : 149-151) . Los jabalís compiten con el ganado y la vida salvaje nativa por comida, y se alimentan de animales domésticos y de vida salvaje. Los jabalís son portadores de al menos treinta enfermedades víricas y bacterianas importantes y treinta y siete parásitos que afectan a humanos, mascotas, ganado y vida salvaje (por ejemplo, brucelosis, salmonelosis, enfermedades debidas a cepas patógenas de E. coli, rabia, tuberculosis y tularemia) . Los jabalís también podrían propagar potencialmente otras enfermedades humanas y animales que no se dan actualmente en los Estados Unidos (Véase Hutton T, DeLiberto T, Owen S, Morrison B. Disease risks associated with increasing feral swine numbers and distribution in the United States. Midwest Association of Fish and Wildlife Agencies 2006) . Los programas de control para la erradicación de jabalís, tales como envenenamiento, trampas, caza, etc., son ineficaces, caros y generalmente inaceptables por parte del público. Los contraceptivos para animales actualmente disponibles no son selectivos y afectan a múltiples especies y, por lo tanto, no puede permitirse su uso en entornos no controlados, tales como los hábitats naturales de los animales salvajes. (Véase Miller LA, Johns BE, Killian GJ. Immunocontraception of White-tailed deer with GnRH vaccine. Am J Reprod Immunol 2000; 44 (5) : 266-274; y Killian G, Miller L, Rhyan J, Doten H. Immunocontraception of Florida feral swine with a single-dose GnRH vaccine. American Journal of Reproductive Immunology 2006; 55:378-384) . Por tanto, existe una necesidad urgente de vacunas inmunocontraceptivas específicas de especie que puedan afectar solo a las especies diana y que puedan administrarse a través de una administración oral u oronasal razonablemente económica. Los ejemplos adicionales de especies, cuya sobrepoblación supone varios tipos de riesgos económicos y sanitarios, incluyen coyotes, ciervos y mapaches.

RESUMEN

La invención se refiere a un método para identificar un péptido que se une específicamente a la zona pelúcida de los ovocitos de una especie animal diana de acuerdo con las reivindicaciones 1-5.

Se describen métodos, composiciones, péptidos de unión a zona pelúcida (ZP) y vectores para expresar los péptidos para uso en la inmunocontracepción de animales. Las composiciones descritas pueden incluir composiciones inmunogénicas o de vacuna que comprenden péptidos de unión a ZP o vectores que expresan péptidos de unión a ZP. Las composiciones descritas también pueden incluir composiciones cebo que comprenden las composiciones inmunogénicas o de vacuna.

Preferiblemente, los péptidos de unión a ZP, los vectores, las composiciones inmunogénicas o de vacuna y las composiciones de cebo son específicos para una especie. Por ejemplo, los péptidos y polipéptidos preferiblemente se unen de manera específica a la ZP de ovocitos de una especie animal diana y no se unen a la ZP de ovocitos de una especie animal no diana. Los péptidos y polipéptidos pueden expresarse a través de vectores que incluyen vectores víricos, bacterianos o de otro tipo. Preferiblemente, el vector es específico de una especie en el sentido de que el vector infecta o expresa el péptido o polipéptido de una especie animal seleccionada y no infecta o expresa el péptido o polipéptido de una especie animal no seleccionada. Las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender los péptidos, polipéptidos o vectores que expresan los péptidos o polipéptidos. Las composiciones descritas pueden ser inmunogénicas o vacinogénicas y pueden administrarse a animales para una inmunocontracepción específica de especie a través de la inducción de una respuesta inmune anti-esperma específica de especie. Las composiciones pueden formularse como composiciones de cebo que también son específicas de especie en tanto en cuanto atraen una especie animal seleccionada y no atraen a especies animales no seleccionadas.

Los métodos descritos incluyen métodos para identificar un péptido o polipéptido que se una específicamente a la zona pelúcida de ovocitos procedentes de una especie animal diana. Los métodos pueden incluir: (a) aislar ovocitos de uno o más animales (por ejemplo, ovocitos porcinos, ovocitos felinos, ovocitos caninos u ovocitos bovinos) ; (b) poner en contacto los ovocitos con una biblioteca de fagos; (c) seleccionar los fagos que se unan específicamente a los ovocitos de una especie animal diana (por ejemplo, los fagos que se unan específicamente a ovocitos porcinos frente a ovocitos de otros animales (por ejemplo, ovocitos felinos, ovocitos caninos u ovocitos bovinos) ) , identificando de este modo péptidos que se unen a la ZP de los ovocitos de las especies animales diana. Los

métodos pueden incluir: (a) poner en contacto ovocitos de una o más especies de animal con una biblioteca de fagos; (b) separar los fagos que no se unan a los ovocitos de una o más especies de animal no diana (por ejemplo, ovocitos felinos, ovocitos caninos y ovocitos bovinos) de la biblioteca de fagos; y (c) poner en contacto los fagos separados con ovocitos de una especie animal diana (por ejemplo, ovocitos porcinos) ; y (d) separar los fagos que se unen a los ovocitos de las especies animales diana (por ejemplo, ovocitos porcinos) , identificando con ello los péptidos que se unen selectivamente a la ZP de los ovocitos de las especies animales diana (por ejemplo, ovocitos porcinos) . Alternativamente, los métodos pueden incluir: (a) poner en contacto ovocitos de una o más especies animales con una biblioteca de fagos; (b) separar los fagos que se unen a los ovocitos de las especies animales diana (por ejemplo, ovocitos porcinos) de la biblioteca de fagos; y (c) poner en contacto los fagos separados con ovocitos de una o más especies animales no diana (por ejemplo, ovocitos felinos, ovocitos caninos u ovocitos bovinos) ; y (d) separar los fagos que no se unen a los ovocitos de la especie o especies animales no diana, identificando de este modo los péptidos que se unen selectivamente a la ZP de los ovocitos de la especie animal diana (por ejemplo, ovocitos porcinos) . En los métodos descritos, la biblioteca de fagos puede ponerse en contacto con un número de ovocitos relativamente pequeño (por ejemplo, menos de aproximadamente 1000 ovocitos) .

También se describen péptidos o polipéptidos identificados por los métodos descritos. En algunas realizaciones, los péptidos o polipéptidos identificados pueden incluir una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 2 (DANRLPHPANIN) , SEQ ID NO: 18 (TLGWTANEAPRR) , SEQ ID NO: 19 (LLADTTHHRPWT) , SEQ ID NO: 20 (SQSPAMYSQTRP) , SEQ ID NO: 21 (AVTQHLKFKGFN) y SEQ ID NO: 22 (ANFNMTHHQGHK) . También se describen polinucleótidos que codifican los péptidos o polipéptidos identificados. El polinucleótido puede estar ligado operativamente a una secuencia promotora como un polinucleótido recombinante. El polinucleótido recombinante puede estar presente en un vector que se utiliza para transformar una célula aislada. Preferiblemente, el vector es capaz de expresar el péptido o polipéptido codificado. El péptido o polipéptido codificado puede producirse mediante un método que incluye: a) cultivar la célula transformada en condiciones adecuadas para la expresión del polipéptido; y b) recuperar el polipéptido así expresado. Alternativamente, el péptido puede prepararse mediante un método sintético.

Los péptidos o polipéptidos identificados pueden utilizarse como antígenos. En algunas realizaciones, los péptidos o polipéptidos identificados pueden modificarse para potenciar la antigenicidad. Por ejemplo, los péptidos o polipéptidos pueden conjugarse con una o más proteínas portadoras (por ejemplo, hemocianina de lapa de herradura (KLH) ) .

Las composiciones descritas pueden incluir composiciones inmunogénicas... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

1. Un método para identificar un péptido que se une específicamente a la zona pelúcida de ovocitos de una especie animal diana, comprendiendo dicho método:

(a) poner en contacto ovocitos que han sido aislados a partir de la especie animal diana y ovocitos que han sido aislados a partir de una o más especies animales no diana con una biblioteca de fagos;

(b) seleccionar fagos a partir de la biblioteca que se une específicamente a los ovocitos de la especie animal diana, identificando con ello péptidos que se unen a la zona pelúcida de ovocitos de la especie animal diana.

2. El método de la reivindicación 1, en donde la biblioteca de fagos se pone en contacto en primer lugar con los

ovocitos de una o más especies animales no diana, y posteriormente, los miembros de la biblioteca de fagos que no se unen a los ovocitos de la una o más especies animales no diana se ponen en contacto con los ovocitos de la especie animal diana y se seleccionan los miembros de la biblioteca de fagos que se unen a los ovocitos de la especie animal diana, identificando así péptidos que se unen específicamente a la zona pelúcida de ovocitos de la especie animal diana.

3. El método de la reivindicación 1, en el que la biblioteca de fagos se pone en contacto en primer lugar con los ovocitos de las especies animales diana, y posteriormente, los miembros de la biblioteca de fagos que se unen a los ovocitos de las especies animales diana se ponen en contacto con los ovocitos de la una o más especies animales no diana y se seleccionan los miembros de la biblioteca de fagos que no se unen a los ovocitos de la una o más especies animales no diana, identificando así péptidos que se unen específicamente a la zona pelúcida de ovocitos

de la especie animal diana.

4. El método de la reivindicación 1, en el que la especie animal diana es un puerco.

5. El método de la reivindicación 1, en el que las especies animales no diana incluyen uno o más felinos, caninos y bovinos.

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