Inventos patentados en España.

Inventos patentados en España.

Inventos patentados en España en los últimos 80 años. Clasificación Internacional de Patentes CIP 2013.

METODO PARA EL TRATAMIENTO CON BUCINDOLOL BASADO EN DIRECCIONAMIENTO GENETICO.

Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen:

Método para evaluar el tratamiento con bucindolol para un paciente que comprende:

obtener información de secuencia referente a al menos un polimorfismo en un gen de receptor adrenérgico del paciente, en el que

(a)dicha información de secuencia comprende o bien

(i)la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente, o bien

(ii)el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; y/o

(b)en el que dicha información de secuencia comprende si

(i)la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente, o si

(ii)la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente,

en el que es probable que el paciente presente una respuesta positiva a bucindolol si el paciente es homocigoto para Arg389 en el gen ß1AR o si el paciente es homocigoto de tipo natural en el gen a2cAR.

Solicitante: THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF COLORADO.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1800 GRANT STREET, 8TH FLOOR,DENVER, CO 80203.

Inventor/es: BRISTOW,MICHAEL, LIGGETT,STEPHEN,B.

Fecha de Publicación de la Concesión: 7 de Octubre de 2010.

Fecha Concesión Europea: 26 de Mayo de 2010.

Clasificación Internacional de Patentes: C12Q1/68M6.

Clasificación PCT: C12Q1/68 (.en los que intervienen ácidos nucleicos [3]).

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Descripción:

Método para el tratamiento con bucindolol basado en direccionamiento genético.

1. Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de la farmacogenética y la cardiología. Más específicamente, la presente invención se refiere a métodos para la terapia individualizada de la insuficiencia cardíaca con bucindolol basándose en el genotipo de un paciente de los polimorfismos en genes de receptores adrenérgicos, incluyendo el gen del receptor adrenérgico ß11AR) y el gen del receptor adrenérgico a2c (a2cAR).

2. Descripción de la técnica relacionada

Según la Asociación Americana del Corazón ("American Heart Association") (AHA), aproximadamente 62 millones de estadounidenses tienen alguna forma de enfermedad cardiovascular, que puede incluir tensión arterial alta, cardiopatía coronaria (ataque al corazón y angina de pecho), accidente cerebrovascular, defectos de nacimiento del corazón y los vasos sanguíneos e insuficiencia cardíaca congestiva, y cerca de un millón mueren debido a tales estados cada año. El informe anual de la AHA establece además que la enfermedad cardiovascular mata a más estadounidenses que las siguientes siete causas de muerte combinadas, incluyendo el cáncer. Sorprendentemente, ligeramente más mujeres que hombres, globalmente, tienen alguna enfermedad cardiovascular. Las cardiopatías representaron el 40% de todas las muertes en los EE.UU. en 1999. A pesar de los recientes avances en el tratamiento, la mortalidad debida a insuficiencia cardíaca es aproximadamente del 50% en un plazo de 5 años.

Sólo en los Estados Unidos hay aproximadamente seis millones de personas, aproximadamente el 1,5% de la población, con insuficiencia cardíaca crónica ("IC"), y se diagnostican 550.000 pacientes nuevos cada año. La terapia médica ha avanzado en el tratamiento de la IC, pero la morbilidad y la mortalidad siguen siendo altas (Mann et al., 2005). El criterio actual de atención en la IC implica el uso de inhibidores (inhibidores de ACE, ARB y/o antagonistas del receptor de aldosterona) del sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) y ß-bloqueantes, que inhiben de manera competitiva los receptores ß-adrenérgicos en los cardiomiocitos. Los ß-bloqueantes son eficaces en la reducción de la mortalidad y se consideran la clase farmacológica para IC más eficaz globalmente, pero aun así funcionan en sólo el 50-60% de los pacientes tratados. Además, los datos clínicos de pacientes estadounidenses sobre la eficacia de los ß-bloqueantes aprobados en ensayos de mortalidad son menos impresionantes, mostrando los datos publicados del único gran ensayo de mortalidad de intención de tratar un aumento en la mortalidad en pacientes estadounidenses frente a placebo.

Por consiguiente, existe una necesidad sustancial de terapias para IC mejoradas que tengan tasas de respuesta y eficacia superiores, se toleren mejor y se adecuen mejor a subpoblaciones con necesidades especiales, tales como diabéticos. Sin embargo, el desarrollo de nuevos agentes contra estos antecedentes terapéuticos ha resultado extremadamente desafiante. Desde 2001, de 13 ensayos de fase III en IC sólo tres han sido positivos. Dos de estos ensayos positivos fueron con un ARB (candesartan) (McMurray et al., 2003; Granger et al., 2003). El tercer ensayo positivo, el ensayo A-HeFT con BiDil (una combinación de dinitrato de isosorbida e hidralazina) fue en un subconjunto (afroamericanos) que comprende sólo el 12% de la población con IC estadounidense (Taylor et al., 2004). Claramente, existe una necesidad continuada de desarrollar la siguiente generación de fármacos para la IC.

Aunque se usan agonistas de ß1 para tratar el deterioro agudo de pacientes con función ventricular insuficiente, una exposición prolongada del corazón a los agonistas administrados, o la elevada cantidad de agonistas de catecolaminas producida por el cuerpo, conduce a un empeoramiento de la insuficiencia cardíaca. En cambio, los antagonistas de receptores ß-adrenérgicos (denominados ß-bloqueantes) han surgido como una modalidad de tratamiento importante en la insuficiencia cardíaca crónica.

A principios de la década de 1990, un grupo de investigadores estadounidenses sobre insuficiencia cardíaca que trabajaban con agentes ß-bloqueantes en la insuficiencia cardíaca decidieron que se requería un ensayo de mortalidad con el fin de validar esta terapia todavía controvertida. Un grupo de estadounidenses redactaron el borrador de un protocolo y una solicitud de subvención que posteriormente se aprobó para su financiación por el Programa de Estudios Clínicos Cooperativos del VA y el NHLBI. El protocolo aprobado no especificaba un fármaco, sino que en su lugar estipulaba que se seleccionaría un ß-bloqueante óptimo basándose en el potencial de éxito y solidez de los datos de fase II. Los fármacos que se consideraron fueron carvedilol, tartrato de metoprolol, succinato de metoprolol CR/XL y bucindolol. Se rechazó el tartrato de metoprolol debido a los efectos poco prometedores sobre la mortalidad del ensayo MDC (Waagstein et al., 1993); no se seleccionó el succinato de metoprolol CR/XL debido a una falta de datos de tolerabilidad y eficacia en la insuficiencia cardíaca; y no se seleccionó el carvedilol en parte debido a la escasa tolerabilidad en la insuficiencia cardíaca avanzada (Krum et al. 1995). El bucindolol fue la elección unánime del comité de selección, basándose en su excelente tolerabilidad (Eichhorn et al., 1997; Gilbert et al., 1990; Bristow et al., 1994; Pollock et al., 1990), eficacia (Gilbert et al., 1990; Bristow et al., 1994; Pollock et al., 1990; Eichhorn et al., 1990) y el nivel de interés de su promotor. El bucindolol se convirtió así en el objeto del ensayo de evaluación de la supervivencia de betabloqueantes ("BEST", Beta Blocker Evaluation of Survival Trial), el primer ensayo de mortalidad planificado e iniciado en la IC.

El ensayo BEST comenzó en 1995 y terminó en 1999. Tras iniciarse BEST, se planificaron e iniciaron otros tres ensayos de mortalidad, MERIT-HF con succinato de metoprolol CR/XL (MERIT-HF Study Group, 1999), CIBIS-II con bisoprolol (CIBIS-II Investigators, 1999) y COPERNICUS con carvedilol (Packer et al., 2002). Debido a la inscripción más rápida y menos restrictiva de estos ensayos, CIBIS-II y MERIT-HF se terminaron antes que BEST, y ambos ensayos tuvieron resultados positivos.

El ensayo BEST se terminó prematuramente en 1999, antes de su finalización, debido en parte a una pérdida de equiponderación por los investigadores, y una tasa de inclusión acelerada con respecto a ß-bloqueantes de etiqueta abierta basándose en el conocimiento de los otros dos ensayos positivos (BEST Trial Investigators, 2001; Domanski et al., 2003). El promotor decidió no proseguir con el desarrollo comercial del bucindolol basándose en los resultados conocidos en el momento en el que se detuvo el ensayo. Aunque los investigadores de BEST observaron un beneficio en la clase III, sujetos no afroamericanos, que era similar a los resultados positivos notificados seis meses antes en CIBIS II y MERIT-HF, los investigadores observaron malos resultados en la clase IV y pacientes afroamericanos. Además, BEST no cumplió su criterio de valoración primario de mortalidad por cualquier causa (reducción del 10%, p = 0,10) cuando se detuvo el ensayo (BEST Trial Investigators, 2001). Los investigadores propusieron que las diferencias entre los resultados de otros ß-bloqueantes y bucindolol podrían ser atribuibles a las "propiedades farmacológicas únicas del bucindolol" (BEST Trial Investigators, 2001), lo que destaca las distinciones observadas entre las propiedades funcionales y químicas de esta clase diversa de compuestos.

Además, aún cuando la mayoría de ensayos con ß-bloqueantes en insuficiencia cardíaca han demostrado efectos beneficiosos para grupos, existe una variabilidad sustancial entre individuos en el desenlace que no se explica mediante las características clínicas iniciales (CIBIS-II Investigators, 1999). La variabilidad entre individuos en la respuesta a la terapia farmacológica se reconoce con prácticamente todos los fármacos. En circunstancias tales como el tratamiento de la insuficiencia cardíaca crónica con ß-bloqueantes, en el que la morbilidad y la mortalidad son altas, el algoritmo de ajuste es complejo, la variabilidad entre individuos es sustancial y existen opciones de tratamiento adicionales (la evaluación de la probabilidad de una respuesta a largo plazo favorable (o adversa) a la terapia farmacológica puede tener un impacto significativo sobre la toma de decisiones). La mortalidad a 5 años de aproximadamente el 50% de los pacientes con insuficiencia cardíaca ha impulsado un intenso estudio de opciones de tratamiento y ha conducido a regímenes de múltiples fármacos que incluyen normalmente un ß-bloqueante, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina (o antagonista de los receptores de angiotensina), diuréticos y digoxina. La terapia con ß-bloqueantes se inicia en pacientes relativamente estables, a bajas dosis (es decir, aproximadamente 10 mg), y se aumenta lentamente a lo largo de un periodo de meses hasta o bien una dosis objetivo o bien una dosis que se tolera. Los ajustes en la dosificación de otros fármacos, o el inicio del tratamiento con fármacos adicionales no son comunes durante el periodo de ajuste ascendente de la dosis. Por tanto, el tratamiento de la insuficiencia cardíaca con ß-bloqueantes debe individualizarse. De hecho, la afirmación "la dosificación debe individualizarse y monitorizarse estrechamente" se encuentra en la información para el paciente de las dos preparaciones de ß-bloqueantes aprobadas para tratar la insuficiencia cardíaca en los EE.UU. Además, los estudios en modelos animales y seres humanos sugieren que la reversión promovida por ß-bloqueantes de la remodelación celular y global del corazón con insuficiencia puede requerir meses de terapia estable (Lowes et al., 2002). Se ha observado una variabilidad sustancial en las respuestas a los ß-bloqueantes, incluyendo cambios de la fracción de eyección ventricular izquierda (FEVI) (van Campcen et al., 1998), tolerancia al ejercicio (Bolger, 2003) y supervivencia (Packe et al., 2001). No obstante, basándose en la preponderancia de los datos, debe considerarse la terapia con ß-bloqueantes para la mayoría de los pacientes con insuficiencia cardíaca crónica, suponiendo que no existen contraindicaciones tales como sobrecarga de volumen, requisito de infusiones inotrópicas, bradicardia, inestabilidad hemodinámica y asma.

En consecuencia, no sólo se observaron diferencias entre los diversos ß-bloqueantes, particularmente bucindolol en comparación con otros ß-bloqueantes, sino que también se ha observado variabilidad entre pacientes en sus capacidades para responder de manera favorable a una terapia con ß-bloqueantes particular. Se necesitan pruebas del valor terapéutico del bucindolol, particularmente pruebas que expliquen estas diferencias entre individuos.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona métodos para la terapia individualizada de la enfermedad cardiovascular basándose en la identificación de polimorfismos en receptores adrenérgicos que afectan a la respuesta de un individuo a bucindolol. En ciertas realizaciones, se refiere a la terapia individualizada para la insuficiencia cardíaca.

En ciertas realizaciones, existen métodos para evaluar el tratamiento con bucindolol para un paciente que comprende obtener información de secuencia referente a al menos un polimorfismo en un gen de receptor adrenérgico del paciente, en los que dicha información de secuencia comprende o bien la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente, o bien el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; y/o en los que dicha información de secuencia comprende si la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente, si la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente, en los que es probable que el paciente presente una respuesta positiva a bucindolol si el paciente es homocigoto para Arg389 en el gen ß1AR o si el paciente es homocigoto de tipo natural en el gen a2cAR. En realizaciones particulares, el gen de receptor adrenérgico es ß1AR o a2cAR. En algunos casos, se obtiene información de secuencia sobre un polimorfismo en ambos genes.

Además, los polimorfismos incluyen uno en la posición de nucleótido 1165 en el gen del receptor adrenérgico ß11AR) que corresponde a la posición de aminoácido 389 en la proteína codificada y otro en las posiciones de nucleótido 964-975 del gen a2cAR que corresponde a las posiciones de aminoácido 322-325 en la proteína codificada.

La invención se basa en la determinación por los inventores de que ser homocigoto en el gen ß1AR para codificar para una arginina en la posición 389 en el producto génico dota al paciente de una fisiología que es susceptible del tratamiento con bucindolol. Además, la invención se basa en la determinación de que una deleción en el gen a2cAR que conduce a una deleción de los aminoácidos 322-325 en el producto génico es perjudicial para el tratamiento de estadios más avanzados de insuficiencia cardíaca con bucindolol. El término "tratamiento" se entenderá que se refiere a una terapia con respecto a un paciente al que se le ha diagnosticado una enfermedad cardiovascular o con síntomas cardiovasculares, en oposición a medidas preventivas.

Se entiende en general que los polimorfismos se producen en el contexto de genes; sin embargo, en el caso de polimorfismos que afectan al producto génico codificado, una alteración en ese producto génico también puede denominarse polimorfismo.

Según la invención, los métodos incluyen evaluar si se debe prescribir o administrar bucindolol a un paciente con enfermedad cardiovascular, comprendiendo obtener información del paciente referente a sus polimorfismos en genes de receptores adrenérgicos y/o sus productos génicos codificados que afectan a una respuesta a bucindolol.

Por tanto, la presente invención se refiere a obtener la información referente a polimorfismos en las proteínas de ß1AR y/o a2cAR directamente o según se deduzca determinando la secuencia de nucleótidos en la posición 1165 en el gen ß1AR y/o las posiciones 964-975 en el gen a2cAR, y prescribir o administrar bucindolol basándose en la información obtenida. Se entenderá que los ácidos nucleicos afines para la proteína de ß1AR o a2cAR incluyen el transcrito de ARNm que codifica para la proteína, ambas cadenas de cualquier ADNc generado a partir del transcrito de ARNm, y ambas cadenas del ADN genómico para el gen ß1AR o a2cAR.

El conocimiento sobre qué polimorfismo tiene un paciente con enfermedad cardiovascular en la posición 389 del ß1AR y/o las posiciones 322-325 de a2cAR proporciona la base para evaluar si se debe administrar o prescribir bucindolol al paciente.

La presente invención identifica además pacientes con insuficiencia cardíaca que responderán positivamente al tratamiento usando ß-bloqueantes, específicamente bucindolol.

La presente invención también proporciona dispositivos y composiciones para la administración de ß-bloqueantes, específicamente bucindolol, a un individuo que necesita tal terapia.

El método de la presente invención comprende determinar el genotipo de un paciente con insuficiencia cardíaca en el gen ß1AR del individuo, en el que es probable que el paciente presente una respuesta positiva a una dosis convencional de bucindolol si el paciente no es un portador de ß1Gly389 (es decir, que tiene uno o dos alelos con Gly389). En una realización, se prescribe bucindolol para un paciente con insuficiencia cardíaca que es homocigoto para ß1Arg389. El método de la presente invención contempla además prescribir o administrar una dosis convencional de bucindolol a un paciente que necesita tal terapia basándose en el conocimiento de que el paciente es "homocigoto para ß1Arg389", lo que significa que ambos genes ß1AR del paciente codifican para una arginina en la posición 389 en los productos génicos. Los métodos de la invención implican prescribir o administrar bucindolol a pacientes que son homocigotos para ß1Arg389 y esto es independientemente de cómo se determina que el paciente tiene ese genotipo.

En realizaciones adicionales, el método de la presente invención comprende determinar el genotipo de un paciente con insuficiencia cardíaca en el gen a2cAR del individuo, en el que es probable que el paciente presente una respuesta positiva a una dosis convencional de bucindolol si el paciente no es un portador de a2cDel322325. En ciertas realizaciones, se prescribe bucindolol para un paciente con insuficiencia cardíaca que es homocigoto para a2c de tipo natural en las posiciones de aminoácido 322-325 (es decir, los aminoácidos no están delecionados). El método de la presente invención contempla además prescribir o administrar una dosis convencional de bucindolol a un paciente que necesita tal terapia basándose en el conocimiento de que el paciente es "homocigoto para a2cAR de tipo natural", lo que significa que el paciente no tiene una deleción en la secuencia del gen a2cAR que codifica para los aminoácidos 322-325 en a2cAR. Los métodos de la invención implican prescribir o administrar bucindolol a pacientes que son homocigotos de tipo natural para la deleción (no es un portador de la deleción) y esto es independientemente de cómo se determina que el paciente tiene ese genotipo.

Se contempla que en ciertas situaciones, puede genotiparse un paciente para uno de estos polimorfismos y entonces se realiza una determinación posterior con respecto al otro polimorfismo; en este escenario, se evalúan dos muestras diferentes. Alternativamente, puede obtenerse una única muestra y evaluarse para determinar dos polimorfismos separados. En otra realización, se prescribe bucindolol para un paciente con insuficiencia cardíaca que tiene el diplotipo de homocigoto para ß1Arg389 y homocigoto para a2cAR de tipo natural. El método de la presente invención contempla además prescribir o administrar una dosis convencional de bucindolol a un paciente que necesita tal terapia basándose en el conocimiento de que el paciente es homocigoto para ß1Arg389 o para ARa2c de tipo natural, o la combinación diplotípica.

El método de la presente invención también comprende determinar si es probable que individuos que tienen estados fisiopatológicos similares, tales como pero sin limitarse a, cardiomiopatía dilatada, cardiomiopatía isquémica, cardiopatía isquémica (angina, infarto de miocardio), feocromocitoma, migrañas, arritmias cardíacas, hipertensión y diversos trastornos de la ansiedad respondan positivamente a una dosis convencional de bucindolol basándose en si el individuo es homocigoto para Arg389 en el gen ß1AR del individuo (y no un portador de la Gly389) y/o si el individuo es homocigoto de tipo natural para el gen a2cAR y no un portador de la a2cDel322-325.

En ciertas realizaciones, la invención se refiere a métodos para evaluar el tratamiento con bucindolol para un paciente que comprenden conocer o bien (i) la secuencia en la posición de nucleótido 1165 de una o ambas secuencias codificantes de los genes ß1AR del paciente o bien (ii) el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente, en los que el individuo está considerándose para el tratamiento con bucindolol.

En realizaciones adicionales, la invención se refiere a métodos para evaluar el tratamiento con bucindolol para un paciente que comprenden conocer si hay una deleción o bien (i) en la secuencia en las posiciones de nucleótido 964-975 de uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente o bien (ii) en los aminoácidos en las posiciones 322-325 de las proteínas de a2cAR del paciente, en los que el individuo está considerándose para el tratamiento con bucindolol.

Se contempla que no todas las proteínas del paciente se evaluarán en cualquier realización de la invención, sino que se obtendrá una muestra y se evaluarán algunas de las proteínas en la muestra para determinar su secuencia proteica.

También se contempla que el término "conocer" se use según su significado sencillo y normal para hacer referencia a tener la información especificada. Se contempla que normalmente un profesional médico evaluará si se debe prescribir o administrar a un paciente bucindolol y en la realización de esa evaluación el profesional ordenará una o más pruebas referentes a uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente o sus proteínas codificadas y/o referentes a uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente o sus proteínas codificadas. En el contexto de los polimorfismos tratados en el presente documento, los términos "alelo" y "gen" se usan de manera intercambiable.

Otros aspectos de la invención describen métodos para tratar un paciente con un estado cardíaco que pueden comprender administrar o prescribir al paciente una cantidad eficaz de bucindolol, en los que el paciente no tiene niveles detectables de una proteína de ß1AR con una glicina en la posición 389 o en los que el paciente es homocigoto para una citosina en la posición 1165 en la secuencia codificante de nucleótidos de ambos alelos de ß1AR. En cualquier caso, un médico u otro profesional médico puede prescribir o administrar bucindolol si se da cuenta de que el bucindolol es un medicamento apropiado para ese paciente en virtud de que ese paciente tiene el polimorfismo Arg389/Arg389 en el gen ß1AR.

Alternativa o adicionalmente, los métodos para tratar un paciente con un estado cardíaco pueden comprender administrar o prescribir al paciente una cantidad eficaz de bucindolol, en los que el paciente no tiene niveles detectables de una proteína de a2cAR con una deleción de los aminoácidos 322-325 o en los que el paciente es homocigoto para la presencia de los nucleótidos 964-975 ("sin deleción") en la secuencia codificante de ambos alelos de a2cAR. En cualquier caso, un médico u otro profesional médico puede prescribir o administrar bucindolol si se da cuenta de que el bucindolol es un medicamento apropiado para ese paciente en virtud de que ese paciente no es un portador del polimorfismo Del322-325 en el gen a2cAR, es decir, no es heterocigoto ni homocigoto para la deleción.

Los métodos adicionales incluyen evaluar si un paciente con insuficiencia cardíaca responderá positivamente a un bucindolol comprendiendo: a) obtener información que indique i) la presencia de un polimorfismo en la posición codificante 1165 en la secuencia codificante de uno o ambos genes ß1AR del paciente o ii) la presencia de un polimorfismo en el aminoácido en la posición 389 de la proteína de ß1AR; y b) prescribir o administrar bucindolol.

Además, otros métodos descritos por la invención implican tratar un paciente con bucindolol comprendiendo: a) obtener información que indique i) la presencia de un polimorfismo en la posición codificante 1165 en la secuencia codificante de uno o ambos alelos de ß1AR del paciente o ii) la presencia de un polimorfismo en el aminoácido en la posición 389 de la proteína de ß1AR; y b) o bien prescribir terapia con bucindolol para el paciente en el que el genotipo del paciente indica que el paciente es homocigoto para Arg389 en la proteína de ß1AR o bien no prescribir bucindolol para el paciente en el que el genotipo del paciente indica que el paciente no es homocigoto para Arg389 en la proteína de ß1AR.

Se contempla además que la invención se refiera al uso de bucindolol en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un estado cardíaco en pacientes con el polimorfismo Arg389/Arg389 en sus genes ß1AR. Las realizaciones tratadas con respecto a los métodos pueden implementarse en el uso de bucindolol en la fabricación de un medicamento.

Además, la presente invención se refiere a la obtención de una muestra biológica de un paciente que está considerándose para el tratamiento con bucindolol y su evaluación para detectar el polimorfismo Arg389 determinando o bien (i) la secuencia en la posición de nucleótido 1165 de una o ambas secuencias codificantes de los genes ß1AR del paciente o bien (ii) el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente. Se contempla que si se evalúan las proteínas de ß1AR, podría buscarse si una muestra contiene cualquier proteína de ß1AR con una glicina en 389.

Los métodos adicionales incluyen evaluar si un paciente con insuficiencia cardíaca responderá positivamente a un bucindolol comprendiendo: a) obtener información que indique si i) la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente o ii) si la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente; y b) prescribir o administrar bucindolol. Se contempla que si se evalúan las proteínas de a2cAR, podría buscarse si una muestra contiene cualquier proteína de a2cAR con la deleción relevante.

Además, otros métodos descritos por la invención implican tratar un paciente con bucindolol comprendiendo: a) obtener información que indique si i) la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente o ii) si la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente; y b) o bien prescribir terapia con bucindolol para el paciente en el que el genotipo del paciente indica que el paciente es homocigoto de tipo natural en los alelos de a2cAR o bien no prescribir bucindolol para el paciente en el que el genotipo del paciente indica que el paciente no es homocigoto de tipo natural en la proteína de a2cAR.

Se contempla además que la invención se refiera al uso de bucindolol en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un estado cardíaco en pacientes con el polimorfismo 322-325 tipo natural homocigoto en sus alelos de a2cAR. Las realizaciones tratadas con respecto a los métodos pueden implementarse en el uso de bucindolol en la fabricación de un medicamento.

Además, la presente invención se refiere a la obtención de una muestra biológica de un paciente que está considerándose para el tratamiento con bucindolol y su evaluación para detectar el polimorfismo Arg389 en la proteína de ß1AR y/o el polimorfismo Del322-325 en la proteína de a2cAR determinando (i) la secuencia en la posición de nucleótido 1165 de una o ambas secuencias codificantes de los alelos de ß1AR del paciente; (ii) el aminoácido en la posición 389 en las proteínas de ß1AR del paciente; iii) si hay una deleción en los nucleótidos 964-975 en la secuencia codificante de uno o ambos alelos de a2cAR; y/o iv) si hay una deleción de los aminoácidos 322-325 en las proteínas de a2cAR del paciente.

Para llevar a cabo estos métodos, un doctor, un profesional médico o su personal pueden obtener una muestra biológica para su evaluación. El profesional o su personal pueden analizar la muestra, o pueden enviarla a un laboratorio independiente o externo. El profesional médico puede tener conocimiento de si la prueba está proporcionando información referente a los alelos o genes ß1AR del paciente según se distinguen de las proteínas codificadas, o el profesional médico puede ser consciente sólo de que la prueba indica directa o indirectamente que el genotipo del paciente refleja el fenotipo Gly389/Gly389 (secuencia "homocigota para Gly"), el fenotipo Arg389/Gly389 (secuencia "heterocigota") o el fenotipo Arg389/Arg389 (secuencia "homocigota para Arg" u "homocigota de tipo natural").

De manera similar, el profesional médico puede tener conocimiento de si la prueba está proporcionando información referente a los alelos o genes a2cAR del paciente según se distinguen de las proteínas codificadas, o el profesional médico puede ser consciente sólo de que la prueba indica directa o indirectamente que el genotipo del paciente refleja la secuencia homocigota de tipo natural (sin deleción en cualquier alelo), el fenotipo Del322-325 heterocigoto (secuencia "heterocigota") o el fenotipo Del322-325/Del322-325 (secuencia de "deleción homocigota").

En algunas realizaciones tratadas en los ejemplos, un paciente con o bien la secuencia heterocigota o bien la secuencia homocigota para Gly con respecto a ß1AR se denomina "portador de Gly". Asimismo, un paciente con o bien la secuencia heterocigota o bien la secuencia de deleción homocigota con respecto a a2cAR se denomina "portador de Del322-325" o "portador de deleción".

En cualquiera de estas circunstancias, el profesional médico "conoce" la información relevante que le permitirá determinar si el bucindolol es una opción medicamentosa apropiada. Se contempla que, por ejemplo, un laboratorio lleve a cabo la prueba para determinar el genotipo del paciente de manera que su personal también conozca la información apropiada. Pueden informar al profesional del resultado específico de la prueba realizada o el laboratorio puede simplemente notificar que el bucindolol es el fármaco apropiado basándose en los resultados de laboratorio.

En realizaciones adicionales, se conoce el genotipo del paciente en la posición de nucleótido 1165 de la secuencia codificante de uno o ambos alelos de ß1AR. En el contexto de la presente invención, si la posición 1165 de la secuencia codificante contiene una guanina o citosina en uno o ambos alelos es significativo. Esto indica qué aminoácido puede encontrarse en la posición 389 de la secuencia de proteína de ß1AR. Una citosina en la posición 1165 en la secuencia codificante codifica para una arginina, mientras que una guanina en la secuencia codificante codifica para una glicina. En realizaciones particulares, se conocen las secuencias en la posición 1165 en ambos alelos de ß1AR del paciente. El resultado puede ser una guanina en ambos alelos, una citosina en ambos alelos o una guanina en uno alelo y una citosina en el otro alelo.

En ciertas realizaciones, se conoce el genotipo del paciente en las posiciones de nucleótido 964-975 de la secuencia codificante de uno o ambos alelos de a2cAR. En el contexto de la presente invención, si hay una deleción en uno o ambos alelos del gen de a2cAR es significativo. Esto indica si hay una deleción de un aminoácido de los aminoácidos 322-325 (aminoácidos 322, 323, 324 y 325) de la secuencia de proteína de a2cAR. En realizaciones particulares, se conoce si hay una deleción de la secuencia de nucleótidos correspondiente a las posiciones 964-975 en ambos alelos de ß1AR del paciente.

Los expertos en la técnica entenderán fácilmente que la secuencia codificante de un gen se refiere a la cadena del gen que se usa para la transcripción del ARN mensajero. La secuencia de la secuencia codificante es complementaria a la secuencia del transcrito que se transcribe. Debido a la naturaleza complementaria de las secuencias entre una secuencia codificante y una secuencia no codificante, la secuencia de cualquier secuencia codificante puede determinarse conociendo la secuencia del transcrito, la cadena no codificante o la proteína codificada. La secuencia de ácido nucleico en esa posición en uno o ambos alelos puede determinarse mediante varios modos conocidos para los expertos en la técnica. Tales modos incluyen, pero no se limitan a, secuenciación por terminación de cadena, digestión por restricción, reacción de polimerasa específica de alelo, análisis de polimorfismos conformacionales de cadena sencilla, análisis de fragmentos genéticos, electroforesis en gel en gradiente de temperatura o reacción en cadena de la ligasa.

Alternativamente, puede evaluarse la secuencia de proteína de ß1AR. En ciertas realizaciones, se conoce el aminoácido en la posición 389 en una o más de las proteínas de ß1AR del paciente. Se contempla que cualquier muestra evaluada del paciente contendrá múltiples proteínas de ß1AR que pueden analizarse. Un análisis de estas proteínas puede determinar si el paciente tiene proteínas de ß1AR con sólo una arginina en 389, sólo una glicina en 389 o una mezcla de ambos tipos. De manera similar, puede evaluarse la secuencia de proteína de a2cAR. En realizaciones particulares, se conoce si hay una deleción de los aminoácidos 322-325 en una o más de las proteínas de a2cAR del paciente.

Se contempla que cualquier muestra evaluada del paciente contendrá múltiples proteínas de ß1AR y a2cAR que pueden analizarse. Un análisis de estas proteínas puede determinar si el paciente tiene proteínas de ß1AR con sólo una arginina en 389, sólo una glicina en 389 o una mezcla de ambos tipos. Asimismo, puede determinarse si el paciente tiene proteínas de a2cAR con sólo la secuencia de tipo natural en los aminoácidos 322-325 (sin deleción), sólo una deleción de los aminoácidos correspondientes a 322-325 o una mezcla de ambos tipos.

Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para determinar la secuencia en una posición particular en una proteína. Pueden implicar usar un anticuerpo, cromatografía de líquidos de alta resolución o espectroscopía de masas.

Tal como se trató anteriormente, puede conocerse la secuencia de una posición particular en la proteína o gen ß1AR y/o proteína o gen a2cAR. Algunos métodos de la invención implican determinar la secuencia en la secuencia de proteína o gen ß1AR y/o la secuencia de proteína o gen a2cAR.

En consecuencia, se contempla que las realizaciones pueden implicar obtener una muestra biológica de un paciente. Una muestra biológica es una muestra que contiene material biológico tal como todo o parte de un órgano, tejido, células, ácidos nucleicos, proteínas u otras macromoléculas y sustancias de este tipo. La muestra puede incluir esputos, suero, sangre, plasma, líquido cefalorraquídeo, semen, líquido linfático, orina, heces, derrame pleural, ascitis, una muestra de tejido, biopsia de tejido, hisopo con células o una combinación de los mismos. En otras realizaciones de la invención, una muestra puede incluir células que provienen de pulmón, piel, músculo, hígado, riñón, colon, próstata, mama, cerebro, vejiga, intestino delgado, intestino grueso, cuello uterino, estómago, páncreas, testículos, ovarios, hueso, médula o columna vertebral. En algunas realizaciones, la muestra es una muestra de sangre completa, plasma o suero, mientras que en otras realizaciones, la muestra se obtiene mediante lavado, frotis o frotamiento con hisopo de una zona externa o interna del paciente. En ciertas realizaciones, la muestra biológica es una muestra de sangre.

En algunas realizaciones de la invención, puede haberse evaluado ya la secuencia de proteínas y/o genes ß1AR de un paciente y/o la secuencia de proteínas y/o genes a2cAR de un paciente. Se contempla que este análisis puede haberse realizado antes de que el paciente se considere para el tratamiento con bucindolol o como parte de un examen general. Por ejemplo, la secuencia de las proteínas y/o genes ß1AR del paciente, así como sus proteínas y/o genes a2cAR puede determinarse e introducirse en una base de datos o introducirse en la historia médica del paciente. En este caso, un profesional médico puede llegar a conocer cuál es la secuencia obteniendo la historia de un paciente referente a la secuencia i) en la posición 1165 en la secuencia codificante de uno o ambos alelos de ß1AR o ii) en la posición 389 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de ß1AR; iii) en la posición 964-975 en la secuencia codificante de uno o ambos alelos de a2cAR; y/o iv) en las posiciones 322-325 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de a2cAR.

La presente invención también implica notificar los resultados de una determinación de la secuencia de proteína o ácido nucleico en la posición relevante en la proteína o los alelos de ß1AR y/o la proteína o los alelos de a2cAR. En ciertas realizaciones, los métodos incluyen preparar un informe que contiene los resultados de la determinación de (i), (ii), (iii) y/o (iv) descritos en el párrafo anterior. Un informe de este tipo identificará al paciente mediante el nombre, el número de la seguridad social y/u otro calificador o número de identificación. También puede contener los datos reales como resultado de la determinación o un resumen de esos datos.

En algunas realizaciones, los métodos incluyen identificar a un paciente que posiblemente necesita el tratamiento con un bucindolol. Un paciente para el que está considerándose el bucindolol como opción de tratamiento puede tener síntomas de o puede habérsele diagnosticado un estado médico, tal como insuficiencia cardíaca, cardiomiopatía dilatada, cardiopatía isquémica, feocromocitoma, migrañas, arritmias cardíacas, hipertensión o un trastorno de ansiedad. En ciertas realizaciones, el paciente tiene síntomas de o se le ha diagnosticado cardiopatía isquémica, que puede ser específicamente angina y/o un infarto de miocardio. En casos particulares, un paciente tiene síntomas de o se le ha diagnosticado insuficiencia cardíaca. La insuficiencia cardíaca puede considerarse insuficiencia cardíaca avanzada, aunque la invención puede no limitarse a tales pacientes. La expresión "insuficiencia cardíaca avanzada" se usa según su significado sencillo y normal en el campo de la cardiología. En algunas realizaciones, un paciente al que se le prescribe bucindolol puede tener insuficiencia cardíaca de clase III o clase IV según el sistema de clasificación de la NYHA. El sistema de clasificación de la NYHA es un sistema de evaluación, sin embargo, se contempla que la invención no se limite de este modo y que esto pretende ser ilustrativo en vez de limitativo. Los pacientes pueden clasificarse mediante otro sistema de este tipo. Se contempla además que los pacientes puedan clasificarse mediante una metodología diferente pero que la invención se implemente de manera similar.

Sin embargo, en otras realizaciones, un paciente puede tener signos o síntomas de insuficiencia cardíaca pero no insuficiencia cardíaca avanzada. En una situación de este tipo, el paciente puede haberse caracterizado o puede caracterizarse como paciente con insuficiencia cardíaca de clase I o II según el sistema de clasificación de la NYHA. En estas realizaciones, el paciente puede genotiparse para el polimorfismo Arg389ß1, en cuyo caso una persona con el fenotipo Arg/Arg es un candidato para el tratamiento con bucindolol. En consecuencia, los métodos de la invención pueden implicar prevenir la insuficiencia cardíaca en un paciente determinando si el paciente tiene el polimorfismo Arg389/Arg389 y administrando bucindolol si es así. Pacientes particulares podrían ser particularmente adecuados para esto incluyendo, pero sin limitarse a, los pacientes con síntomas de insuficiencia cardíaca, con factores de riesgo de insuficiencia cardíaca o con una historia anterior o familiar de insuficiencia cardíaca.

Adicionalmente, los métodos pueden implicar administrar o prescribir otros agentes terapéuticos o realizar una estrategia quirúrgica u otra estrategia de intervención para tratar al paciente.

Según la presente invención, los métodos pueden implicar adicionalmente prescribir o administrar bucindolol al paciente tras conocer que el genotipo del paciente en el polimorfismo 389 es Arg389/Arg389, también conocido como genotipo homocigoto para arginina. Adicional o alternativamente, puede prescribirse o administrarse bucindolol tras conocer que el paciente tiene el polimorfismo de a2cAR de tipo natural homocigoto (no porta una deleción de los nucleótidos 964-975 en cualquier alelo del gen a2cAR). Además, puede ser el caso que un paciente que no presente cualquiera de o ambos genotipos no se le prescribirá o administrará bucindolol. Puede prescribirse o administrarse al paciente un ß-bloqueante que específicamente no es bucindolol.

En realizaciones adicionales, los métodos pueden implicar conocer si hay una deleción en (iii) la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 en la secuencia codificante de uno o ambos de los genes a2cAR del paciente o (iv) la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 de una o más de las proteínas de a2cAR del paciente. Esto puede conocerse además de o independientemente de cuál sea el genotipo del paciente en el gen ß1AR en la posición 1165 (389 en la proteína).

Si un paciente con insuficiencia cardíaca avanzada (es decir, clase III o IV de la NYHA) presenta un genotipo Del322-325 para ARa2c homocigoto y el paciente no presenta el genotipo Arg389/Arg389, se contempla que no se prescribirá o administrará bucindolol al paciente. En ciertas realizaciones, se identifica al paciente como paciente cuya raza es negra. Alternativamente, si un paciente no presenta un genotipo Del322-325 para a2cAR homocigoto, puede prescribirse o administrarse bucindolol al paciente.

También puede considerarse otra información para determinar si el bucindolol es un fármaco apropiado para el paciente. Esto puede incluir la raza, el género, la edad, las intervenciones quirúrgicas anteriores, el estadio de la insuficiencia cardíaca, la historia del paciente referente a enfermedad cardiovascular, el diagnóstico de otras enfermedades o estados, los riesgos de otras enfermedades o estados, las alergias a fármacos, la toxicidad a fármacos y/u otros medicamentos que estén tomándose.

Por tanto, se contempla que la invención también se refiera a realizar un análisis de diplotipo u obtener los resultados de un análisis de diplotipo. En realizaciones particulares, el análisis de diplotipo implica evaluar directa o indirectamente el polimorfismo (1) en la posición 389 de ß1AR de manera que se determine si un paciente tiene un genotipo Arg389/Arg389 y (2) en la posición 322-325 de a2cAR de manera que se determine si el paciente tiene un genotipo Del322-325/Del322-325. Pueden incluirse otros polimorfismos en el haplotipo, particularmente los que se ven afectados o afectan a la capacidad del paciente para responder favorablemente a bucindolol como agente terapéutico.

Cualquier realización tratada con respecto a un aspecto de la invención también se aplica a otros aspectos de la invención. Esto incluye realizaciones tratadas con respecto a cada uno de ß1AR y a2cAR. Específicamente, cualquier realización tratada con respecto a proteína, alelos o genes ß1AR puede implementarse con respecto a proteínas, alelos o genes a2cAR, y viceversa.

Se entiende que las realizaciones en la sección de ejemplos son realizaciones de la invención que pueden aplicarse a todos los aspectos de la invención.

El uso del término "o" en las reivindicaciones se usa significando "y/o" a menos que se indique explícitamente para referirse a alternativas solamente o las alternativas son mutuamente excluyentes, aunque la descripción soporta una definición que se refiera a sólo alternativas e "y/o".

En toda esta solicitud, el término "aproximadamente" se usa para indicar que un valor incluye la desviación estándar del error para el dispositivo o método que se emplea para determinar el valor.

Siguiendo la ley de patentes de larga tradición, las palabras "un" y "una", cuando se usan conjuntamente con las palabras "que comprende" en las reivindicaciones o la memoria descriptiva, indican uno o más, a menos que se indique específicamente.

Otros objetos, características y ventajas de la presente invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada. Sin embargo, debe entenderse que la descripción detallada y los ejemplos específicos, aunque indican realizaciones específicas de la invención, se proporcionan a modo de ilustración solamente, puesto que diversos cambios y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención resultarán evidentes para los expertos en la técnica a partir de esta descripción detallada.

Breve descripción de los dibujos

Los siguientes dibujos forman parte de la presente memoria descriptiva y se incluyen para demostrar adicionalmente ciertos aspectos de la presente invención. La invención puede entenderse mejor con referencia a uno o más de estos dibujos en combinación con la descripción detallada de las realizaciones específicas presentadas en el presente documento.

Figura 1. Se representan las estructuras químicas de varios ß-bloqueantes, incluyendo bucindolol.

Figura 2. Cuadro comparativo de diferentes agentes antiadrenérgicos y tratamientos basados en datos de ensayos clínicos de fase II o III sobre insuficiencia cardíaca u otros datos de desarrollo.

Figura 3. Esta figura ilustra los efectos específicos de alelo de bucindolol en células que expresan de manera estable ß1Arg389 o ß1Gly389. Los resultados son la media pm DE de 4 experimentos.

Figura 4. El gráfico de barras ilustra una respuesta al bloqueo ß en ratones transgénicos con sobreexpresión dirigida de ß1AR con Gly389 y Arg389 en el corazón. Se muestran los resultados como media (pmDE) de las inmunotransferencias de tipo Western para las proteínas indicadas de corazones de ratones ß1Arg389 y ß1Gly389 (n = 3-4 en cada grupo). Los datos están normalizados para los valores control (no tratados). Se encontró una respuesta de tratamiento global a propranolol sólo en corazones de los ratones ß1-Arg389 (P < 0,002 mediante ANOVA).

Figura 5. Ilustra las razones de riesgo y los intervalos de confianza del 95% para desenlaces de insuficiencia cardíaca estratificados por genotipo de ß1AR.

Figura 6. Este gráfico ilustra la supervivencia de los pacientes en el estudio de bucindolol-placebo estratificada por tratamiento y genotipo de ß1AR.

Figura 7. Este gráfico ilustra la probabilidad de alcanzar el criterio de valoración combinado de muerte u hospitalizaciones por insuficiencia cardíaca en el estudio de bucindolol-placebo estratificada por tratamiento y genotipo de ß1AR.

Figura 8. Cambio desde los niveles de norepinefrina iniciales pm EEM a los 3 meses y 12 meses, por grupo de tratamiento. Tanto en A como en B, los números debajo de las barras son los números de pacientes en cada grupo que tuvieron mediciones iniciales y en intervalos en cada punto de tiempo; se proporcionan valores de p para una comparación del cambio en cada grupo de tratamiento.

Figura 9. Razones de riesgo en relación con el primer cuartil para la mortalidad por cualquier causa, por cuartil de norepinefrina inicial. Los puntos de corte de norepinefrina que definen los cuartiles son: 1º, =q304 pg/ml; 2º, de 305 pg/ml a 436 pg/ml; 3º, de 437 pg/ml a 635 pg/ml; 4º, =q636 pg/ml. Los números de pacientes por cuartil son: Grupo de placebo 1º 294, 2º 255, 3º 248, 4º 264; grupo de bucindolol 1º 239, 2º 274, 3º 284, 4º 267.

Figura 10. Razones de riesgo en relación con el primer cuartil para el criterio de valoración combinado de mortalidad por cualquier causa + hospitalización por ICC, por cuartil de norepinefrina inicial.

Figura 11. Análisis de probabilidad para el cambio en norepinefrina a los 3 meses frente a mortalidad por cualquier causa posterior, grupos de tratamiento con placebo y bucindolol.

Figura 12. Las respuestas contráctiles ex vivo de ventrículo humano con insuficiencia y sin insuficiencia se correlacionan con el genotipo de ß1AR. Se utilizaron trabéculas de ventrículo derecho de corazones humanos con insuficiencia y sin insuficiencia tal como se describe en Métodos. Se estudiaron trabéculas de 11 corazones en cada uno de los cuatro grupos. Todas las bandas de Arg eran de sujetos homocigotos. Los portadores de Gly consistieron en 10 heterocigotos en el grupo sin insuficiencia y 9 en el grupo con insuficiencia, siendo el resto homocigotos para Gly. La respuesta máxima derivada de las curvas de dosis-respuesta era mayor para Arg389, tanto en los estudios sin insuficiencia (P = 0,01) como con insuficiencia (P = 0,008).

Figura 13A-D. Efecto de dosis crecientes de bucindolol o xamoterol sobre la fuerza sistólica pico (mN/mm2) en trabéculas de ventrículo derecho aisladas de corazones humanos con insuficiencia. Se realizaron las curvas de dosis-respuesta sin (bucindolol, panel A; xamoterol, panel C) y con (bucindolol, panel B; xamoterol, panel D) tratamiento previo mediante forskolina 10-5 M para potenciar la transducción de señales de ß-AR. En los experimentos con tratamiento previo con forskolina, se dejaron incubar las trabéculas con forskolina sola durante todo el periodo de tratamiento, y cualquier efecto sobre la fuerza se restó de las trabéculas tratadas con bucindolol o xamoterol. *, = p < 0,05 frente a tensión inicial; dagger, p < 0,10 frente a tensión inicial; NAK, p < 0,05 frente a pendiente de 0 para toda la curva; ¶, p < 0,05 frente a pendiente de 0 para dosis de 10-9 M a 10-6 M; los valores de p asociados con corchetes son para someter a prueba la interacción entre las pendientes de las curvas, con el 1er valor de p para dosis de entre 10-9 M y 10-6 M, y el 2º valor de p para toda la curva.

Figura 14. Consecuencias antitéticas de la estimulación adrenérgica ß1 miocárdica crónica.

Figura 15. Características del cambio de norepinefrina en grupos de riesgo y pacientes tratados con bucindolol. Se incluyen las desviaciones estándar (DE) en la tabla.

Figura 16. Características adicionales del cambio de norepinefrina en grupos de riesgo y pacientes tratados con bucindolol. Se incluyen las desviaciones estándar (DE) en la tabla.

Figura 17. Ilustración de la correlación entre el genotipo de a2cAR y los niveles de norepinefrina sistémica en pacientes de BEST.

Figura 18. Ilustración de la correlación entre el genotipo de a2cAR y la respuesta de norepinefrina sistémica (pg pm EEM) en pacientes de BEST después de tres meses.

Figura 19. Correlaciones entre el genotipo de a2cAR, la respuesta de norepinefrina sistémica (pg pm EEM) en pacientes de BEST después de tres meses y la supervivencia por grupo de tratamiento entre pacientes de BEST.

Figura 20A-D. Efecto de las variantes génicas Arg/Gly 389 de ß1AR sobre la respuesta a isoproterenol en trabéculas de VD humano aisladas. A. Respuesta a Iso con insuficiencia de ß1-AR Arg 389 homocigoto. B. Respuesta a Iso con insuficiencia de portador de ß1-AR Gly 389. C. Respuesta a Iso sin insuficiencia de ß1-AR Arg 389 homocigoto. D. Respuesta a Iso sin insuficiencia de portador de ß1-AR Gly 389.

Figura 21. Variantes génicas de ß1-AR y a2cAR: efectos del tratamiento en BEST (mortalidad).

Figura 22. Ensayos de mortalidad con ß-bloqueantes en poblaciones estadounidenses, razones de riesgo-mortalidad pm I.C. del 95%.

Figura 23. Efecto de agentes de ß-bloqueantes sobre la función sistólica en trabéculas de VDh SI (sin insuficiencia).

Figura 24. Efecto de agentes ß-bloqueantes sobre la función sistólica en trabéculas de VDh SI con amplificación de la transducción de señales mediante tratamiento con forskolina 10 µM (F).

Figura 25. Efecto de agentes de ß-bloqueantes sobre la función sistólica en trabéculas de VDh con insuficiencia.

Figura 26. Efecto de agentes ß-bloqueantes sobre la función sistólica en trabéculas de VDh con insuficiencia con amplificación de la transducción de señales mediante tratamiento con forskolina 10 µM (F).

Figura 27. Diseño I del estudio.

Figura 28. Diseño II del estudio.

Figura 29. Diseño III del estudio.

Descripción de realizaciones ilustrativas

Los inventores de la presente invención se enfrentaron a los datos de que el bucindolol parecía proporcionar respuestas terapéuticas menos favorables en ciertos subgrupos de pacientes y una respuesta menos favorable que otros ß-bloqueantes mediante ciertos criterios. Propusieron la hipótesis de que la variabilidad entre individuos en la respuesta a bucindolol en la insuficiencia cardíaca (IC) se debe a la variabilidad genética y determinaron la base para la misma. Al hacer esto, los inventores pudieron elaborar un caso significativo para el valor terapéutico del bucindolol y su idoneidad para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca en seres humanos.

Se evaluó la variabilidad genética del ß1AR en el aminoácido 389 de la proteína (ácido nucleico 1165 del gen). Esto se basó en las propiedades de los dos receptores, indicados en el presente documento como Arg389 y Gly389, según se determinó en células transfectadas, en las que las actividades adenilil ciclasa estimulada por agonista y basal son aproximadamente 3 veces mayores para el receptor con Arg (Mason et al., 1999). Sin embargo, antes de los actuales estudios, no estaba claro si los pacientes con Arg389, o Gly389, se beneficiarían más del tratamiento con bucindolol. Por ejemplo, la función potenciada de Arg389 puede haber hecho imposible que el bucindolol actúe como antagonista eficaz. No se llevó a cabo la última prueba de la hipótesis, en la que se evaluaban la muerte, el trasplante cardíaco o las hospitalizaciones por IC (exacerbaciones de la insuficiencia cardíaca en un paciente real tratado con placebo o bucindolol).

Por tanto, la presente invención abordó la cuestión de si el alelo de ß1AR con Arg (o Gly) 389 representa un locus farmacogenético para predecir la respuesta a ß-bloqueantes en la insuficiencia cardíaca usando un enfoque de tres niveles que implicaba investigaciones en células transfectadas (véase el ejemplo 1 tratado en detalle a continuación), ratones transgénicos (véase el ejemplo 2 tratado en detalle a continuación) y un ensayo clínico controlado con placebo multicéntrico grande (véase el ejemplo 3 tratado en detalle a continuación). El estudio clínico se denomina BEST (ensayo de evaluación de la supervivencia de betabloqueantes (Beta Blocker Evaluation of Survival Trial). En las células transfectadas, se evalúo el antagonismo funcional por bucindolol del AMPc estimulado por norepinefrina. Aún cuando el receptor Arg389 mostró una producción de AMPc estimulada por norepinefrina marcadamente superior, el bucindolol antagonizó la respuesta. La disminución absoluta en la producción de AMPc era sustancialmente mayor para células que expresaban Arg389 frente a Gly389, lo que se debe a la alta estimulación por norepinefrina de Arg389 y a la eficacia del bucindolol para antagonizar completamente la respuesta. Se observó una inhibición de aproximadamente el 80% de la respuesta de AMPc por Arg389 en bucindolol 0,1 µM, lo que es comparable a las concentraciones plasmáticas del fármaco a las dosis usadas en BEST (datos no publicados). Estos resultados sugerían que podría ser posible un mayor cambio en la actividad de ß1AR cardíaca a partir del tratamiento con bucindolol en aquellos pacientes con el genotipo ß1-Arg389 en comparación con el ß1-Gly389, y potencialmente dar como resultado una respuesta clínica más favorable. En los estudios con ratones transgénicos, los inventores examinaron el efecto del bloqueo ß a lo largo de un periodo de 6 meses sobre la expresión de proteínas de manejo de Ca2+ y señalización claves en el corazón. Con los ratones con Gly389, no hubo ningún efecto del tratamiento sobre la expresión de estas proteínas. Por otro lado, se observó un efecto global del tratamiento a partir del bloqueo ß en los ratones con Arg389, con cambios que son consecuentes con la remodelación inversa a nivel molecular. A continuación, se utilizó el ADN archivado de BEST, un estudio que proporcionó un grupo placebo emparejado y fenotipado extenso; debido a los resultados en las células transfectadas y los ratones transgénicos, los inventores tenían la hipótesis a priori de que ß1-Arg389 sería el genotipo más favorable para la supervivencia. En este caso, se suponía un modelo dominante. Por tanto, los dos grupos de genotipo eran homocigotos para Arg389 y pacientes con uno o dos alelos con Gly389 (es decir, homocigoto para Gly o heterocigotos; este grupo se denomina "portadores de Gly389"). Los resultados de los criterios de valoración clínicos de BEST indican que no hay beneficio de mortalidad, hospitalización por insuficiencia cardíaca o mortalidad + hospitalización por insuficiencia cardíaca del tratamiento con bucindolol en pacientes que son portadores de ß1-Gly389, pero sí mejoras clínicamente relevantes en los tres desenlaces en pacientes homocigotos para ß1-Arg389 tratados con bucindolol en comparación con placebo. Los parámetros clínicos iniciales incluyendo la frecuencia cardíaca, tensión arterial y FEVI, o la etiología de la insuficiencia cardíaca, no eran predictivos de la respuesta a los criterios de valoración en la cohorte entera que incluía todas las variantes génicas de ß1AR. Además, no hubo ningún efecto evidente del polimorfismo ß1-Gly49 sobre estas relaciones. En conjunto, los resultados de estos estudios sugieren entonces fuertemente que la variante en la posición 389 de ß1AR es un factor de pronóstico de la respuesta a bucindolol en la insuficiencia cardíaca.

Además, también se propuso un papel para la variante genética en el gen a2cAR en la eficacia del bucindolol. Los inventores de la presente invención propusieron la hipótesis de que la variabilidad entre individuos en la respuesta a bucindolol en la insuficiencia cardíaca se debe a la variabilidad genética del gen a2cAR. Por tanto, la presente invención abordó la pregunta de si el alelo a2cDel322-325 AR representa un locus farmacogenético para predecir la respuesta a bucindolol en la insuficiencia cardíaca usando BEST, un ensayo controlado con placebo multicéntrico grande (véanse los ejemplos tratados en detalle a continuación). Se utilizó el ADN archivado de BEST, un estudio que proporcionó un grupo placebo emparejado y fenotipado extenso. En este caso, se suponía un modelo dominante. Por tanto, los dos grupos de genotipo fueron 1) homocigotos para a2c de tipo natural (pacientes sin deleción en 322-325 en cualquier alelo) y homocigotos o heterocigotos para a2cDel322-325 (pacientes con la deleción en uno o ambos alelos, denominados "portadores de a2cDel322-325"). Los resultados de los criterios de valoración clínicos de BEST indican que no hay beneficio de mortalidad, hospitalización por insuficiencia cardíaca o mortalidad más hospitalización por insuficiencia cardíaca del tratamiento con bucindolol en pacientes que son portadores de a2cDel322-325, pero sí mejoras clínicamente relevantes en los tres desenlaces en pacientes homocigotos para a2c de tipo natural tratados con bucindolol en comparación con placebo. Los parámetros clínicos iniciales incluyendo la frecuencia cardíaca, tensión arterial y FEVI, o la etiología de la insuficiencia cardíaca, no eran predictivos de respuesta a los criterios de valoración en toda la cohorte que incluía todas las variantes génicas de a2cAR. En conjunto, los resultados a partir de estos estudios sugieren entonces fuertemente que el polimorfismo a2cDel322-325 es un factor de pronóstico de la respuesta a bucindolol en la insuficiencia cardíaca.

Por tanto, la presente invención se refiere a métodos que utilizan la relación genética entre el polimorfismo Arg389 de ß1AR y la terapia con bucindolol y entre el polimorfismo Del322-325 de a2cAR y la terapia con bucindolol.

I. Receptores adrenérgicos y ß-Bloqueantes

El tratamiento para la insuficiencia cardíaca ha implicado la selección como diana de los receptores adrenérgicos (AR). Existen al menos nueve subtipos de receptores adrenérgicos (Dohlman et al., 1991; y Liggett et al., 1993), de los que al menos tres subtipos son receptores ß-adrenérgicos.

Un papel potencial de las variantes genéticas comunes en la susceptibilidad, evolución y respuesta al tratamiento se sugiere mediante el agrupamiento familiar de fenotipos, la penetración reducida en cardiomiopatías familiares y las marcadas variaciones entre individuos en los desenlaces de evolución y tratamiento. Aunque se han identificado polimorfismos en receptores adrenérgicos, no ha habido ningún estudio que implique datos de pacientes en los que se haya identificado una correlación entre cualquier polimorfismo y una respuesta clínica a un agente terapéutico. La presente invención se refiere a dos polimorfismos: 1) el polimorfismo que codifica para el aminoácido en la posición 389 en ß1-AR y 2) el polimorfismo que codifica para los aminoácidos 322-325 en a2c-AR. Sin embargo, no se ha establecido la relación entre esta variante genética particular y cualquier desenlace del tratamiento con ninguna prueba cl

Reivindicaciones:

1. Método para evaluar el tratamiento con bucindolol para un paciente que comprende:

obtener información de secuencia referente a al menos un polimorfismo en un gen de receptor adrenérgico del paciente, en el que

(a)dicha información de secuencia comprende o bien (i)la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente, o bien (ii)el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; y/o (b)en el que dicha información de secuencia comprende si (i)la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente, o si (ii)la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente,

en el que es probable que el paciente presente una respuesta positiva a bucindolol si el paciente es homocigoto para Arg389 en el gen ß1AR o si el paciente es homocigoto de tipo natural en el gen a2cAR.

2. Método según la reivindicación 1, en el que dicho gen de receptor adrenérgico es ß1AR o a2cAR.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que se conoce el genotipo del paciente en la posición de nucleótido 1165 en las secuencias codificantes de uno o ambos alelos de ß1AR.

4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que se conoce dicho aminoácido en la posición 389 en las proteínas de ß1AR del paciente.

5. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que se conoce que dicho paciente tiene una deleción en la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente.

6. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se conoce que dicho paciente tiene una deleción en las posiciones 322-325 de las proteínas de a2cAR.

7. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende además obtener una muestra biológica del paciente.

8. Método según la reivindicación 7, en el que dicha muestra biológica es una muestra de sangre.

9. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende además obtener una historia del paciente referente a (i) o (ii), en el que (i) es la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos alelos de ß1AR del paciente y (ii) es el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; o en el que (i) es si la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente y (ii) es si la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente.

10. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que conocer o bien (i) o bien (ii) implica determinar (i) o (ii), en el que (i) es la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente y (ii) es el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; o en el que (i) es si la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente y (ii) es si la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente.

11. Método según la reivindicación 10, en el que o bien

(a)se determina la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en las secuencias codificantes de uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente; o bien (b)se determina la secuencia de nucleótidos en las secuencias codificantes de uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente que va a delecionarse.

12. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la determinación de la secuencia comprende secuenciación por terminación de cadena, digestión por restricción, reacción de polimerasa específica de alelo, análisis de polimorfismos conformacionales de cadena sencilla, análisis de fragmentos genéticos, electroforesis en gel en gradiente de temperatura, o reacción en cadena de la ligasa.

13. Método según la reivindicación 11 (a), en el que se determina que dicho paciente tiene una citosina en la posición 1165 en las secuencias codificantes de uno o ambos alelos de ß1AR.

14. Método según la reivindicación 13, en el que se determina que dicho paciente tiene una citosina en la posición 1165 en la secuencia codificante de un alelo de ß1AR y una guanina en la posición 1165 en la secuencia codificante del otro alelo de ß1AR.

15. Método según la reivindicación 11 (b), en el que se determina que dicho paciente tiene una deleción de los nucleótidos 964-975 en las secuencias codificantes de uno o ambos alelos de a2cAR.

16. Método según la reivindicación 15, en el que se determina que dicho paciente tiene una deleción de los nucleótidos 964-975 en las secuencias codificantes de un alelo de a2cAR y no tiene deleción de los nucleótidos 964-975 en las secuencias codificantes del otro alelo de a2cAR.

17. Método según la reivindicación 10, en el que o bien

(a)se determina dicho aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; o bien (b)se determina la deleción de los aminoácidos 322-325 en las proteínas de a2cAR.

18. Método según la reivindicación 17, en el que la determinación del aminoácido comprende usar un anticuerpo, cromatografía de líquidos de alta resolución o espectroscopia de masas.

19. Método según la reivindicación 17 (a), en el que se determina que dicho paciente tiene

(I)arginina en la posición 389 en las proteínas de ß1AR; (II)glicina en la posición 389 en las proteínas de ß1AR;o (III)arginina en la posición 389 en algunas proteínas de ß1AR y una glicina en otras proteínas de ß1AR.

20. Método según la reivindicación 17 (b), en el que se determina que dicho paciente

(I)tiene una deleción de los aminoácidos 322-325 en proteínas de a2cAR; (II)no tiene una deleción de los aminoácidos 322-325 en cualquier proteína de a2cAR;o (III)tiene tanto proteínas de a2cAR con una deleción de los aminoácidos 322-325 como proteínas de a2cAR sin una deleción de los aminoácidos 322-325.

21. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 20, que comprende además preparar un informe que contiene los resultados de la determinación de (i) o (ii), en el que (i) es la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos alelos de ß1AR del paciente y (ii) es el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente; o en el que (i) es si la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 se ha delecionado en uno o ambos alelos de a2cAR del paciente y (ii) es si la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 se ha delecionado en las proteínas de a2cAR del paciente.

22. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en el que dicho paciente tiene síntomas de o se le ha diagnosticado un estado médico que comprende insuficiencia cardíaca, cardiomiopatía dilatada, cardiopatía isquémica, feocromocitoma, migrañas, arritmias cardíacas, hipertensión o un trastorno de ansiedad.

23. Método según la reivindicación 22, en el que dicha cardiopatía isquémica es angina y/o un infarto de miocar- dio.

24. Método según la reivindicación 22, en el que dicha insuficiencia cardíaca es insuficiencia cardíaca avanzada.

25. Método según la reivindicación 24, en el que dicha insuficiencia cardíaca avanzada es insuficiencia cardíaca de clase III o IV según la NYHA.

26. Método según la reivindicación 1(a), que comprende además saber si hay una deleción en

(iii)la secuencia de nucleótidos en las posiciones 964-975 en la secuencia codificante de uno o ambos de los alelos de a2cAR del paciente; o (iv)la secuencia de aminoácidos en las posiciones 322-325 de las proteínas de a2cAR del paciente.

27. Método según la reivindicación 1(b), que comprende además conocer o bien

(iii)la secuencia en la posición de nucleótido 1165 en la secuencia codificante en uno o ambos de los alelos de ß1AR del paciente; o bien (iv)el aminoácido en la posición 389 de las proteínas de ß1AR del paciente, en el que el individuo está considerándose para el tratamiento con bucindolol.

28. Uso de bucindolol para la fabricación de un medicamento para tratar un paciente con una enfermedad cardiovascular, en el que dicho paciente

(a)no tiene niveles detectables de una proteína de ß1AR con una glicina en la posición 389; (b)es homocigoto para una citosina en la posición 1165 en la secuencia codificante de nucleótidos de ambos alelos de ß1AR; (c)no tiene niveles detectables de una proteína de a2cAR con una deleción de las posiciones 322-325; o (d)es homocigoto de tipo natural en las posiciones 964-975 en la secuencia codificante de nucleótidos de ambos alelos de a2cAR.

29. Bucindolol para tratar un paciente con una enfermedad cardiovascular, en el que dicho paciente

(a)no tiene niveles detectables de una proteína de ß1AR con una glicina en la posición 389; (b)es homocigoto para una citosina en la posición 1165 en la secuencia codificante de nucleótidos de ambos alelos de ß1AR; (c)no tiene niveles detectables de una proteína de a2cAR con una deleción de las posiciones 322-325; o (d)es homocigoto de tipo natural en las posiciones 964-975 en la secuencia codificante de nucleótidos de ambos alelos de a2cAR.
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