KIT DE ANALISIS PARA CD14 HUMANA DE BAJO PESO MOLECULAR Y ANTICUERPO.

Un kit de inmunoanálisis sándwich que detecta CD14 humana bajo peso molecular,

sin detectar CD14 humana de elevado peso molecular, que comprende:

(a) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2; y

(b) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición de 17a a la posición de 26a del SEQ ID NO: 5;

donde dicha CD14 humana bajo peso molecular tiene rasgos característicos siguientes;

(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. Acceso FERM BP-7296),

(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y

(3) se puede obtener de sangre humana

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2003/014389.

Solicitante: MOCHIDA PHARMACEUTICAL CO., LTD..

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 7, YOTSUYA 1-CHOME,SHINJUKU-KU TOKYO 160-8515.

Inventor/es: FURUSAKO,SHOJI, SHIRAKAWA,KAMON.

Fecha de Publicación: .

Fecha Concesión Europea: 10 de Marzo de 2010.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K14/705Z
  • C07K16/28Z

Clasificación PCT:

  • C07K16/28 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C07K7/00 C07K […] › Péptidos con 5 a 20 aminoácidos en una secuencia totalmente determinada; Sus derivados.
  • C12N15/06 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Células animales.
  • C12P21/08 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Anticuerpos monoclonales.
  • G01N33/53 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.

Clasificación antigua:

  • C07K16/28 C07K 16/00 […] › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C07K7/00 C07K […] › Péptidos con 5 a 20 aminoácidos en una secuencia totalmente determinada; Sus derivados.
  • C12P21/08 C12P 21/00 […] › Anticuerpos monoclonales.
  • G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.

Fragmento de la descripción:

Kit de análisis para CD14 humana de bajo peso molecular y anticuerpo.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un anticuerpo que se une a un péptido que tiene una secuencia especifica de aminoácidos en las secuencias de aminoácidos para CD14 humana de elevado peso molecular.

Además, la presente invención se refiere a un kit de análisis para CD14 humana de bajo peso molecular y un método de medición de la misma. Por otra parte, la presente invención se refiere a un método de diagnóstico novedoso de la sepsis en el que se determina directamente CD14 humana bajo peso molecular.

Técnica anterior

Una molécula CD14 fue nombrada como una proteína identificada por una familia de anticuerpos que reconocen las glicoproteínas expresadas en la superficie de la membrana de los monocitos en la Tercera Conferencia de Tipificación de Leucocitos, 1986. En 1990, Wright et al. dilucidaron que la molécula de CD14 es un receptor de LPS, endotoxina ("Science", vol. 249, págs. 1431-1433, 1990). La molécula de CD14 es una glucoproteína que tiene un peso molecular de 53-55 kDa, y los análisis de ADNc revelaron que el ARNm de 1,4 KB tiene una secuencia codificante de 356 aminoácidos ("Nucleic Acids Research" (U.K.), vol. 16, págs. 4173, 1988).

Se informó de que las moléculas de CD14 humanas incluyen moléculas de CD14 soluble además de moléculas de CD14 unidas a membrana y la sangre contiene moléculas de CD14 soluble que tienen diferentes pesos moleculares ("European Journal of Immunology" (Alemania), vol. 23, págs. 2144-2151, 1993). Además, Landmann, et al. realizaron análisis de transferencia Western de CD14 soluble en el suero de pacientes que sufrían sepsis e informaron de que CD14 soluble de aproximadamente 55 kDa se encontraba a altos niveles en pacientes no supervivientes a la sepsis y en pacientes con hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN), y que en sueros normales, no se detectó esta molécula, pero se detectó CD14 soluble de 49 kDa, un peso molecular ligeramente menor que el anterior ("The Journal of Infectious Disease", vol. 171, págs. 639-644, 1995).

Stelter informó de que la diferencia en las cadenas de azúcar que participan en los subtipos que tienen diferentes pesos moleculares y dos subtipos de CD14 soluble que tienen diferentes pesos moleculares se encuentran en la sangre, incluso después de la eliminación de las cadenas de azúcar unidas a N y a O ("European Journal of Biochemistry" (Alemania), vol. 236, págs. 457-464, 1996). Además, Bufler et al. llevaron a cabo el análisis C-terminal de CD14 soluble e informaron de que un grupo GPI se une a un residuo serina en la posición 327 de CD14 soluble y que una molécula de CD14 soluble que tiene un peso molecular de aproximadamente 56 kDa es una de las especies moleculares a las que no está anclada GPI ("European Journal of Immunology" (Alemania), vol. 25, págs. 604-610, 1995).

Los anticuerpos contra las moléculas de CD14 incluyen muchos anticuerpos anti-CD14, que se han elaborado y utilizado en la identificación de proteínas CD14, tales como MEM-18 preparado por Bazil et al. ("European Journal of Immunology" (Alemania), vol. 16, págs. 1583-1589, 1986), RoMo-1 preparado por Shutt et al. ("Allergie und Immunologie" (Alemania), vol. 34, págs. 17-26, 1988), y 3C10 preparado por Steinman et al. ("Journal of Experimental Medicine" (EE.UU.), vol. 158, págs. 126-145, 1983).

Además, los sistemas de análisis para CD14 solubles que utilizan los anticuerpos han sido referidos por Shutt et al. (DE-286876-A), Bazil et al. ("Molecular Immunology" (Reino Unido), vol. 26, págs. 657-662, 1989), y Grünwald et al. ("Journal of Immunological Methods" (Holanda), vol. 155, págs. 225-232, 1992), permiten el análisis de la CD14 soluble en fluidos corporales humanos.

Además, se han comercializado kits de ELISA para CD14 soluble de IBL-Hanburg, Medgenix, y R & D Systems, y se ha realizado el análisis de CD14 soluble de muchas enfermedades tales como la sepsis ("Clinical Immunology and Immunopathology" (EE.UU.), vol. 80, págs. 307-310, 1996, Y "Rinshokensa", vol. 38, págs. 341-344, 1994).

Sin embargo, se constató que CD14 soluble no es un marcador especifico de la sepsis debido a los incrementos en los niveles de las moléculas de CD14 soluble de aproximadamente 55 kDa y 49 kDa (de informe a informe, los pesos moleculares son diferentes y no se limitan a alrededor de 55 kDa y 49 kDa, y lo mismo se aplicará en la siguiente descripción) en función del grado en el que transcurren las enfermedades, incluso en enfermedades salvo la sepsis ("Infection and Immunity" (EE.UU.), vol. 67, págs. 417-420, 1999; "Clinical and Experimental Immunology" (U.K.), vol. 120, págs. 483-487, 2000; "Clinical Experimental Immunology" (U.K.), vol. 96, págs. 15-19, 1994). Además, se espera que la CD14 soluble sea un indicador de la gravedad de la sepsis. Sin embargo, la CD14 soluble no se ha proporcionado como un producto para el diagnóstico de la sepsis, debido a la no correlación con el choque séptico ("Pediatric allergy and inmunology") (Dinamarca), vol. 8, págs. 194-199, 1997) y también la no correlación con el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) ("European Journal of Clinical Investigation" (U.K.), vol. 28, págs. 672-678, 1998).

Los autores de la presente invención han descubierto la presencia de una molécula de CD14 soluble con un bajo peso molecular de aproximadamente 36 kDa en la sangre, además de otras como los dos tipos de moléculas de CD14 soluble descritas anteriormente de alrededor de 55 kDa y 49 kDa referidas por Landmann et al. (CD14 elevado peso molecular (de informe a informe, los pesos moleculares son diferentes y no se limitan a alrededor de 55 kDa y 49 kDa, y lo mismo se aplicará en la siguiente descripción). Los autores de la presente invención han encontrado también la presencia de una pequeña cantidad de CD14 de bajo peso molecular en los individuos normales y de una mayor cantidad de CD14 de bajo peso molecular en pacientes que sufren sepsis. En consecuencia, los autores de la presente invención han validado la eficacia clínica del análisis en una CD14 soluble de bajo peso molecular. Sin embargo, los anticuerpos anti-CD14 conocidos en la técnica son los que reconocen una proteína CD14 soluble de elevado peso molecular o los que reconocen las proteínas CD14 solubles tanto de alto como de bajo peso molecular. Así pues, no se ha conocido en la técnica un anticuerpo que reconozca sólo una CD14 de bajo peso molecular. Además, se ha considerado que la secuencia de aminoácidos de la proteína CD14 de bajo de peso molecular es idéntica a una parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CD14 soluble de elevado peso molecular, de manera que se considera que es difícil la preparación de un anticuerpo como se ha descrito antes y un análisis inmunológico directo de CD14 de bajo peso molecular, utilizando el anticuerpo. Por lo tanto, como análisis para CD14 soluble de bajo peso molecular, existe una propuesta en la que el nivel de CD14 de bajo peso molecular en sangre se obtiene de forma indirecta, restando el nivel de CD14 de elevado peso molecular en sangre del nivel total de la CD14 soluble en sangre (Publicación Internacional WO 01/22085).

Descripción de la invención

En tales circunstancias, se ha deseado un análisis para determinar cualitativamente o cuantitativamente CD14 humana de bajo peso molecular con alta sensibilidad y especificidad de una manera conveniente, permitiendo el ensayo la determinación directa de la CD14 humana de bajo peso molecular y siendo útil para el diagnóstico de un paciente que sufre sepsis, y un kit de análisis para su análisis. Además, se ha deseado un anticuerpo contra la CD14 humana de bajo peso molecular útil para el análisis.

Los autores de la presente invención han inventado, como resultado de un estudio extenso, un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, preparado utilizando un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2. Además, los autores de la presente invención han inventado un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 4 que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición 17a a la posición 26a del SEQ ID NO: 5, así como un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5, que compite con el mismo.

Además, los autores de la presente invención han inventado una prueba para determinar específicamente CD14 humana de bajo peso molecular de acuerdo con la reivindicación 7 o la reivindicación 6 y un kit de análisis...

 


Reivindicaciones:

1. Un kit de inmunoanálisis sándwich que detecta CD14 humana bajo peso molecular, sin detectar CD14 humana de elevado peso molecular, que comprende:

(a) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2; y
(b) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición de 17a a la posición de 26a del SEQ ID NO: 5;
donde dicha CD14 humana bajo peso molecular tiene rasgos característicos siguientes;
(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana.

2. Un kit de inmunoanálisis sándwich que detecta CD14 humana bajo peso molecular sin detectar CD14 humana de elevado peso molecular, que comprende:

(a) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2;
(b) un anticuerpo que compite con un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición de 17a a la posición 26a del SEQ ID NO: 5;
donde dicha CD14 humana bajo peso molecular tiene los rasgos característicos siguientes;
(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. de Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana.

3. Un anticuerpo que se une a CD14 humana bajo peso molecular, pero no a CD14 de elevado peso molecular donde el anticuerpo se prepara mediante el uso de un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2 como antígeno, donde dicha CD14 humana de bajo peso molecular tiene los rasgos característicos siguientes;

(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. de Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana.

4. Un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición 17a a la posición de 26a del SEQ ID NO: 5.

5. Un anticuerpo que compite con un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición de 17a a la posición 26a del SEQ ID NO: 5.

6. Un método in vitro para detectar CD14 humana de bajo peso molecular sin detectar CD14 humana de elevado peso molecular mediante un kit de inmunoanálisis sándwich que comprende:

(a) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2; y
(b) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición de 17a a la posición 26a del SEQ ID NO: 5;
donde dicha CD14 humana bajo peso molecular tiene los rasgos característicos siguientes;
(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. de Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana.

7. Un método in vitro para detectar CD14 humana de bajo peso molecular sin detectar CD14 humana de elevado peso molecular mediante un kit de análisis sándwich que comprende:

(a) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2;
(b) un anticuerpo que compite con un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición 17a a la posición 26a del SEQ ID NO: 5, donde dicha CD14 humana de bajo peso molecular, tiene los rasgos característicos siguientes:
(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. de Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana.

8. Un método in vitro para la detección de la sepsis en la sangre de un paciente que comprende las etapas de: medir la cantidad de una CD14 humana de bajo peso molecular en la sangre del paciente mediante un equipo de inmunoanálisis sándwich que comprende:

(a) un anticuerpo que se une al péptido de la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2;
(b) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición 17a a 26a del SEQ ID NO: 5;
donde dicha CD14 humana bajo peso molecular tiene los rasgos característicos siguientes:
(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. de Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana;

comparando la cantidad medida con una cantidad patrón de un individuo normal, y evaluando si la cantidad medida es superior a la cantidad patrón de un individuo normal.

9. Un método in vitro para la detección de la sepsis en la sangre de un paciente que comprende las etapas de: la medición de una cantidad de una CD14 humana de bajo peso molecular en la sangre de un paciente mediante un equipo de inmunoanálisis sándwich que comprende:

(a) un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2;
(b) un anticuerpo que compite con un anticuerpo que se une a un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de la posición 17a a la posición 26a del SEQ ID NO: 5, donde dicha CD14 humana bajo peso molecular tiene los rasgos característicos siguientes;
(1) no se une al anticuerpo F1025-3-1 (Núm. de Acceso FERM BP-7296),
(2) muestra un pico en un intervalo de peso molecular de 25 a 45 kDa en una cromatografía de filtración en gel, y
(3) se puede obtener de sangre humana;

comparando la cantidad medida con una cantidad patrón de un individuo normal, y evaluando si la cantidad medida es superior a la cantidad patrón de un individuo normal.


 

Patentes similares o relacionadas:

AGENTE INMUNOTERAPÉUTICO PARA CD37 Y COMBINACIÓN CON UN AGENTE QUIMIOTERAPÉUTICO BIFUNCIONAL DEL MISMO, del 21 de Noviembre de 2011, de Emergent Product Development Seattle, LLC: Una molécula de unión específica a CD37, que comprende una secuencia de aminoácidos como se muestra en el SEQ ID NO. 253

BLOQUEO DE LA MIGRACIÓN DE LEUCOCITOS Y DE LA INFLAMACIÓN POR INTERFERENCIA CON CD99/HEC2, del 17 de Noviembre de 2011, de CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC.: Un anticuerpo anti-CD99 que inhibe la migración transendotelial (MTE) de leucocitos mediada por CD99, para uso en un procedimiento para el tratamiento de una estado […]

ENSAYOS Y MÉTODOS USANDO BIOMARCADORES, del 21 de Septiembre de 2011, de GENENTECH, INC.: Un procedimiento para predecir la sensibilidad de una muestra de tejido o de células de mamífero a un anticuerpo agonista de DR4 o anticuerpo agonista de DR5, […]

FRAGMENTO DE ANTICUERPO CAPAZ DE MODULAR LA MULTIRRESISTENCIA Y COMPOSICIONES Y KITS Y MÉTODOS QUE UTILIZAN EL MISMO, del 2 de Septiembre de 2011, de TECHNION RESEARCH AND DEVELOPMENT FOUNDATION, LTD.: Un anticuerpo Fv monocatenario que comprende una región de fijación de antígeno capaz de fijar una porción extracelular de una glicoproteína P, en donde el anticuerpo […]

PREVENTIVO O REMEDIO PARA ENFERMEDADES INFLAMATORIAS DEL INTESTINO QUE CONTIENE ANTICUERPO ANTI-CD81 COMO PRINCIPIO ACTIVO, del 16 de Agosto de 2011, de DAINIPPON SUMITOMO PHARMA CO., LTD.: Uso de anticuerpo anti-CD81 para la preparación de una composición farmacéutica para prevenir, mejorar o tratar enfermedad inflamatoria del intestino (EII)

Imagen de 'UTILIZACIÓN DE UN ANTICUERPO ANTI-CD151 PARA EL TRATAMIENTO DEL…'UTILIZACIÓN DE UN ANTICUERPO ANTI-CD151 PARA EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER, del 21 de Junio de 2011, de PIERRE FABRE MEDICAMENT: Uso de al menos un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales, capaz de unirse a la proteína CD151 y de inhibir así el crecimiento tumoral para la preparación […]

Imagen de 'ANTICUERPOS CONTRA EL RECEPTOR DEL FACTOR I DE CRECIMIENTO SIMILAR…'ANTICUERPOS CONTRA EL RECEPTOR DEL FACTOR I DE CRECIMIENTO SIMILAR A INSULINA Y USOS DE LOS MISMOS, del 6 de Junio de 2011, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Anticuerpo ligante de IGF-1R humano, caracterizado porque comprende: a) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de […]

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS DE ANTICUERPOS PARA ENFERMEDADES CAUSADAS POR VIRUS, del 3 de Junio de 2011, de THERANOR SPRL: Una composición farmacéutica para usar en el tratamiento de una enfermedad causada por virus de la gripe en seres humanos, conteniendo dicha composición una […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .