Gen asociado con cáncer de hígado, y método para la determinación del riesgo de adquirir cáncer de hígado.

Un método para detectar cáncer de hígado detectando en una muestra la presencia de metilación de uno cualquiera o más de los genes o de las regiones génicas del grupo que consiste en el gen humano SALL3c, gen humano ECEL1, gen humano FOXC1, gen humano NRG3 y gen humano KCNIP2, una región génica representada por SEC ID Nº: 6

(NT_037622.5, 1393861 a 1395960) y una región génica representada por SEC ID Nº: 7 (NT_022135.15, 7774305 a 7776805) que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº: 8 y SEC ID Nº: 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº:12 y SEC ID Nº:13 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº:16 y SEC ID Nº:17 para el gen humano FOXC1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº: 20 y SEC ID Nº: 21 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº: 24 y SEC ID Nº: 25 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº: 28 y SEC ID Nº: 29 para la región génica representada por SEC ID Nº: 6, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº: 32 y SEC ID Nº: 33 para la región génica representada por SEC ID Nº: 7, donde la muestra se selecciona del grupo que consiste en sangre y tejido hepático de un sujeto.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2008/003082.

Solicitante: The University of Tokyo.

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 3-1, Hongo 7-chome, Bunkyo-ku Tokyo 113-8654 JAPON.

Inventor/es: ISHIZAWA,TAKEAKI, KOKUDO,NORIHIRO, YOSHIKAWA,HIROHIDE, SHIKAUCHI,YUKO, MURASE,YACKO.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/09 (Tecnología del ADN recombinante)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/50 (Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre, de orina; Investigación o análisis por métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Investigación o análisis inmunológico (procedimientos de medida, de investigación o análisis diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto; procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/02 (en los que intervienen microorganismos vivos)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/15 (preparaciones medicinales)

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Fragmento de la descripción:

Gen asociado con cáncer de hígado, y método para la determinación del riesgo de adquirir cáncer de hígado

Campo técnico:

La presente invención se refiere a un método para medir un riesgo de adquirir cáncer de hígado causado por un virus de la hepatitis u otra causa. Más específicamente, la invención se refiere a un método, a un gen marcador, y a un kit diagnóstico para determinar la presencia o ausencia de un factor genético de cáncer de hígado detectando la presencia o ausencia de metilación de un gen que afecta a un riesgo de cáncer de hígado en una muestra que contiene ADN genómico humano, tal como un componente de la célula sanguínea o un componente del plasma extraído de un sujeto. La invención también se refiere a un método para seleccionar un agente terapéutico candidato para el cáncer de hígado.

Antecedentes de la técnica:

El cáncer de hígado es un nombre que hace referencia a un tumor maligno que ocurre en el hígado y puede clasificarse de manera aproximada a partir de sus metástasis en un carcinoma hepatocelular, que ocurre principalmente en las células hepáticas, y al cáncer de hígado metastásico, que se origina a partir de un órgano distinto al hígado y después de transfiere al hígado. Un informe de la mortalidad del cáncer realizado por el Departamento de Estadística en el año 1996 revela que aproximadamente 10.000 pacientes mueren por cáncer cada año en Japón y que la mortalidad del cáncer de hígado es del 21, 4 % (1996) , que es una enfermedad causante importante después del cáncer de estómago, y, en los 40 y 50, la mortalidad del cáncer de hígado es más elevada que la del cáncer de estómago.

También, se ha informado recientemente que el número de muertes por cáncer de hígado es de 34.000, que es aproximadamente el 11 % del número total de muertes por cáncer. El noventa por ciento o más de los pacientes con cáncer de hígado están infectados con el virus de la hepatitis, y también se dice que el número de pacientes con hepatitis viral que tienen un riesgo de desarrollar cáncer de hígado en Japón es de tres millones. El carcinoma hepatocelular constituye el 95 % del cáncer de hígado primario, y el número de muertes del mismo alcanza aproximadamente el 70 % de todas las muertes por enfermedades hepáticas. Las causas del carcinoma hepatocelular son la hepatitis crónica y la cirrosis hepática debidas a hepatitis B y C, y el número de casos de carcinoma hepatocelular celular se incrementa cada año. En aproximadamente el 70 % de las hepatitis C, la misma enfermedad progresa gradualmente y produce cirrosis hepática y después cáncer de hígado. Se sabe que aproximadamente el 80 % de los casos de cáncer de hígado están causados por hepatitis C.

El cáncer de hígado se trata mediante resección del hígado, tratamiento local, embolización terapéutica de la arteria hepática, o radioterapia. La resección del hígado es efectiva, ya que la función hepática puede soportar la operación, y se emplea más frecuentemente. En el tratamiento local, el tamaño de un tumor disminuye mediante la colocación, por ejemplo, de una aguja dentro del tumor a través de la piel e inyectando, por ejemplo, alcohol o se quema localmente con microondas o una onda de radio. La embolización terapéutica de la arteria hepática elimina a las células cancerosas mediante la oclusión de la arteria hepática para desconectar a las células cancerosas de su fuente de nutrientes. Además, la radioterapia elimina las células cancerosas irradiando el foco como una diana con un haz de radiación. Sin embargo, actualmente, la operación quirúrgica es el medio más efectivo.

Es muy posible incrementar la tasa de supervivencia de los pacientes con cáncer de hígado mediante el tratamiento en un estadio muy temprano. En el caso del carcinoma hepatocelular, se ha notificado que la tasa de supervivencia de los pacientes de carcinoma hepatocelular en estadio temprano a los cinco años es del 45 %, mientras que la tasa de supervivencia de los pacientes con carcinoma hepatocelular en estadio no temprano a los cinco años es del 11 %. Además, la supervivencia a los cinco años de los pacientes en el estadio clínico I de la enfermedad es del 91 %, y de aquellos en los estadios II y III es del 12 % y del 0 %, respectivamente. Por lo tanto, la detección temprana del cáncer de hígado es importante, y también se desea para desarrollar, por ejemplo, un agente diagnóstico que pueda diagnosticar convenientemente y con alta precisión el cáncer de hígado. Además, el riesgo de recurrencia después de la operación de cáncer de hígado es alto, y el diagnóstico de la recurrencia también es necesario.

Actualmente, como indicadores de disfunción hepática se usan ampliamente AST (GOT) , ALT (GPT) , y γ-GTP (γglutamil transpeptidasa) . Las pruebas se usan para diagnosticar la disfunción hepática, pero el diagnóstico de la inflamación, fibrilación, y progreso a cáncer requieren pruebas víricas. Además, el cáncer de hígado se diagnostica, por ejemplo, mediante diagnóstico por imagen o usando un marcador tumoral. Dado que el diagnóstico por imagen puede diagnosticar la zona que progresa a cirrosis hepática o a cáncer hepático, se emplea una prueba de ultrasonidos abdominal, TC, o RMI. La prueba TC y la prueba de ultrasonidos pueden detectar cáncer temprano incluso si su tamaño es de 10 mm o inferior y exhiben alta precisión. Sin embargo, las pruebas requieren la aprobación del seguro, un nivel técnico experto, e instalaciones altamente equipadas, lo que supone una desventaja para las pruebas frecuentes y para permitir a cualquier institución médica realizar las pruebas. También, como 65 marcadores de carcinoma hepatocelular se conocen, por ejemplo, la α-fetoproteína (AFP) y la proteína inducida por la ausencia de antagonista de la vitamina K (PIVKA-2; des-gamma-carboxiprotrombina) .

Sin embargo, la AFP y la PIVKA-2 tienen el inconveniente de que tienen una tasa de positivos baja, de aproximadamente el 30 al 40 %. Se determina que un sujeto con un nivel de AFP de 20 ng/ml o más tiene carcinoma hepatocelular. Sin embargo, dado que la AFP también se incrementa en pacientes sin cáncer de hígado, tales como los de hepatitis crónica y cirrosis de hígado activa, la discriminación entre los casos leves y moderados es difícil. Por 5 lo tanto, en algunos casos, se usa una fracción de AFP-L3, que es un marcador tumoral que exhibe mayor especificidad para el carcinoma hepatocelular. Por otro lado, la PIVKA-2 es un marcador tumoral que tiene alta especificidad para el carcinoma hepatocelular y raramente se incrementa en otras enfermedades. Sin embargo, se observa un nivel incrementado de este, por ejemplo, en daño hepático por consumo de alcohol, durante la administración de fármacos (por ejemplo, warfarina o un fármaco antituberculoso) , y durante carencias vitamínicas,

aunque no se tenga carcinoma hepatocelular.

En el diagnóstico presente actualmente, el cáncer de hígado se diagnostica usando una combinación de AFP, fracción AFP-L3, y PIVKA-2. Se requiere el diagnóstico del cáncer de hígado usando un marcador sanguíneo para tener una mejora del rendimiento diagnóstico para el cáncer de hígado. Es decir, se necesita un marcador

diagnóstico eficaz que tenga capacidad y sensibilidad incrementada.

Por lo tanto, se desea desarrollar un nuevo método, y, por ejemplo, un candidato de este es el uso de la metilación aberrante del gen P16, que es un gen relacionado con cáncer, como un indicador (Bibliografía 1 que no es de Patente) . Además, se propone un método diagnóstico para determinar si un sujeto tiene hepatitis C severa en progresión a cáncer de hígado midiendo el nivel de GPC3 en una muestra de un... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método para detectar cáncer de hígado detectando en una muestra la presencia de metilación de uno cualquiera o más de los genes o de las regiones génicas del grupo que consiste en el gen humano SALL3c, gen 5 humano ECEL1, gen humano FOXC1, gen humano NRG3 y gen humano KCNIP2, una región génica representada por SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) y una región génica representada por SEC ID Nº : 7 (NT_022135.15, 7774305 a 7776805) que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :16 y SEC ID Nº :17 para el gen humano FOXC1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33 para la región génica representada por SEC ID Nº : 7, donde la muestra se selecciona del grupo que consiste en sangre y tejido hepático de un sujeto.

2. El método de acuerdo a la reivindicación 1, donde la metilación se detecta o identifica mediante un conjunto de cebadores seleccionados del grupo que consiste en: un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :10 y SEC ID Nº :11 para el gen humano SALL3c; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :14 y SEC ID Nº :15 para el gen 20 humano ECEL1; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :16 y SEC ID Nº :17, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :18 y SEC ID Nº :19 para el gen humano FOXC1; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 22 y SEC ID Nº : 23 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 26 y SEC ID Nº : 27 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 30 y SEC ID Nº : 31 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 34 y SEC ID Nº : 35 para la región génica representada por SEC ID Nº : 7.

3. Uso de un polinucleótido para el diagnóstico in vitro del cáncer de hígado, caracterizado por que el polinucleótido puede detectar la metilación de al menos uno de los genes o de las regiones génicas seleccionados del grupo que consiste en:

(1) gen humano SALL3c,

(2) gen humano ECEL1, 35 (3) gen humano FOXC1,

(4) gen humano NGR3,

(5) gen humano KCNIP2,

(6) SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) y

(7) SEC ID Nº : 7 (NT_022135.15, 7774305 a 7776805

que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº : 13 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :16 y SEC ID Nº :17 para el gen humano FOXC1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25 para el gen humano 45 KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 y SEC ID Nº : 6, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33 para SEC ID Nº : 7.

4. Uso de un kit para el diagnóstico in vitro de cáncer de hígado, caracterizado por que el kit comprende uno o más polinucleótidos que pueden detectar la metilación de al menos uno de los genes o de lasregiones génicas 50 seleccionadas del grupo que consiste en:

(1) gen humano SALL3c,

(2) gen humano ECEL1,

(3) gen humano FOXC1, 55 (4) gen humano NGR3,

(5) gen humano KCNIP2,

(6) SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) y

(7) SEC ID Nº : 7 (NT_022135.15, 7774305 a 7776805

que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :16 y SEC ID Nº : 17 para el gen FOXC1 humano, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 para SEC ID Nº : 6, y un conjunto de 65 cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33 para SEC ID Nº : 7.

5. Uso de una micromatriz para el diagnóstico in vitro del cáncer de hígado, caracterizado por que la micromatriz comprende uno o más polinucleótidos que pueden detectar la metilación de al menos uno de los genes o regiones génicas seleccionadas del grupo que consiste en:

(1) gen humano SALL3c,

(2) gen humano ECEL1,

(3) gen humano FOXC1,

(4) gen humano NGR3,

(5) gen humano KCNIP2,

(6) SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) y

(7) SEC ID Nº : 7 (NT_022135.15, 7774305 a 7776805

que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 16 y SEC ID Nº :17 para el gen humano FOXC1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :28 y SEC ID Nº : 29 para SEC ID Nº : 6, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33 para SEC ID Nº : 7.

6. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones de 3-5, donde el polinucleótido se selecciona del grupo que consiste en: un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :10 y SEC ID Nº :11 para el gen humano SALL3c; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :14 y SEC ID Nº :15 para el gen humano ECEL1; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :16 y SEC ID Nº :17, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :18 y SEC ID Nº :19 para el

gen humano FOXC1; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 22 y SEC ID Nº : 23 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 26 y SEC ID Nº : 27 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 30 y SEC ID Nº : 31 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 34 y SEC ID Nº : 35 para la región génica representada por SEC ID Nº :

7.

7. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-6, donde el gen o la región génica se seleccionan del grupo que consiste en: 35

(1) gen humano SALL3c,

(2) gen humano ECEL1, y

(3) SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) .

8. Uso de un polinucleótido de acuerdo con las reivindicaciones 4 o 5 para fabricar un kit de detección o una micromatriz para detectar cáncer de hígado.

9. Un conjunto de cebadores seleccionado del grupo que consiste en: un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :10 y SEC ID Nº :11 para el gen 45 humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº : 13 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :14 y SEC ID Nº : 15 para el gen humano ECEL1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :16 y SEC ID Nº :17 para el gen humano FOXC1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :18 y SEC ID Nº : 19 para el gen humano FOXC1, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 20 y SEC ID Nº : 21 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 22 y SEC ID Nº : 23 para el gen humano NRG3, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 24 y SEC ID Nº : 25 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 26 y SEC ID Nº : 27 para el gen humano KCNIP2, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 30 y SEC ID Nº : 31 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 32 y SEC ID Nº : 33 para la región génica representada por SEC ID Nº : 7, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 34 y SEC ID Nº : 35 para la 55 región génica representada por SEC ID Nº : 7.

10. Un método para detectar un riesgo de recurrencia después de la operación de cáncer de hígado detectando en una muestra la presencia de metilación de uno cualquiera o más de los genes o de las regiones génicas del grupo que consiste en el gen humano SALL3c y el gen humano ECEL1, y una región génica representada por SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29, donde la muestra se selecciona del grupo que consiste en sangre y tejido hepático de un sujeto.

11. El método de acuerdo con la reivindicación 10, donde la metilación se detecta o identifica de un conjunto de cebadores seleccionados del grupo que consiste en: un conjunto de cebadores de SEC ID Nº 8 y SEC ID Nº : 9, y/o

un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :10 y SEC ID Nº :11 para el gen humano SALL3c; un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 14 y SEC ID Nº 15 para el gen humano ECEL1; y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 30 y SEC ID Nº : 31 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6.

12. Uso de un polinucleótido para el diagnóstico in vitro del riesgo de recurrencia después de la operación de cáncer de hígado, caracterizado por que el polinucleótido puede detectar la metilación de al menos uno de los genes o de las regiones génicas seleccionados del grupo que consiste el gen humano SALL3c, el gen ECEL1 humano, y/o la metilación de las regiones génicas SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) , que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6.

13. Uso de un kit para el diagnóstico in vitro del riesgo de recurrencia después de la operación de cáncer de hígado,

caracterizado por que el kit comprende uno o más polinucleótidos que pueden detectar la metilación de al menos uno de los genes o de las regiones génicas seleccionados del grupo que consisten en el gen humano SALL3c, el gen ECEL1 humano, y/o la metilación de las regiones génicas SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) , que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6.

14. Uso de una micromatriz para el diagnóstico in vitro del riesgo de recurrencia después de la operación de cáncer de hígado, caracterizado porque la micromatriz comprende uno o más polinucleótidos que pueden detectar la metilación de al menos uno de los genes o de las regiones génicas seleccionados del grupo que consisten en el gen humano SALL3c, el gen ECEL1 humano, y/o la metilación de las regiones génicas SEC ID Nº : 6 (NT_037622.5, 1393861 a 1395960) , que es detectable usando un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13 para el gen humano ECEL1, y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6.

15. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12-14, en el que el polinucleótido se selecciona del grupo que consiste en: un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :10 y SEC ID Nº : 11 para el gen humano SALL3c, un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :12 y SEC ID Nº :13, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº :14 y SEC ID Nº :15 para el gen humano ECEL1; y un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 28 y SEC ID Nº : 29, y/o un conjunto de cebadores de SEC ID Nº : 30 y SEC ID Nº : 31 para la región génica representada por SEC ID Nº : 6.

16. Uso de un polinucleótido acuerdo a las reivindicaciones 13 o 14 para fabricar un kit de detección o una micromatriz para detectar el riesgo de recurrencia después de la operación de cáncer de hígado.