Sector de la técnica

El objeto de la presente invención lo constituyen procedimientos de preparación, conservación, y usos en peces, del probiótico Sewanella putresfaciens Pdp11 para el control de enfermedades y la mejora en el crecimiento, particularmente mediante la utilización de dicho probiótico en la elaboración de productos alimenticios para peces, particularmente piensos.

Estado de la técnica

La quimioterapia es una de las estrategias empleadas para la profilaxis y tratamiento de enfermedades bacterianas que afectan a las especies piscícolas cultivadas. Esta aplicación en la que normalmente se emplean grandes cantidades de antibióticos suele solventar situaciones de emergencia. Sin embargo, existen factores que limitan e incluso hacen contraproducente su uso: aparición de cepas resistentes a los antibióticos, acumulación de los antibióticos en los tejidos animales o afectación de la microbiota del entorno.

Los probióticos son microorganismos que, administrados en la dieta de los individuos, proporcionan beneficios sobre la salud [Clancy, R. (2003) . Immunobiotics and probiotics evolution. FEMS Immunology and Medical Microbiology 38: 9-12.]. Varios son los mecanismos propuestos para el modo de actuación de los probióticos: (i) supresión de los patógenos a través de una exclusión competitiva para la producción de compuestos antimicrobianos, la competición por los nutrientes y por los lugares de adhesión en las superficies mucosas; (ii) un efecto de inmunoestimulación; y (iii) la posible mejora de la nutrición del hospedador, a través de la producción de vitaminas, destoxificación de componentes de la dieta, y por lisis de compuestos no digeribles, que pueden ser posteriormente asimilados por el hospedador.

Sin embargo, el gran problema de su administración oral es que estas bacterias pueden morir antes de llegar al intestino, ya sea por deshidratación al estar en contacto con el pienso o

por la acción de las enzimas digestivas del estómago. El método de la presente invención intenta resolver estos problemas. No obstante, en [Salinas, l.; A. Cuesta, M. A. Esteban, J. Meseguer (2005) . Dietar y administration of Lactobacillus delbrüeckii and Bacillus subtilis, single or combined, on gilthead 5 seabream cellular innate immune responses. Fish & Shellfish Immunology 19: 67-77.] se describen otros métodos de administración de probióticos por vía oral. En todos los casos, los probióticos se añaden o se mezclan con el pienso sin un tratamiento previo. Esto puede generar una elevada tasa de mortalidad en las bacterias (sobre todo aquellas que sean más susceptibles a cambios ambientales) lo que puede reducir su utilidad como probiótico. Existen métodos para 1 O aumentar la supervivencia de las bacterias, como la conservación por desecación junto a prebióticos [Corcoran, B.M.; R.P. Ross, G.F. Fitzgerald, C. Stanton (2004) . Comparative survival of probiotic lactobacilli spray-dried in the presence of prebiotic substances. Journal of Applied Microbiology 96: 1024-1039.] pero en el caso de la Shewanella, la desecación no es viable. 15 En [Diez-Rosales, P. et al. (2009) . Effects of two closely rated prebiotics on respirator y burst activity of Senegalese Sol e (Solea Senegalensis, Kaup) phagocytes and protection against Photobacterium damselae subsp. Piscicida. Aquaculture, vol. 293: 16-21.] se describe el antecedente más cercano a la presente invención, en donde se relata la encapsulación de bacterias liofilizadas Pdpll (Shewanella putresfaciens) y Pdp13 (Shewanella baltica) donde 20 alguna de ellas está suspendida en una solución de alginato sódico. Los resultados obtenidos en este estudio muestran un considerable crecimiento para la especia Solea Senegalensis alimentados con comida que incluye Shewanella putrefaciens Pdp11 respecto de las especies alimentadas con alginato sódico. 25 Descripción detallada de la invención El probiótico Shewanella putresfaciens Pdp11 es una bacteria aislada de la piel de doradas sanas. Se conoce, entre otros, su capacidad de protección en peces (doradas y lenguados) frente a la inoculación con patógenos bacterianos (en concreto frente a Photobacterium damselae subsp. 30 piscicida) . Constituyen por tanto un primer aspecto de la presente invención un probiótico compuesto por células enteras de la cepa Pdp 11 depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo con referencia CECT 7627, particularmente para la inducción de una mejora en el

crecimiento de los peces que los ingieren, para el control de enfermedades en peces, y/o para la inducción de una mejora en el estado fisiológico de los enterecitos del intestino en peces. Constituye un segundo aspecto de la invención el procedimiento de cultivo del probiótico antes referido, que comprende la siembra en medio Agar Tripticasa de Soja suplementado con 5 NaCl hasta el 2% de concentración final (TSAs) , y la incubación a 15-22 oc durante 24-48 h, más preferentemente a 22 oc durante 24 h. Constituye un tercer aspecto de la invención el procedimiento de preparación de una suspensión del probiótico antes referido, cultivado o no conforme al procedimiento indicado como segundo aspecto de la invención, que comprende la recogida de la masa bacteriana 1 O resultante del cultivo de dicho probiótico, y la incorporación de la misma en una matriz de alginato, preferentemente mediante su resuspensión en alginato sódico al 0, 5%, más preferentemente sin ningún proceso de liofilización, o de inactivación fisica o química, previo a dicha incorporación o suspensión en alginato. La incorporación en una matriz de alginato protege al probiótico de la deshidratación 15 producida por la propia sequedad del producto alimenticio (pienso) al que es adicionado, al mismo tiempo que facilita la adhesión de las bacterias a su superficie. Además, la incorporación o suspensión en alginato conserva la viabilidad del probiótico a su paso por el estómago del pez. Una vez que las bacterias han superado el proceso de degradación enzimática y ataque ácido del estómago, pueden liberarse y adherirse a la superficie del intestino, donde el probiótico realizará 20 su función. Constituye un cuarto aspecto de la presente invención un procedimiento de conservación del probiótico, cultivado y/o incorporado en una matriz de alginato conforme a los aspectos segundo y tercero antes comentados, caracterizado porque mantiene el probiótico sin pérdida significativa de viabilidad durante al menos 20 -30 días y comprende su almacenamiento a 4 °C. 25 Para el caso de probiótico cultivado conforme al segundo aspecto de la presente invención, el procedimiento comprende además la recogida de masa bacteriana cultivada y su resuspensión en una solución de alginato sódico al 0, 5%; preferentemente comprende la recogida de un total de 1012 ufc que posteriormente se resuspenden en 100 ml de una solución de alginato sódico al 0, 5%. En cualquiera de los casos, la recuperación del probiótico conservado conforme al 30 procedimiento que constituye este cuarto objeto de la invención se realiza preferentemente mediante incubación a temperatura ambiente. Constituye un quinto aspecto de la presente invención un procedimiento de elaboración de productos alimenticios para peces que comprende el cultivo de un probiótico conforme al

primer objeto de la presente invención. Del mismo modo, constituye un sexto aspecto de la presente invención un procedimiento de elaboración de productos alimenticios para peces que emplea un probiótico cultivado conforme al procedimiento de cultivo correspondiente al segundo aspecto de la presente invención, . Paralelamente, constituye un séptimo aspecto de la presente invención un procedimiento de elaboración de productos alimenticios para peces que 5 emplea una suspensión del probiótico preparada según el procedimiento de preparación correspondiente al tercer aspecto de la presente invención. También constituye un aspecto (octavo) de la presente invención un procedimiento de elaboración de productos alimenticios para peces que emplea un probiótico conservado según el procedimiento de conservación correspondiente al cuarto aspecto de la presente invención. Particularmente, constituye un objeto... [Seguir leyendo]

l. Procedimiento de cultivo de un probiótico compuesto por células enteras de Shewanella

putresfaciens depositada en la colección Española de Cultivos Tipo con referencia CECT 7627 que comprende:

a. Siembra en medio Agar Tripticasa de Soja suplementado con NaCl hasta el 2% de concentración final (TSAs ) , e

b. Incubación a 15-22 oc durant.

2. 48 h.

1O 2. Procedimiento de cultivo de un probiótico según la reivindicación 1, caracterizado porque la incubación se realiza a 22 oc durante 24 h. que comprende:

3. Procedimiento de cultivo de un probiótico según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que comprende un paso adicional e) de recogida de la masa bacteriana resultante de dicho cultivo.

4. Procedimiento de cultivo de un probiótico según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende un paso adicional de conservación de la masa bacteriana resultante de dicho cultivo a 4 °C.

5. Uso de la masa bacteriana obtenida mediante un procedimiento según cualquiera de las

reivindicaciones 1-3 para la elaboración de una suspensión probiótica que comprende la 20 incorporación de la masa bacteriana en una matriz de alginato.

6. Uso de la masa bacteriana según la reivindicación 5 donde la masa bacteriana no es sometida, previo a su incorporación en la matriz de alginato, a ningún proceso de liofilización o de inactivación fisica o química.

7. Uso de la masa bacteriana según cualquiera de las reivindicaciones 5-6, caracterizado

porque la incorporación en la matriz de alginato se realiza mediante su resuspensión en alginato sódico al 0, 5%.

8. Uso según la reivindicación 7 donde la suspensión probiótica obtenida es conservada a 4

oc.

9. Uso de la suspensión probiótica obtenida según cualquiera de las reivindicaciones 5-8, 30 para la elaboración de productos alimenticios para peces.

10. Uso según la reivindicación 9, donde la suspensión probiótica es añadida a un pienso en agitación.

11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 9-10, donde el pienso en agitación, es suplementado con CaCh 50 mM.

12. Uso según la reivindicación 11, donde el pienso en agitación, es suplementado con 80 ml de CaCh 50 mM. 13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 9-11, donde la suspensión probiótica es 5 añadida en una cantidad de 100 ml de suspensión por cada kg de pienso. 14. Uso de la masa bacteriana obtenida mediante un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para la elaboración de productos alimenticios para peces. 15. Producto alimenticio para peces que comprende la masa bacteriana obtenida mediante un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1-4. 1 O 16. Producto alimenticio para peces que comprende una suspensión probiótica según cualquiera de las reivindicaciones 5-8.