MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO PARA LA DETECCIÓN Y/O LA DISCRIMINACIÓN A NIVEL DE LA ESPECIE DE LOS ENTEROCOCOS RESISTENTES A LOS GLICOPÉPTIDOS.
Medio de cultivo sólido para la detección y/o la discriminación de los grupos de especies de enterococos resistentes a los glicopéptidos:
- E. faecalis y/o E. faecium, que pertenecen a los grupos de resistencia a los glicopéptidos VanA/VanB; y - E. gallinarum/E. casseliflavus que pertenecen al grupo de resistencia a los glicopéptidos VanC, comprendiendo dicho medio, en un medio de cultivo selectivo para enterococos, por lo menos un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa y por lo menos un activador de reacción coloreada seleccionado de entre el metil-α-glucósido o sus polímeros y el glucosil-α-glucósido o sus polímeros
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2007/057006.
Solicitante: RAMBACH, ALAIN.
Nacionalidad solicitante: Francia.
Dirección: 73 BLD MONTPARNASSE F-75006 PARIS FRANCIA.
Inventor/es: RAMBACH, ALAIN.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 10 de Julio de 2007.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/04B
- C12Q1/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Enterobacterias.
Clasificación PCT:
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
PDF original: ES-2356397_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Medio de cultivo sólido para la detección y/o la discriminación a nivel de la especie de los enterococos resistentes a los glicopéptidos.
La presente invención se refiere al campo de la microbiología médica y clínica. Más particularmente, la invención se refiere a los medios que permiten detectar y/o discriminar unas especies bacterianas responsables de infecciones que, por ser resistentes a uno o varios antibióticos, requieren la adaptación de los tratamientos terapéuticos.
De manera más precisa, la presente invención se refiere a un medio de cultivo sólido para la detección y/o la discriminación, en los enterococos resistentes a los glicopéptidos, de los grupos de especies E. faecalis y/o E. faecium que pertenecen a los grupos de resistencia a los glicopéptidos VanA/VanB, y E. gallinarum/E. casseliflavus que pertenecen al grupo de resistencia a los glicopéptidos VanC, comprendiendo dicho medio, en un medio de cultivo selectivo para enterococos, por lo menos un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa y por lo menos un activador de reacción coloreada seleccionado de entre el metil-α-glucósido y el glucosil-α-glucósido, o sus polímeros.
Unas cepas de enterococos resistentes a la vancomicina (VRE) y más ampliamente a los glicopéptidos, han sido aisladas por primera vez en clínica en los años 80. Desde entonces, la incidencia de los VRE en medio hospitalario no ha dejado de crecer. Estas bacterias son responsables generalmente de infecciones nosocomiales preocupantes para el personal médico. Además, la emergencia de VRE multi-resistentes, es decir unos enterococos resistentes no sólo a la vancomicina, sino también a uno o varios antibióticos no glicopeptídicos, representa una verdadera apuesta terapéutica para los clínicos. En efecto, la multiplicidad y la diseminación de los caracteres de resistencia entre cepas de enterococos han hecho que algunas de ellas sean invulnerables a las terapias estándares.
A diferencia de los mecanismos que confieren una resistencia a la mayoría de las familias de antibióticos, la resistencia a los glicopéptidos no depende del producto de un gen único sino que necesita la expresión regulada e interactiva de un conjunto de genes estrechamente asociados: los operones de resistencia a los glicopéptidos van.
En la actualidad, varios tipos (o grupos) de resistencia a los glicopéptidos han sido identificados en los enterococos, entre los cuales los tipos VanA (operón vanA), VanB (operón VanB) y VanC (operón vanC) son los que se encuentran con más frecuencia (véase la tabla I a continuación). Algunos de estos grupos de genes son transmisibles entre cepas bacterianas (se habla entonces de resistencia adquirida), mientras que otros son intrínsecos y no transmisibles (tabla I).
En definitiva, en el seno de los VRE, las especies de enterococos más frecuentes pueden ser repartidas generalmente en especies o grupos de especies asociados más específicamente a un tipo de resistencia a los glicopéptidos dado (Tabla I).
Tal como lo muestra la tabla II a continuación, los tipos de resistencia a los glicopéptidos en los enterococos se distinguen no sólo por las secuencias genéticas responsables (secuencias de los operones van), su soporte (plasmídico o cromosómico) y los mecanismos de expresión y de regulación de la expresión utilizados (resistencia inducible o constitutiva), sino también por los niveles de resistencia a los glicopéptidos asociados.
Con el fin de detectar y/o discriminar las bacterias, se utilizan comúnmente unos métodos basados en la búsqueda de caracteres o bien fenotípicos, o bien genotípicos. Varios de estos métodos pueden por otro lado ser combinados ventajosamente para aumentar el poder discriminatorio del análisis, mejorando la selectividad y/o la sensibilidad y/o la especificidad de la detección.
En el campo particular de la detección de los VRE, un método fenotípico conocido permite discriminar, mediante coloración específica, los cultivos de VRE VanC y los cultivos de VRE no-VanC (que no se colorean). Este método, realizado en medio líquido (tubo o pocillos), utiliza una acidificación del medio relacionada con la presencia de metil-α-glucósido. En este ensayo, el azúcar se utiliza a una concentración de 20 g/l, en presencia de un indicador de pH que sirve para revelar la acidificación del medio.
Sin embargo, el poder discriminatorio de este ensayo puede ser mejorado todavía, tanto en términos de selectividad como de especificidad, por un lado con el fin de eliminar los resultados falsos-positivos o falsos-negativos susceptibles de ser obtenidos, y por otro lado, con el fin de permitir la detección de los VRE a nivel de la especie, lo cual resulta imposible con el ensayo actual.
La patente FR 2 861 741 da a conocer un medio de cultivo para detectar un enterococo caracterizado porque comprende un agente reactivo cromógeno reductor que proporciona una coloración con E. faecalis pero no proporciona ninguna coloración con E. faecium.
Existe por lo tanto actualmente la necesidad de un ensayo de detección de los VRE encontrados con más frecuencia en clínica, que sea al mismo tiempo simple, rápido, sensible, selectivo, específico y fiable, para permitir la detección discriminante de los VRE a nivel de la especie y a nivel del tipo de resistencia a los glicopéptidos asociado.
Es precisamente a esta necesidad a la que responde la presente invención proponiendo unos medios fenotípicos que se pueden utilizar en medio sólido (en cajas) para la detección eficaz y discriminante de los VRE.
A este respecto, se observará que, tal como lo muestran el ejemplo y la tabla III a continuación, la técnica del ensayo en tubo del estado de la técnica, si se aplica tal cual en medio sólido, conduce sólo a una escasa coloración de las colonias, lo cual no permite por lo tanto discriminar o diferenciar los VRE.
Por otro lado, se muestra en este caso (véase la tabla III a continuación) que un sustrato cromógeno utilizado en medio sólido no permite, por sí solo, detectar los VRE de manera satisfactoria.
Los resultados indicados en el marco de la invención muestran que la combinación en tubo del metil-α-glucósido y de un indicador de pH no puede ser simplemente sustituida, en medio sólido, por un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa, al contrario de lo que el experto en la materia podría presentir partiendo de la hipótesis probable de que la detección se realizaba mediante simple demostración de la presencia o de la ausencia del gen que codifica la enzima α-glucosidasa.
Además, la presente invención muestra que unas combinaciones diferentes de dos sustratos por lo menos de la α-glucosidasa, de los cuales uno es cromógeno, conducen, en medio sólido, a unos resultados totalmente inesperados en la medida en la que la coloración se invierte en función de los sustratos utilizados y de sus combinaciones. Se observará por otro lado que unos sustratos de la α-glucosidasa distintos de los descritos explícitamente a continuación, han sido ensayados, sin éxito, por el inventor. Por ejemplo, al contrario de la maltosa prevista a continuación, la trehalosa no permite obtener unos resultados interesantes en términos de detección y de diferenciación de las especies o grupos de especies de VRE (datos no mostrados).
Por último, los resultados obtenidos en el marco de la invención son no sólo sorprendentes e inesperados, sino también particularmente ventajosos puesto que permiten detectar de manera discriminante los VRE VanC con respecto a los VRE VanA/VanB (y recíprocamente), o bien la especie E. faecalis o también la especie E. faecium, con respecto a las demás especies de VRE.
Así, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un medio de cultivo sólido para la detección y/o la discriminación de los grupos de especies de enterococos resistentes a los glicopéptidos:
Reivindicaciones:
1. Medio de cultivo sólido para la detección y/o la discriminación de los grupos de especies de enterococos resistentes a los glicopéptidos:
comprendiendo dicho medio, en un medio de cultivo selectivo para enterococos, por lo menos un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa y por lo menos un activador de reacción coloreada seleccionado de entre el metil-α-glucósido o sus polímeros y el glucosil-α-glucósido o sus polímeros.
2. Medio de cultivo según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende por lo menos un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa y el metil-α-glucósido o uno de sus polímeros, utilizado a una concentración de por lo menos 10 g/l aproximadamente, para la detección y/o la discriminación de las especies E. gallinarum/E. casseliflavus que pertenecen al grupo de resistencia a los glicopéptidos VanC.
3. Medio de cultivo según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende por lo menos un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa y el glucosil-α-glucósido o uno de sus polímeros, utilizado a una concentración de por lo menos 0,1 g/l aproximadamente, para la detección y/o la discriminación de la especie E. faecalis que pertenece a los grupos de resistencia a los glicopéptidos VanA/VanB.
4. Medio de cultivo según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende por lo menos un sustrato cromógeno de la α-glucosidasa, el metil-α-glucósido o uno de sus polímeros, utilizado a una concentración de por lo menos 10 g/l aproximadamente, y el glucosil-α-glucósido o uno de sus polímeros, utilizado a una concentración de por lo menos 0,1 g/l aproximadamente, para la detección y/o la discriminación de la especie E. faecium que pertenece a los grupos de resistencia a los glicopéptidos VanA/VanB.
5. Medio de cultivo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicho medio de cultivo selectivo para enterococos es un medio selectivo para enterococos resistentes a los glicopéptidos que comprende por lo menos un antibiótico glicopeptídico.
6. Medio de cultivo según la reivindicación 5, caracterizado porque dicho antibiótico glicopeptídico se selecciona de entre la vancomicina, la teicoplanina, y sus combinaciones.
7. Medio de cultivo según la reivindicación 6, caracterizado porque la vancomicina se utiliza a una concentración comprendida entre 2 y 15 mg/l aproximadamente, preferentemente a una concentración comprendida entre 3 y 9 mg/l aproximadamente, más preferentemente a una concentración comprendida entre 4 y 8 mg/l aproximadamente, con un valor particularmente preferido de 6 mg/l aproximadamente.
8. Medio de cultivo según la reivindicación 6, caracterizado porque la teicoplanina se utiliza a una concentración comprendida entre 0,5 y 16 mg/l aproximadamente, preferentemente a una concentración comprendida entre 1 y 10 mg/l aproximadamente, más preferentemente a una concentración comprendida entre 2 y 8 mg/l aproximadamente, con un valor particularmente preferido de 5 mg/l aproximadamente.
9. Medio de cultivo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque dicho sustrato cromógeno libera, mediante hidrólisis, un cromóforo precipitable seleccionado de entre los derivados indoxilo, halógeno-indoxilo (bromo-indoxilo, cloro-indoxilo, fluoro-indoxilo, yodo-indoxilo, dicloro-indoxilo, cloro-bromo-indoxilo, tri-cloro-indoxilo), metil-indoxilo, o hidroxi-quinolina en particular los derivados siguientes: 6-cloro-indoxilo, 5-bromo-indoxilo, 3-bromo-indoxilo, 6-fluoro-indoxilo, 5-yodo-indoxilo, 4,6-dicloro-indoxilo, 6,7-dicloro-indoxilo, 5-bromo-4-cloro-indoxilo, 5-bromo-6-cloro-indoxilo, 4,6,7-tricloro-indoxilo, N-metil-indoxilo y 8-hidroxi-quino- lina.
10. Medio de cultivo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque dicho sustrato cromógeno de la α-glucosidasa es un 5-bromo-4-cloro-indoxil-α-glucósido.
11. Utilización de un medio de cultivo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la detección y/o la discriminación de los grupos de especies de enterococos resistentes a los glicopéptidos:
12. Procedimiento de detección y/o de discriminación, en una muestra, de los grupos de especies de enterococos resistentes a los glicopéptidos:
caracterizado porque comprende por lo menos las etapas siguientes:
Patentes similares o relacionadas:
Medio de detección y/o de identificación de bacterias, del 11 de Diciembre de 2019, de BIOMERIEUX: Medio de detección y de discriminación de bacterias Citrobacter entre otras enterobacterias, que comprende: • un sustrato de una actividad metabólica específica […]
Método para detectar condiciones bacteriolíticas en una muestra, del 17 de Abril de 2019, de UNIVERSITAT DE BARCELONA: Un método para detectar una condición bacteriolítica seleccionada del grupo que consiste en estrés físico, la presencia de bacteriófagos, la presencia […]
Medio de detección de microorganismos que comprende al menos un alquil(tio)glucósido, del 14 de Febrero de 2018, de BIOMERIEUX: Medio de detección de microorganismos, estando basada dicha detección en la identificación de una actividad enzimática microbiana seleccionada de actividades de esterasas […]
Procedimiento de detección de bacterias productoras de carbapenemasas de tipo OXA-48, del 10 de Enero de 2018, de BIOMERIEUX: Procedimiento de detección y/o de identificación específica de bacterias productoras de carbapenemasas de tipo OXA-48 en una muestra biológica, que comprende las etapas que consisten […]
Medio de cultivo, método para cultivar Salmonella y E. coli y método para detectar Salmonella y E. coli, del 1 de Marzo de 2017, de Foodchek Systems, Inc: Un medio de cultivo adecuado para su uso en la detección de Salmonella spp o Escherichia coli (E. coli) en una muestra de alimento o ambiental, comprendiendo dicho medio […]
Escherichia coli como marcador de hipertrigliceridemia, del 25 de Mayo de 2016, de NESTEC S.A.: Método para predecir si un sujeto se halla en riesgo de desarrollar hipertrigliceridemia, el cual comprende las etapas de: a) transformar […]
Uso de las proteínas GFP-Hadrurina, GFP-gp12 y GFP-Colicina-S4 para la detección de Escherichia coli y procedimiento de detección, del 29 de Abril de 2014, de HIPSITEC, S.A.: Uso de una mezcla de las proteínas GFP-Hadrurina, GFP-gp12 y GFP-Colicina-S4 (y procedimiento de obtención de dichas proteínas) para la detección de Escherichia coli en […]
Bolsa flexible para medio de cultivo que contiene un concentrado de nutrientes, del 30 de Mayo de 2012, de E.I. DU PONT DE NEMOURS AND COMPANY: Una bolsa que comprende (a) una primera lámina de película polímera; (b) una segunda lámina de película polímera; en donde dicha segunda lámina se superpone sobre […]