CARTUCHO PARA EL CONTROL DEL FUNCIONAMIENTO DE UN DISPOSITIVO PARA EL ANÁLISIS DE LA FUNCIÓN DE PLAQUETAS SANGUÍNEAS, MÉTODO PARA EL CONTROL DEL FUNCIONAMIENTO Y EMPLEO DE UN LÍQUIDO DE PRUEBA.

Cartucho para el control del funcionamiento de un dispositivo para el análisis de la función de plaquetas sanguíneas,

con una carcasa (1) que comprende una cámara de prueba (3) y una cámara de retención (5), caracterizado porque un elemento de separación (2; 25) cierra herméticamente al aire el volumen del líquido (7) de un líquido de prueba (4) y un cojín de aire (6) que se encuentra sobre dicho líquido en la cámara de retención (5), que se puede introducir una célula de medida (8) en la parte superior de la cámara de retención (3) y que un tubo capilar (9) conecta la célula de medida con el volumen del líquido (7)

La presente invención hace referencia a un cartucho para el control del funcionamiento de un 5 dispositivo para el análisis de la función de plaquetas sanguíneas, con una carcasa que comprende una cámara de prueba y una cámara de retención, y un método para el control del funcionamiento de un dispositivo de esta clase, así como el empleo de un líquido de prueba en el dispositivo.

En un dispositivo para el análisis automatizado de la función de plaquetas sanguíneas, se emplean cartuchos de prueba que contienen elementos de separación bioactivos porosos. Con el 10 dispositivo se efectúan análisis o pruebas del proceso coagulante de la sangre mediante la función de las plaquetas sanguíneas, donde algunos o todos los pasos de un análisis se desarrollan automáticamente.

La hemostasia o función hemostática comprende la combinación de dos sistemas bioquímicos que se controlan mediante diferentes factores de proteínas y componentes celulares, por 15 ejemplo, plaquetas sanguíneas. Los procesos mediante los cuales la sangre coagula contienen, de acuerdo con lo que se comprende actualmente, una cascada con múltiples etapas de activaciones de los factores de proteínas que culminan en la formación de fibrina. Se han desarrollado diferentes pruebas para probar las etapas individuales de dicha cascada y para poder determinar si la sangre de un paciente puede coagular correctamente, o si existe un trastorno de la coagulación con una 20 deficiencia en uno o varios de los factores necesarios para la coagulación de la sangre. Se sabe que el estado de las plaquetas sanguíneas o la función de las plaquetas sanguíneas otorgan una indicación a cerca de la capacidad de la sangre para coagular correctamente.

La prueba para el análisis de la función de plaquetas o de la hemostasia primaria en la sangre total humana, se conoce como prueba de tiempo de hemorragia. La prueba del tiempo de 25 hemorragia que se ha utilizado durante varias décadas, consiste en una incisión en el antebrazo del paciente. Para evitar una incisión, se ha desarrollado otra prueba que puede realizar el diagnóstico de plaquetas sanguíneas de manera esencialmente exacta.

Las patentes estadounidenses 4 604 804, 4 780 417 y 5 051 239 revelan un sistema de prueba que se puede utilizar para realizar una prueba in vitro con sangre, que se pueden correlacionar 30 exactamente y de forma reproducible con la prueba de tiempo de hemorragia in vivo descrita anteriormente. El dispositivo Thrombostat™ 4000 es un sistema de esta clase. La función de las plaquetas sanguíneas se evalúa en dicho sistema, en tanto que las muestras anticoagulantes de sangre completa se aspiran con una presión negativa permanente a través de una abertura pequeña que se encuentra en el centro de una pared de separación, que puede ser porosa o no porosa. En el 35 caso de sistemas en los que la pared de separación sea porosa, antes de comenzar con la prueba, ésta se humedece con un agente activador que activa la coagulación de las plaquetas sanguíneas. En la abertura se forma un tapón de trombocitos y se mide el tiempo necesario para la detención del flujo de sangre. Dicho tiempo se correlaciona entonces con la función de las plaquetas sanguíneas.

El dispositivo utilizado con el Thrombostat™ 4000 se conforma de tres partes separadas: una 40 cámara de prueba o reactiva, un tubo capilar y una cubeta de muestra. Una pared de separación porosa, que contiene colágeno, se encuentra en la cámara de prueba o reactiva. La cámara de prueba o reactiva se debe conservar en un envoltorio hermético, separado del tubo capilar y de la cubeta de muestra, para conservar la estabilidad del colágeno durante el tiempo de almacenamiento indicado. El tubo capilar y la cámara de prueba o reactiva deben ser unidos manualmente por la persona 45 operadora para comenzar con cada prueba a realizar. Además, la muestra a probar en la cubeta de muestra se debe pipetear e incubar, antes de que la cubeta de muestra se pueda unir con el tubo capilar y la cámara de prueba o reactiva. Además, el tiempo para la etapa de incubación es determinado manualmente por la persona operadora. La etapa de incubación separada requiere de una manipulación adicional después del periodo de incubación, cuando la persona operadora 50 introduce manualmente en la cubeta de muestra el tubo capilar y la cámara de prueba o reactiva unidos, y cuando inicia la secuencia de prueba. Al finalizar la prueba, el costoso tubo capilar se utiliza nuevamente y, por lo tanto, se debe limpiar tomando un tiempo considerable.

Para evitar dicha desventaja, se conoce de la patente EP 0 716 745 B1 un cartucho en el que el usuario ya no debe intervenir durante el ciclo de prueba. Dicho cartucho de prueba no requiere de 55 mecanismos complejos de manipulación de muestras, para este un envoltorio hermético exterior separado para la cámara de prueba o reactiva durante el transporte y el almacenamiento está de más, y se provee para un único uso. El cartucho de prueba es adecuado en general para sistemas de

prueba, en los que determinados componentes/reactivos se conservan separados o se combinan entre sí justo en el momento adecuado.

Los complejos procesos en la hemostasia primaria, conducen mediante adhesión y agregación de trombocitos a la formación de tapones. El tiempo, que se requiere bajo condiciones estandarizadas, se mide mediante dispositivos conocidos. El resultado de la medición del tiempo es el 5 llamado tiempo de obturación que se indica en segundos. Dicho tiempo es una medida para indicar la capacidad de hemostasia de plaquetas.

En el análisis se registran los componentes plasmáticos y celulares de la hemostasia primaria. Esto se produce mediante la simulación in vitro de las condiciones fisiológicas que conducen a la adhesión, a la activación y a la agregación de trombocitos. 10

En los dispositivos para el diagnóstico de la función de plaquetas, ante el paso de una muestra de sangre total tamponada con citrato de sodio, se simulan las relaciones que predominan en un vaso sanguíneo mediante una abertura de la membrana cubierta con colágeno (Col) y con otro activador como epinefrina (Epi) o adenosina-5'-difosfato (ADP). Las plaquetas reaccionan ante la presencia de los componentes plasmáticos, por ejemplo, del factor de von Willebrand bajo relaciones 15 de fuerzas cortantes y de presión que corresponden a un vaso sanguíneo pequeño dañado. Mediante la adhesión y agregación de trombocitos, se obtiene el cierre de la abertura de la membrana. El tiempo medido desde el comienzo de la medición hasta el cierre de la abertura de la membrana, es el ya mencionado tiempo de obturación. Los límites de decisión en los estudios clínicos surgen considerando los tiempos de obturación que se superponen de poblaciones normales y anormales, en 20 el sistema PFA- 100® mediante los siguientes márgenes de referencia:

Célula de medida del dispositivo

3,8 % de sangre citratada tamponada

Margen de referencia (s)

3,2 % de sangre citratada tamponada

Margen de referencia (s)

Colágeno / epinefrina

94 - 193

82 - 150

Colágeno / ADP

71 - 118

62 - 100

Con los dispositivos conocidos para el diagnóstico de la función de plaquetas, se dispone de una posibilidad de detección simple para los pacientes en riesgo con trastorno funcional congénito de los trombocitos. Las células de medida o bien, los cartuchos de prueba de dichos dispositivos permiten 25 la diferenciación entre una función de plaquetas normal o anormal (Col/Epi) y el reconocimiento de un trastorno inducido por ácido acetilsalicílico (Col/ADP). Mediante el diagnóstico de la función de plaquetas se puede diagnosticar una gran cantidad de pacientes con trastornos funcionales congénitos de los trombocitos, sin que resulte necesario otro diagnóstico especial como, por ejemplo, la agregometría. En la toma de ácido acetilsalicílico, se miden en suero concentraciones de 30 medicamentos que ascienden muy rápidamente y que disminuyen nuevamente. La consecuencia es un ascenso de los tiempos de obturación Col/Epi que permanecen prolongados durante días. Se han establecido individualmente en los pacientes prolongaciones de los tiempos de obturación de diferentes intensidades.

En las patentes EP- 0 716 744 B1 y 0 716 745 B1, así como en US-A-5602037 y 35 WO96/00899A, se describen en detalle dispositivos para el diagnóstico de plaquetas sanguíneas...

REIVINDICACIONEs

1. Cartucho para el control del funcionamiento de un dispositivo para el análisis de la función de plaquetas sanguíneas, con una carcasa (1) que comprende una cámara de prueba (3) y una cámara de retención (5), caracterizado porque un elemento de separación (2; 25) cierra herméticamente al aire el volumen del líquido (7) de un líquido de prueba (4) y un cojín de aire (6) que se encuentra sobre dicho líquido en la cámara de retención (5), que se puede introducir una célula de 5 medida (8) en la parte superior de la cámara de retención (3) y que un tubo capilar (9) conecta la célula de medida con el volumen del líquido (7).

2. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la cámara de retención (5) se puede cerrar herméticamente al aire mediante un cierre superior (19).

3. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la célula de 10 medida (8) se apoya sobre una base circunferencial (11) que se encuentra fijada en la pared interior de la cámara de prueba (3).

4. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la célula de medida (8) es cilíndrica y presenta un diámetro menor que el diámetro interior de la cámara de prueba (3). 15

5. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque un elemento de hermetización (15) entre la parte exterior de la célula de medida (8) y la pared interior de la cámara de prueba (3), cierra la cámara de prueba herméticamente al aire de la atmósfera exterior.

6. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque 20 a la célula de medida (8) se puede conectar herméticamente un dispositivo de aspiración (12) que produce una presión negativa en la célula de medida (8).

7. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado porque el dispositivo de aspiración (12) presenta una conexión de aspiración (13) que se encuentra provista de una junta tórica (14). 25

8. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado porque la junta tórica (14) se apoya herméticamente sobre un borde (16) de la célula de medida (8).

9. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el tubo capilar (9) sobresale hacia el interior con su extremo superior en la célula de medida (8) que atraviesa el elemento de separación (2) y que se sumerge con su extremo inferior en el líquido de 30 prueba (4) del volumen del líquido (7).

10. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la célula de medida (8) se encuentra cerrada toda a su alrededor excepto en una pequeña abertura (22) en su parte superior y el tubo capilar (9) conectado con la célula de medida (8).

11. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizado porque el tubo capilar (9) se 35 encuentra conectado integralmente con la parte inferior de la célula de medida (8), sin sobresalir hacia el interior de la célula de medida (8).

12. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque el líquido de prueba (4) contiene un compuesto de glicerina y agua.

13. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque la proporción de 40 glicerina y agua asciende a 30:70 a 40:60,

preferentemente 35:65 porcentaje en peso, con respecto al peso total del compuesto de glicerina y agua.

14. Cartucho de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque el líquido de prueba contiene agua, aceites, polietilenoglicol o compuestos de estos. 45

15. Cartucho de acuerdo con la reivindicación 12 ó 14, caracterizado porque el líquido de prueba (4) contiene sustancias tampón, sales, sustancias antimicrobianas, cadenas de ácido nucleico, cadenas de hidratos de carbono, proteínas.

16. Método para el control del funcionamiento de un dispositivo para el análisis de la función de plaquetas sanguíneas, que comprende los siguientes pasos: 50

a) Preparación de un volumen del líquido (7) de un líquido de prueba (4) en una cámara de retención (5);

b) Cierre hermético al aire del volumen del líquido (7) y de un cojín de aire (6) que se encuentra sobre dicho volumen, con un elemento de separación (2; 25);

c) Cierre hermético al aire de la cámara de prueba (3) mediante un elemento de hermetización (15) y 5 la introducción de una célula de medida (8) en la cámara de prueba;

d) Movimiento de un tubo capilar (9) conectado con una célula de medida (8) en el interior de la cámara de prueba (3) en dirección al elemento de separación (2; 25), y penetración del elemento de separación con el tubo capilar, de manera que éste último entre en contacto con el líquido de prueba o bien, se sumerja en el líquido de prueba; 10

e) Producción de una presión negativa suficiente en la célula de medida, de manera que el líquido de prueba circule a través del tubo capilar hacia la célula de medida;

f) Medición del tiempo que se requiere hasta que concluya el flujo del líquido de prueba hacia la célula de medida; y

g) Correlacionar el tiempo medido en el paso (f) con un valor de referencia predeterminado. 15

17. Método de acuerdo con la reivindicación 16, caracterizado porque la viscosidad del líquido de prueba se selecciona igual a la viscosidad de la sangre o del plasma sanguíneo en estado normal.

18. Método de acuerdo con la reivindicación 16, caracterizado porque la viscosidad del líquido de prueba se selecciona más elevada que la viscosidad de la sangre o del plasma sanguíneo 20 en estado normal, de manera que se prolongue el tiempo conforme al paso (f).

19. Método de acuerdo con la reivindicación 16, caracterizado porque la viscosidad del líquido de prueba se selecciona más reducida que la viscosidad de la sangre o del plasma sanguíneo en estado normal, de manera que se reduzca el tiempo conforme al paso (f).

20. Método de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 16 a 19, caracterizado 25 porque el volumen del líquido del líquido de prueba se reduce en contraste con el estado inicial, para prolongar el tiempo de acuerdo con el paso (f).

21. Método de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 16 a 20, caracterizado porque el tubo capilar se prolonga, para prolongar el tiempo de acuerdo con el paso (f).

22. Método de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 16 a 21, caracterizado 30 porque el diámetro interior del tubo capilar se reduce, para prolongar el tiempo de acuerdo con el paso (f).

23. Método de acuerdo con la reivindicación 16, caracterizado porque la viscosidad del líquido de prueba es comparable, más reducida o elevada que la viscosidad de la muestra por probar.

24. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 16 y 23, caracterizado porque en el 35 caso del líquido de prueba se trata de agua, glicerina, aceites, polietilenoglicol o de un compuesto de estos que, además, contiene preferentemente sustancias tampón, sales, sustancias antimicrobianas, cadenas de ácido nucleico, cadenas de hidratos de carbono, proteínas o compuestos de estos.

“Siguen 5 páginas de dibujos”