17 inventos, patentes y modelos de Smith,James Jefferson

(04/12/2019) Una meganucleasa recombinante que reconoce y escinde una secuencia de reconocimiento que comprende SEQ ID NO: 3, en donde dicha meganucleasa recombinante comprende una primera subunidad y una segunda subunidad, en donde dicha primera subunidad se une a un primer semi-sitio de reconocimiento de dicha secuencia de reconocimiento y comprende: (a) una secuencia de aminoácidos con al menos un 85% de identidad de secuencia con respecto a los restos 198- 344 de cualquiera de las SEQ ID NO: 8-18; y (b) una primera región hipervariable (HVR1) que consiste en los restos 215-270 de una cualquiera de las SEQ ID NO: 8-18; y en donde dicha segunda subunidad se une a un segundo semi-sitio de reconocimiento de dicha secuencia de reconocimiento y comprende: (i)…

(29/05/2019) Un procedimiento para la inserción de una secuencia exógena en un locus que se pueda amplificar de una célula de mamífero que comprende: (a) proporcionar una célula de mamífero que tiene un sitio diana endógeno proximal a un gen de selección endógeno en el locus que se puede amplificar, en el que el sitio diana endógeno está de 0 a 100.000 pares de bases corriente abajo de la región reguladora 3' del gen de selección endógeno o de 0 a 100.000 pares de bases corriente arriba de la región reguladora 5' del gen de selección endógeno, en el que el sitio diana endógeno comprende: (i) una secuencia de reconocimiento para una endonucleasa específica del sitio; (ii) una región flanqueante 5' en 5' de la secuencia de reconocimiento;…

(22/05/2019) Un procedimiento para la inserción de una secuencia exógena en un locus que se pueda amplificar de una célula de mamífero que comprende: (a) proporcionar una célula de mamífero que tiene un sitio diana endógeno proximal a un gen de selección endógeno en el locus que se puede amplificar, en el que el sitio diana endógeno está de 0 a 100.000 pares de bases corriente abajo de la región reguladora 3' del gen de selección endógeno o de 0 a 100.000 pares de bases corriente arriba de la región reguladora 5' del gen de selección endógeno, en el que el sitio diana endógeno comprende: (i) una secuencia de reconocimiento de una meganucleasa modificada (ii) una región flanqueante 5' en 5' de la secuencia de reconocimiento; y (iii) una región flanqueante 3' en 3' de la secuencia de reconocimiento; y (b) introducir una…

(10/04/2019) Una meganucleasa monocatenaria recombinante que comprende: (a) una primera subunidad LAGLIDADG que comprende una secuencia polipeptídica que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con los restos 9-151 de una meganucleasa I-CreI de tipo silvestre de SEQ ID NO: 1 y que tiene un primer semisitio de reconocimiento; y (b) una segunda subunidad LAGLIDADG que comprende una secuencia polipeptídica que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con los restos 9-151 de una meganucleasa I-CreI de tipo silvestre de SEQ ID NO: 1 y que tiene un segundo semisitio de reconocimiento; en la que dichas primera y segunda…

(26/03/2019) Un método ex vivo para escindir un ADN de doble cadena, que comprende: (a) identificar en dicho ADN al menos un sitio de reconocimiento para una meganucleasa derivada de I-Crel racionalmente diseñada con especificidad alterada en relación a I-Crel, en donde dicho sitio de reconocimiento no se escinde mediante una I-Crel de origen natural, en donde dicho sitio de reconocimiento se identifica basándose en la presencia de una secuencia central de cuatro pares de bases seleccionada entre el grupo que consiste en TCTT, TCGT, TCAT, GTTT, GTCT, GGAT, GAGT, GAAT, ATGT, TGAC, TAAC, GTTC, ATAT, TCGA, TTAA, GGGC, ACGC, CCGC, CTGC, ACAA, ATAA, AAGA, ACGA, ATGA, AAAC, AGAC, ATCC, ACTC, ATTC, ACAT, GAAA, GGAA, GTCA, GTTA, GAAC, GCCC, GCGT, GCGG, GCAG, TCTC, TCAC, TCGC, GTGT, GTAT, GTAG, GTCC, GTGC, GTAA,…

(22/03/2017) Un método para escindir una secuencia de reconocimiento de diana de ADN bicatenario en una célula eucariota que comprende: introducir en dicha célula eucariota un ácido nucleico que codifica una meganucleasa; o una proteína meganucleasa; en el que dicha meganucleasa escinde dicha secuencia de reconocimiento de diana de ADN bicatenario; y en el que dicha meganucleasa es una meganucleasa recombinante que comprende: un polipéptido que tiene al menos un 85 % de similitud de secuencia con los restos 2-153 de la meganucleasa I-CreI de SEQ ID NO: 1; y que tiene especificidad por un semisitio de secuencia…

(14/09/2016) Un método para producir una meganucleasa recombinante que tiene especificidad por un semisitio de secuencia de reconocimiento alterada que difiere en al menos un par de bases respecto de un semisitio dentro de una secuencia de reconocimiento de la meganucleasa I-Crel seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5, comprendiendo dicho método: A. diseñar una secuencia polipeptídica que tiene una similitud de al menos el 85 % con los restos 2-153 de la meganucleasa I-Crel de SEQ ID NO: 1, comprendiendo dicho diseño modificar la secuencia de los restos 2-153 de la meganucleasa I-Crel de SEQ ID NO: 1, en donde se ha alterado la especificidad en la posición -1: (a) a una T en una hebra codificante mediante una modificación seleccionada entre el…

(06/04/2016) Una meganucleasa monocatenaria recombinante que comprende: una primera subunidad LAGLIDADG que comprende una secuencia polipeptídica que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con los restos 9-151 de una meganucleasa I-CreI de tipo silvestre de SEQ ID NO: 1 y que tiene un primer semi-sitio de reconocimiento; una segunda subunidad LAGLIDADG que comprende una secuencia polipeptídica que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con los restos 9-151 de una meganucleasa I-CreI de tipo silvestre de SEQ ID NO: 1 y que tiene un segundo semi-sitio de reconocimiento; en la que dichas primera y segunda subunidades LAGLIDADG están unidas covalentemente mediante un engarce polipeptídico, en donde dicho engarce es un engarce flexible y comprende más de 25 y menos de 31 restos; …

(25/03/2015) Un monómero de meganucleasa recombinante que tiene afinidad alterada para la formación de dímeros con un monómero de meganucleasa de referencia, que comprende: un polipéptido que tiene al menos un 85 % de similitud de secuencia con los restos 2-153 del monómero de meganucleasa I-Crel de SEC ID Nº: 1; en el que la afinidad por la formación de monómeros se ha alterado mediante al menos una modificación correspondiente a una sustitución seleccionada del grupo que consiste en: (a) sustitución de K7, K57 o K96 por D o E; o (b) sustitución de E8 o E61 por K o R.

(24/12/2014) Un método para producir una célula eucariota genéticamente modificada que incluye una secuencia exógena insertada en un cromosoma de dicha célula eucariota, que comprende: transfectar una célula eucariota con uno o más ácidos nucleicos que incluyen (i) una primera secuencia de ácido nucleico que codifica una meganucleasa, y (ii) una segunda secuencia de ácido nucleico que incluye dicha secuencia exógena; en el que dicha meganucleasa produce un sitio de escisión en dicho cromosoma y dicha secuencia exógena se inserta en dicho cromosoma en dicho sitio de escisión; en el que dicha meganucleasa comprende un polipéptido que tiene al menos un 85 % de similitud de secuencia…

(10/10/2013) Una meganucleasa recombinante que comprende: un polipéptido que tiene al menos 85 % de similitud de secuencia con los restos 2-153 de la meganucleasa I-CreI de SEC ID Nº 1; y que tiene especificidad por un semisitio de secuencia de reconocimiento que difiere en al menos un par de bases de un semisitio dentro de una secuencia de reconocimiento de meganucleasa I-CreI seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº: 2, SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4 y SEC ID Nº: 5; en la que: la especificidad en la posición -1 se ha alterado: (a) a una T en una cadena con sentido por una modificación seleccionada del grupo que consiste en H139, Q46 y H46; (b) a una A en una cadena con sentido por una modificación seleccionada del grupo que consiste en Y139, C46 y A46; (c) a una G en una cadena con sentido por una modificación…

(02/10/2013) Un procedimiento de escisión de un secuencia de reconocimiento diana de ADN bicatenario en una célulaeucariota que comprende: introducir en dicha célula eucariota un ácido nucleico que codifica una meganucleasa o una proteína meganucleasa, en el que dicha meganucleasa escinde dicha secuencia de reconocimiento diana de ADN bicatenario, y en el que dicha meganucleasa es una meganucleasa recombinante que comprende: un polipéptido que tiene al menos el 85% de similitud de secuencias con los residuos 2-153 de lameganucleasa I-CreI de SEC ID Nº: 1, y que tiene especificidad por un medio sitio de la secuencia 15 de reconocimiento que se diferencia al menos unpar de bases de un medio sitio dentro de una secuencia de reconocimiento de la meganucleasa I-CreIseleccionada del grupo…

(10/09/2013) Una meganucleasa monocatenaria recombinante que comprende: una primera subunidad LAGLIDADG que comprende una secuencia polipeptídica que tiene al menos un 85% de identidad de secuencia con los restos 9-151 de una meganucleasa I-CreI de tipo salvaje de SEC IDNº: 1 y que tiene un primer semisitio de reconocimiento; una segunda subunidad LAGLIDADG que comprende un polipéptido que tiene al menos un 85 % deidentidad de secuencia con los restos 9-151 de una meganucleasa I-CreI de tipo salvaje de SEC ID Nº: 1 yque tiene un segundo semisitio de reconocimiento; en la que dichas primera y segunda subunidades LAGLIDADG están unidas covalentemente con unengarce que consiste en cualquiera de las SEC…

(14/03/2012) Un monómero de meganucleasa recombinante que comprende: un polipéptido que tiene 85 % de similitud de secuencia con los restos 2-153 de la meganucleasa I-CreI deSEC ID Nº 1; en el que la afinidad para formación de dímeros se ha alterado por al menos una modificación correspondientea una sustitución seleccionada del grupo que consiste en: (a) sustitución de K7, K57 o K96 con D o E; o (b) sustitución de E8 o E61 con K o R.