Purificación de oligonucleótidos trifosforilados empleando marcadores de captura.
Un método para preparar un oligonucleótido de fórmula (I),**Fórmula**
en donde V1,
V3 y V5 se seleccionan independientemente en cada caso entre O, S y Se; V2, V4 y V6 se seleccionan independientemente en cada caso entre OH, OR1, SH, SR1, F, NH2, NHR1, N(R1)2 y BH3 - M+, W1 es O o S,
W2 es O, S, NH o NR2,
W3 es O, S, NH, NR2, CH2, CHHal o C(Hal)2,
R1, R2, y R3 se seleccionan entre alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, acilo de C2-6 o un grupo cíclico, cada uno opcionalmente sustituido,
o en donde dos R1 pueden formar un anillo junto con un átomo de N unido al mismo,
M+es un catión,
X es NH, NR3, O o S,
Z representa un marcador de captura, el cual es un resto alquilo de C8-24, una entidad perfluoroalquilo, una azida o un grupo alquinilo,
Y representa una unión o un enlace que conecta el marcador de captura a X, y
ON representa un oligonucleótido que comprende al menos 4 nucleótidos o componentes análogos de nucleótidos, que comprende las etapas:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IIa)**Fórmula**
en donde V1, V3, V5, V4, V6, W1, W2, W3, y ON son como se definió anteriormente, con un agente oxidante para obtener un compuesto de fórmula (IIb)**Fórmula**
en donde V1, V3, V5, V2, V4, V6, W1, W2, W3, y ON son como se definió anteriormente,
(b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (IIb) con un agente marcador de captura de fórmula (III),
Z - Y - XH (III)
en donde X, Z e Y son como se describió anteriormente, para obtener un producto de reacción que comprende el oligonucleótido de fórmula (I), y
(c) poner en contacto el producto de reacción de la etapa (b) con un reactivo de captura capaz de interaccionar con el marcador de captura, en donde el reactivo de captura se selecciona del grupo que consiste en una fase sólida de una cromatografía de fase inversa estándar, tal como RP-HPLC, un material cromatográfico con afinidad por grupos hidrofóbicos, un material cromatográfico con afinidad por grupos fluorados, tal como un soporte de afinidad por flúor, un reactivo de captura que contiene un resto alquinilo, y un reactivo de captura que contiene un resto azido, en donde el contacto tiene lugar bajo condiciones que permiten la separación del oligonucleótido (I) de las otras especies contenidas en dicho producto de reacción.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2012/055520.
Solicitante: RHEINISCHE FRIEDRICH-WILHELMS-UNIVERSITAT BONN.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: REGINA-PACIS-WEG 3 53113 BONN ALEMANIA.
Inventor/es: SPROAT, BRIAN, DR., LUDWIG,JANOS, GOLDECK,MARION.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07H1/04 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › C07H 1/00 Procesos para la preparación de derivados de azúcar. › Introducción de radicales de ácido polifosfórico.
- C07H21/00 C07H […] › Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos.
- C07H21/02 C07H […] › C07H 21/00 Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos. › con ribosilo como radical sacárido.
PDF original: ES-2623002_T3.pdf
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