Terapia de inmunización basada en péptidos para el tratamiento de aterosclerosis que fija ApoB como objetivo.

El péptido KTTKQSFDLSVKAQYKKNKH (SEQ ID Nº: 14), un epítopo contenido en el péptido,

una forma oxidada del mismo o un derivado de aldehído o malon-dialdehído del mismo.

Terapia de inmunización basada en péptidos para el tratamiento de aterosclerosis que fija ApoB como objetivo Campo técnico

La presente invención se refiere a un nuevo péptido, en particular un péptido a utilizar para la terapia de inmunización para el tratamiento de la aterosclerosis, y para el desarrollo de ELISA basado en péptidos para la determinación de la respuesta inmune frente a lipoproteínas de baja densidad oxidadas y al diagnóstico de la presencia o ausencia de aterosclerosis.

En particular la invención incluye:

1) El uso del péptido KTTKQSFDLSVKAQYKKNKH (SEQ ID N°: 14) nativo o modificado con MDA, preferiblemente junto con un soporte y adyuvante adecuados como una inmunoterapia o vacuna "anti- aterosclerosis" para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares isquémicas.

2) El uso del mismo péptido en ELISA para la detección de anticuerpos relacionados con el riesgo incrementado o disminuido del riesgo de desarrollo de enfermedades cardiovasculares isquémicas.

Antecedentes

La aterosclerosis es una enfermedad crónica que provoca un engrasamiento de la capa más interna (la íntima) de las arterias grandes y de tamaño medio. Disminuye el flujo sanguíneo y puede provocar isquemia y destrucción de los tejidos en los órganos suministrados por el vaso afectado. La aterosclerosis es la causa principal de las enfermedades cardiovasculares incluyendo infarto de miocardio, accidente cerebrovascular y enfermedad arterial periférica. Es la principal causa de muerte en el mundo occidental y se predice que se convertirá en la principal causa de muerte en todo el mundo dentro de dos décadas.

La enfermedad se inicia por la acumulación de lipoproteínas, principalmente lipoproteínas de baja densidad (LDL), en la matriz extracelular del vaso. Estas partículas de LDL se agregan y sufren una modificación oxidativa. La LDL oxidada es tóxica y causa una lesión vascular. La aterosclerosis representa en muchos aspectos una respuesta a esta lesión incluyendo inflamación y fibrosis.

En 1989 Palinski y colaboradores identificaron auto-anticuerpos circulantes contra la LDL oxidada en los seres humanos. Esta observación sugirió que la aterosclerosis puede ser una enfermedad autoinmune provocada por reacciones inmunes contra lipoproteínas oxidadas. En este momento, varios laboratorios empezaron a buscar asociaciones entre los títulos de anticuerpos contra la LDL oxidada y la enfermedad cardiovascular. Sin embargo, la imagen que surge de estos estudios no era nada clara. Existían anticuerpos contra un gran número de diferentes epítopos en la LDL oxidada, pero la estructura de estos epítopos era desconocida. La expresión "anticuerpos contra LDL oxidada", por lo tanto, se refiere a una mezcla desconocida de diferentes anticuerpos en lugar de un anticuerpo específico. Anticuerpos IgM independientes de células T eran más frecuentes que los anticuerpos IgG dependientes de células T.

Los anticuerpos contra la LDL oxidada estaban presentes tanto en pacientes con enfermedad cardiovascular como en los controles sanos. Aunque algunos de los primeros estudios informaron sobre asociaciones entre los títulos de anticuerpos contra LDL oxidada y las enfermedades cardiovasculares, otros fueron incapaces de encontrar este tipo de asociaciones. Una debilidad principal de estos estudios era que los ensayos ELISA utilizados para determinar los títulos de anticuerpos utilizaban partículas de LDL oxidadas como ligando. La composición de LDL es diferente en diferentes individuos, el grado de modificación oxidativa es difícil tanto de controlar como de evaluar y no se pueden determinar los niveles de anticuerpos contra los diferentes epítopos en las partículas de LDL oxidadas. Hasta cierto punto, debido a los problemas técnicos, ha sido difícil evaluar el papel de las respuestas de anticuerpos contra la LDL oxidada utilizando las técnicas disponibles hasta ahora, pero, sin embargo, no es posible crear componentes bien definidos y reproducibles de una vacuna si se deben utilizar partículas de LDL oxidadas intactas.

Otra forma de investigar la posibilidad de que las reacciones autoinmunes contra la LDL oxidada en la pared vascular desempeñan un papel clave en el desarrollo de la aterosclerosis es inmunizar animales contra su propia LDL oxidada. La idea detrás de este enfoque es que si las reacciones autoinmunes contra la LDL oxidada son reforzadas utilizando técnicas de inmunización clásicas, esto daría lugar a una mayor inflamación vascular y progresiva de la aterosclerosis. Para probar esta hipótesis se inmunizaron conejos con LDL oxidada homologa y luego se les indujo aterosclerosis alimentando a los animales con una dieta alta en colesterol durante 3 meses.

Sin embargo, en contraposición con la hipótesis original de que la inmunización con LDL oxidada tenía un efecto protector reduciendo la aterosclerosis en aproximadamente un 50%. Resultados similares también se obtuvieron en un estudio posterior en el que la dieta alta en colesterol se combinó con una lesión del globo vascular para producir un desarrollo de la placa más agresivo. Paralelamente a los estudios realizados por los autores de la invención, varios otros laboratorios informaron de observaciones similares. Tomados en conjunto, los datos disponibles

demuestran claramente que existen reacciones inmunitarias que protegen contra el desarrollo de la aterosclerosis y que éstas Implican autolnmunidad contra LDL oxidada.

Estas observaciones también sugieren la posibilidad de desarrollar una terapia inmune o "vacuna" para el tratamiento de la enfermedad cardiovascular basada en la aterosclerosis en el hombre. Un enfoque para hacer esto sería Inmunizar un Individuo con su propia LDL después de haber sido oxidada por exposición a, por ejemplo, cobre. Sin embargo, este enfoque se complica por el hecho de que no se sabe qué estructura en la LDL oxidada es la responsable de Inducir la inmunidad protectora y si la LDL oxidada también puede contener epitopos que pueden dar lugar a reacciones Inmunes adversas.

La identificación de epitopos en la LDL oxidada es importante para varios aspectos:

En primer lugar, es probable que uno o varios de estos epitopos sean los responsables de activar la respuesta inmune antl-aterogénlca observada en animales inmunizados con LDL oxidada. Por lo tanto, péptidos que contienen estos epitopos pueden representar una posibilidad para el desarrollo de una terapia inmune o "vacuna contra la aterosclerosis" en el hombre. Además, pueden utilizarse para el tratamiento terapéutico de la aterosclerosis desarrollada en el hombre.

En segundo lugar, los péptidos que contienen los epitopos Identificados pueden utilizarse para desarrollar ELISAs capaces de detectar anticuerpos contra la estructura específica en las LDL oxidadas. Tales ensayos ELISAs serian más precisos y fiables que los actualmente disponibles utilizando partículas de LDL oxidadas como antigeno. También permitirían los análisis de respuestas inmunes frente a diferentes epitopos en las LDL oxidadas asociadas con la enfermedad cardiovascular.

La patente de EE.UU. 5.972.890 se refiere a un uso de péptidos para el diagnóstico de la aterosclerosis. La técnica presentada en dicha patente de EE UU, es como un principio de una forma de diagnóstico radiofisico. Una secuencia peptídica se marca radiactivamente y se Inyecta en el torrente sanguíneo. Si esta secuencia de péptidos debiera ser Idéntica a las secuencias presentes en la apollpoproteína B, se unirá al tejido en donde existen receptores presentes para la apolipoproteína B. En los vasos esto es, sobre todo, la placa aterosclerótica. La concentración de radiactividad en la pared del vaso se puede determinar, p. ej., por medio de una cámara gamma. La técnica es, pues, un método de diagnóstico radiofisico basado en que las secuencias de péptidos marcados radiactivamente se unirán a sus receptores de tejido normales presentes en la placa aterosclerótica y se detectan utilizando un análisis de radiactividad externa. Es un método de análisis directo para identificar la placa aterosclerótica. Se requiere que al paciente se le administren compuestos radiactivos.

La técnica de la presente invención se basa en principios y métodos bastante diferentes. De acuerdo con la reivindicación 1, la Invención se refiere al fragmento KTTKQSFDLSVKAQYKKNKH (SEQ ID N°: 14) de la apolipoproteína B para la inmunización contra la enfermedad cardiovascular. Reacciones inmunológicas de este tipo han demostrado, a su vez, estar incrementadas en individuos que tienen una aterosclerosis desarrollada. La presente técnica se basa en la unión de secuencias de péptidos en el fondo de los pocilios de polimero. Cuando se añade una muestra... [Seguir leyendo]

1. El péptido KTTKQSFDLSVKAQYKKNKH (SEQ ID N°: 14), un epftopo contenido en el péptido, una forma oxidada

del mismo o un derivado de aldehido o malon-dialdehído del mismo.

2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido está en forma nativa.

3. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido es un hapteno del derivado de aldehido.

4. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido está en una forma oxidada, incluida una forma

oxidada en donde el péptido ha sido oxidado utilizando cobre.

5. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, en forma de un derivado de malon-dialdehído (MDA) del mismo, o en forma de un derivado hidroxinonenal del mismo.

6. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el péptido es una combinación con liposomas de fosfolípidos.

7. Un anticuerpo purificado o producido de forma recombinante contra el péptido nativo y/o modificado con MDA de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o el anticuerpo purificado o producido de forma recombinante de acuerdo con la reivindicación 7, para uso en medicina.

9. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para uso en diagnosticar la presencia o ausencia de anticuerpos relacionados con un riesgo incrementado o disminuido de desarrollar la aterosclerosis o una enfermedad cardiovascular isquémica seleccionada de enfermedad del corazón coronaria, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular y/o enfermedad arterial periférica.

10. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

11. El péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10, para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la aterosclerosis o enfermedades cardiovasculares isquémicas en un mamífero, incluido un ser humano, en donde la enfermedad cardiovascular isquémica es una enfermedad del corazón coronaria, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular y/o enfermedad arterial periférica.

12. La composición farmacéutica de acuerdo con las reivindicaciones 10 u 11, en donde la composición está en una forma inyectable.

13. Una vacuna para uso en la inmunización de un mamífero, incluidos seres humanos, contra la aterosclerosis, comprendiendo la vacuna el péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

14. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 13, en donde una dosis de inmunización es de 1 a 100 mg del péptido.

15. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 o la vacuna de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende, además, uno o más adyuvantes.