Separación y formulación de fracción bioactiva y trabajo de subfracción de orina de camello como agente anticáncer.

Una fracción de orina de camello (PMF) obtenible de acuerdo con un método que comprende las etapas de:

- liofilización de la orina de camello líquido (PM701) obtenida a partir de camellos árabes de una sola joroba adultos Camelus dromedarius en presencia de celulosa microcristalina; y

- fraccionamiento de la PM701 liofilizada por sonificación con metanol con el fin de aislar la fracción bioactiva PMF que es soluble en metanol; y

Separación y formulación de fracción bioactiva y trabajo de subfracción de orina de camello como agente anticáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

1. CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un uso absolutamente novedoso de la orina de camello con fines medicinales y también se refiere a la preparación de la misma por liofilización como un medicamento llamado PM701 o fraccionar el mismo en fracciones activas que se codifican como PMF y PMFK. Más específicamente, la presente invención se refiere a aislar la fracción bioactiva PMF y la subfracción PMFK más eficaz a partir de PM701 liofilizado del camello árabe de una sola joroba adulto, especie Camelus dromedarius y el uso absolutamente nuevo de estas fracciones bioactivas como un agente selectivo anticáncer. El fraccionamiento estará implicado en la reducción de la dosis de la orina liofilizada completa y en el incremento de su eficacia. La invención se refiere también a la preparación de una nueva composición farmacéutica (cápsulas, jarabe, pomada y gel.... etc.) que comprende una cantidad eficaz de la fracción bio-activa PMF o de la subfracción bioactiva en una composición de 435 mg por cada cápsula o una cucharadita con un intervalo de 7 o 5 cápsulas o cucharadita / día respectivamente, que están dirigidas a los tejidos cancerosos humanos a través de sus actividades anti-proliferativas y apoptóticas sin dañar a los otros tejidos normales.

2. DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA RELACIONADA

Los cánceres son proliferaciones celulares no controladas como resultado de la acumulación de cambios genéticos en las células dotadas de potencial p rol iterativo. Después de un período de latencia variable durante el cual son clínicamente silentes, las células malignas progresan a estadios invasivos y metastásicos agresivos con la formación de tumores y la difusión muy extendida por todo el cuerpo.

A pesar de los importantes avances en el tratamiento, el cáncer todavía representa el 28% de las muertes en los países occidentales, y un porcentaje superior en otros países. El tratamiento del cáncer se ha basado principalmente en la cirugía, la quimioterapia, la radioterapia y, más recientemente, la inmunoterapia. Sin embargo, para los tipos más frecuentes de cáncer (pulmón, mama, colorrectales y leucemias) no se ha logrado la remisión y curación completas. Por lo tanto, el desarrollo de nuevos enfoques para el tratamiento de pacientes con cáncer es altamente deseable y críticamente necesario especialmente para aquellos pacientes cuya enfermedad ha progresado a una etapa metastásica y son refractarios a la quimioterapia estándar.

La organización mundial de la salud publicó que el cáncer es la principal causa de muerte en el mundo. De un total de 58 millones de muertes en todo el mundo en el año 2005, el cáncer representó 7,6 millones (o un 13%) del total de muertes, en 2005 el cáncer mató aproximadamente a 12,000 personas en Arabia Saudita, tal como se muestra en la FIG. 1, en que 8,000 de esas personas eran menores de 70 años.

En la Medicina del Profeta Mohamed (la paz sea con él), se sugiere beber la orina de camello para mejorar algunos de los síntomas asociados principalmente con la formación de tumores en el cuerpo. Por lo tanto, la orina de camello se ha venido utilizando en el mundo islámico y árabe, vendida y distribuida en botellas de diferentes tamaños. Pero nunca se ha demostrado científicamente. El solicitante considera que merece la pena observar este tema científicamente y definir su valor a través de ensayos in vitro e in vivo. El solicitante ha desarrollado una curiosidad al respecto y formuló una serie de preguntas: Qué posible importancia puede tener la orina de camello? El componente de la orina de camello está teniendo alguna actividad en la formación del tumor en sí o en algunas de sus partes? La orina fresca tiene efectos sobre los tejidos cancerosos humanos? Se podría formular esta orina en una forma conveniente para uso humano? La formulación de la orina aumenta su actividad o la reduce? La orina de camello contiene microorganismos? Es seguro utilizarla como un medicamento o tiene efectos toxicológicos sobre diversos órganos humanos?

Además, se podría fraccionar la orina de camello liofilizada con el fin de separar las fracciones bioactivas? Con qué parte de la célula reacciona la orina de camello? Cuáles son las evidencias bioquímicas, biofísicas y biológicas para su eficacia?

La orina de camello puede ser considerada como una sustancia / secreción de origen animal eficaz con la capacidad de mejora de algunos de los síntomas asociados principalmente con la formación de tumores en el cuerpo, pero necesita una fundamentación a través de la experimentación científica. Por lo tanto, el solicitante considera que merece la pena adoptar una mirada científica sobre este tema y definir sus valores a través de ensayos in vitro e in vivo. En primera instancia el solicitante sondeó si contenía agente anti-cáncer dado que dicha propiedad la convertiría en una sustancia natural de gran utilidad. En la técnica relacionada, el uso de 'piperina' como un potenciador de la biodisponibilidad ha sido descrito en las Patentes n° US 5,616,593 y 5,972,382. También se utiliza orina de vaca destilada o una fracción seca

para mejorar la actividad y la biodisponibilidad de fármacos antibióticos, tal como se describe más adelante en la patente n° US 6,896,907.

La patente NZ522665-A (30.04.2004) describe un agente-ll de diferenciación celular (CDA-II) purificado a partir de orina humana fresca, que resulta efectivo para la terapia y la prevención del cáncer.

M.M. Al-Harbi et al., Journal of Ethnopharmacology 52 (1996) 129-137, describe el efecto citotóxico de la orina de camello en las células de médula ósea de ratón que es comparable al del fármaco estándar ciclofosfamida. Sin embargo, la orina de camello es no clastogénica, probablemente debido a la presencia de compuestos antloxldantes y antlmutagénlcos.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Algunas de las preguntas anteriores han sido resueltas y tratadas en el presente documento. Para responder a la primera serie de preguntas el solicitante recogió la orina de camello (PM701) en pastos naturales en diversas áreas dentro de las Provincias de Jedda, Makah, Medina y Riad (Arabia Saudita) en botellas de diferentes tamaños, en cualquier momento del día. La orina fue probada en medios CLED y agar de sangre en condiciones estériles y no proporcionó indicaciones de ningún crecimiento de microorganismos. Se utilizaron cultivos de tejidos de cáncer de tejidos humanos y tejidos normales en el estudio del efecto de la PM701 (orina de camello) sobre el comportamiento de las células cancerosas y las células normales. La PM701 parece actuar sobre las células cancerosas y tener eficacia anti- proliferativa y apoptótica sobre éllas.

Sorprendentemente, la misma PM701 exhibió efectos nutritivos sobre las células sanas normales; esto implica que la PM701 tiene un efecto de destruir selectivamente las células cancerosas y un efecto reparador sobre las células que se dividen normalmente, y estos resultados conducen a esta Invención. La novedad de la invención radica en el hecho revelado a través de una experimentación precisa que la acción del PM701 y su eficacia son alcanzables sólo en el intervalo de concentración que es, literalmente, en niveles de nano a micro gramos. Esa debería ser la razón para la detección de dicho valioso potencial de la PM701 dirigido a las células cancerosas. La utilización de PM701 fresca continúa siendo no aceptable y no conveniente para el uso humano, por lo tanto, el solicitante también llofillzó aún más la PM701 líquida para obtener 0,2 g / mi de polvo. Re-examinamos la PM701 llofillzada sobre las células normales y las diversas células cancerosas en modelos tanto de cultivos celulares como animales, que mostraron la misma eficacia contra el cáncer y que fue mediada porapoptosis según lo determinado por un examen de ensayo de MTT y microscopía electrónica.

El solicitante pensó en la utilización de la PM701 como un fármaco alternativo para la terapia del cáncer, ya que mostró un efecto objetivo sobre las células cancerosas y ningún efecto secundarlo sobre los tejidos normales, pero la cantidad de dosificación liofilizada de PM701 por día era una carga sobre el cuerpo (46 cápsulas / día), y en última Instancia llevó a utilizar una de las formas, que ha resultado factible para reducir drásticamente la dosis diaria de este agente anti-cáncer PM701 y aumentar también la eficiencia de la actividad de dosificación, a la vez que tiene también una importancia comercial. Por lo tanto se utilizó el enfoque de fraccionamiento... [Seguir leyendo]

1. Una fracción de orina de camello (PMF) obtenible de acuerdo con un método que comprende las etapas de:

- Iloflllzación de la orina de camello líquido (PM701) obtenida a partir de camellos árabes de una sola joroba adultos Camelus dromedarius en presencia de celulosa mlcrocristalina; y

- fraccionamiento de la PM701 liofilizada por sonificación con metanol con el fin de aislar la fracción bioactiva PMF que es soluble en metanol; y

2. Una subfracción de orina de camello (PMFK) que se puede obtener de acuerdo con un método que comprende las etapas de:

- liofilización de la orina de camello líquido (PM701) obtenida a partir de camellos árabes de una sola joroba adultos Camelus dromedarius en presencia de celulosa mlcrocristalina;

- fraccionamiento de la PM701 liofilizada por sonificación con metanol con el fin de aislar la fracción bioactiva más eficaz (PMF) que es soluble en metanol; y

- someter el PMF aislado a subfraccionamlento cromatográfico en sistemas de disolventes cada 250 mi que consisten esencialmente en cloroformo y metanol para obtener siete subfracciones, con una subfracción más eficaz que se denomina PMFK.

3. La PMF o PMFK de la reivindicación 1 o 2, en el que la PM701 se obtiene en forma de polvo por la liofilización de PM701 líquida en el intervalo de 20 g por cada 100 mi de PM701 fresca líquida.

4. La PMF o PMFK de la reivindicación 1 o 2, en el que la PM701 seca de la orina de camello liofilizada se puede obtener por destilación o mediante el secador de pulverización.

5. La PMF de la reivindicación 1 y la PMFK de la reivindicación 2, en el que la PMF y la PMFK seca obtenida a partir de la orina de camello liofilizada está desprovista del olor de la orina de camello.

6. PMF de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de cáncer.

7. PMFK de acuerdo con la reivindicación 2 para su uso en el tratamiento de cáncer.

8. La PMF para su utilización de acuerdo con la reivindicación 6, en que los efectos de concentración sobre la viabilidad celular y la proliferación de las células cancerosas es en concentraciones en el intervalo entre 80 pg/ml y 800 pg/ml.

9. La PMFK para su utilización de acuerdo con la reivindicación 7, en que los efectos de concentración sobre la viabilidad celular y la proliferación de las células cancerosas es en concentraciones en el intervalo entre 0.2 pg/ml y 2 pg/ml.

10. La PMF para su utilización de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende una cantidad eficaz de la PMF en la cantidad de 435 mg / cápsula con 7 cápsulas / día.

11. La PMFK para su utilización de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende una cantidad eficaz de la composición en la cantidad de 435 mg / cápsula con 5 cápsulas / día.

12. Composición farmacéutica que comprende al menos un agente contra el cáncer, y PMF o PMFK de acuerdo con la reivindicación 1 o 2.

13. La composición de la reivindicación 12, que comprende una cantidad eficaz de la composición en formulaciones seleccionadas entre cápsulas, jarabe, Inyección, pomada, gel y champú.

14. La composición de las reivindicaciones 12 y 13, en que la composición presenta un efecto anti-cáncer selectivo objetivo en la causa de actividades apoptóticas in vitro.

15. La composición de la reivindicación 14, en el que los tipos de cáncer se seleccionan a partir de células de cáncer de pulmón humano (A549), células de leucemia de ratón (L1210), células de cáncer de colon humano (HCT116), células de cáncer de glioma humano (U251), células de cáncer de mama humano (MCF7) y células de cáncer de hígado humano (HepG2).