Reactivos y métodos para el tratamiento y la prevención del cáncer.

Un método para preparar un agente anticanceroso que comprende

(a) exponer ex vivo una porción de células obtenidas a partir de una línea celular de cáncer o una porción de células tumorales obtenidas de un paciente a un agente seleccionado entre tapsigargina y

tapsigargicina,

con el fin de crear células tumorales tratadas;

(b) lisar dichas células tumorales tratadas para crear fragmentos de células, en donde dichos fragmentos son adecuados para generar un efecto terapéutico contra el cáncer.

Reactivos y métodos para el tratamiento y la prevención del cáncer Campo de la invención

La invención se refiere en general al tratamiento de cáncer, y, más concretamente, al tratamiento de tumores, incluyendo tumores sólidos y sus metástasis, sin radiación o agentes quimioterapéuticos convencionales. En una realización preferida, la invención se refiere a la prevención y el tratamiento del cáncer mediante el uso de una vacuna contra el cáncer.

Antecedentes

La terapia moderna del cáncer implica en gran medida el uso de radiación, cirugía y agentes quimioterapéuticos. Sin embargo, los resultados de estas medidas, si bien son beneficiosas en algunos tumores, han tenido sólo efectos marginales o nulos en muchos otros. Además, estos enfoques a menudo tienen una toxicidad inaceptable.

Tanto la radiación como la cirugía adolecen del mismo inconveniente teórico. Se ha reconocido que, dado que una única célula maligna clonogénica puede dar lugar a la progenie suficiente para matar al anfitrión, toda la población de células neoplásicas debe ser erradicada. Véase, en general, Goodman y Gilman The Pharmacological Basis of Therapeutics (Pergamon Press, 8a Edición) (págs. 1202-1204). Este concepto de "destruir todas las células" implica que la escisión total de un tumor es necesaria para un enfoque quirúrgico, y que se necesita la destrucción completa de todas las células cancerosas en un enfoque de radiación, si se quiere lograr una cura. En la práctica esto raramente es posible; de hecho, donde hay metástasis, es imposible.

Por otra parte, los tratamientos quimioterapéuticos tradicionales del cáncer también rara vez dan como resultado una remisión completa del tumor, y los niveles de dosificación significativos requeridos para generar incluso una respuesta moderada suelen ir acompañados de una toxicidad inaceptable. Los agentes contra el cáncer normalmente tienen efectos hematológicos negativos (p. ej., el cese de la mitosis y la desintegración de elementos formados en la médula y los tejidos linfoides), y acción inmunosupresora (p. ej., recuentos reducidos de células), así como un impacto severo sobre los tejidos epiteliales (p. ej., la mucosa intestinal), los tejidos reproductivos (p. ej., deterioro de la espermatogénesis) y el sistema nervioso. P. Calabresi y B.A. Chabner, En: Goodman y Gilman The Pharmacological Basis of Therapeutics (Pergamon Press, 8a Edición) (págs.1209-1216). Los altos niveles de dosificación, y la toxicidad resultante, son en gran parte necesarios por la falta de especificidad hacia la diana de los propios agentes anticancerígenos. Es necesario que el fármaco distinga entre las células del anfitrión que son cancerosas y las células del anfitrión que no son cancerosas. La gran mayoría de los fármacos contra el cáncer no discriminan a este nivel, y tienen una toxicidad inherente significativa.

El éxito con los agentes quimioterapéuticos convencionales como agentes anticáncer también se ha visto obstaculizado por el fenómeno de resistencia a múltiples fármacos, la resistencia a una amplia gama de compuestos anticancerígenos citotóxicos no relacionados estructuralmente. J. H. Gerlach et al, Cáncer Surveys., 5: 25-46 (1986). La causa subyacente de la resistencia a fármacos progresiva puede ser debida a una pequeña población de células resistentes a los fármacos dentro del tumor (p. ej., células mutantes) en el momento del diagnóstico. J. H. Goldie y Andrew J. Coldman, Cáncer Research, 44: 3643-3653 (1984). El tratamiento de un tumor de este tipo con un único fármaco da como resultado primero una remisión, en la que el tumor se reduce de tamaño como resultado de la destrucción de las células sensibles a fármacos predominantes. Con las células sensibles a fármacos ausentes, las células resistentes a los fármacos restantes siguen multiplicándose y, finalmente, dominan la población de células del tumor.

El tratamiento al principio con una combinación de fármacos fue propuesto como una solución, dada la pequeña probabilidad de que dos o más resistencias a fármacos diferentes surgieran espontáneamente en la misma célula. V. T. DeVita, Jr., Cáncer, 51: 1209-1220 (1983). Sin embargo, ahora se sabe que la resistencia a fármacos se debe a una proteína de transporte de membrana, la "glicoproteína P", que puede conferir resistencia a fármacos en general. M.M. Gottesman e I. Pastan, Trends in Pharmacological Science, 9: 54-58 (1988). Fenotípicamente, las células tumorales muestran, con el tiempo, una acumulación celular reducida de todos los fármacos. En resumen, la quimioterapia combinada no parece ser la respuesta.

Se ha propuesto la inmunoterapia celular adoptiva como una metodología de tratamiento alternativa, que utiliza el propio sistema inmunitario del organismo en un intento de mejorar la especificidad hacia la célula diana al tiempo que reduce la toxicidad. La activación y proliferación de diversas poblaciones de linfocitos con linfoquinas tanto in vivo como in vitro han sido investigadas, con grados variables de satisfacción. Por ejemplo, se han utilizado células asesinas activadas por linfoquinas (LAK) y linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) combinados con interleuquina-2 (IL- 2) en el tratamiento de la enfermedad metastásica. Véase Rosenberg et al., N. Engl. J. Med. 316: 889-97 (1987); Belldegrun et al., Cáncer. Res. 48: 206-14 (1988).

Desafortunadamente, la inclusión de altos niveles de IL-2 para activar y expandir las poblaciones de células se asocia por sí misma con toxicidad significativa para el paciente. Por otra parte, las poblaciones de células específicas de células diana han sido difíciles de expandir in vitro, ya que los linfocitos cultivados en altos niveles de IL-2 eventualmente desarrollan una falta de respuesta a la IL-2, y, posteriormente, muestran una disminución importante en la proliferación y la citotoxicidad. Véase Schoof et al., Cáncer Res. 50:1138/43 (1990). El último problema también ha obstaculizado los esfuerzos para utilizar con éxito los linfocitos como vehículos celulares para la terapia génica en el ser humano.

Denmeade et al., J. Nat. Cáncer Inst. 2003, Vol. 95, Núm. 13, págs 990-1000 describen tapsigargina acoplada a un portador peptídico que es un sustrato para la proteasa antigénica específica de próstata para proporcionar una terapia dirigida para el cáncer de próstata. Sohoel et al, Bioorganic and Medicinal Chemistry, 2006, 14, 2810-2815 describen análogos de tapsitargina de segunda generación. Eliopoulos et al., Current Opinión in Pharmacology, 2004, 4: 360-367 discuten el papel de la ruta de CD40 en la patogénesis y el tratamiento del cáncer. El documento W02004/037321 describe un aparato y un método para la inmunoterapia del cáncer, que comprende tomar una muestra de tumor de un paciente, Usar la muestra y devolver el tejido lisado al paciente.

Lo que se necesita es un enfoque específico contra el cáncer que sea un tumoricida fiable para una amplia variedad de tipos de tumores. Es importante destacar que el tratamiento debe ser eficaz con una toxicidad mínima para el anfitrión.

Compendio de la invención

La invención se refiere en general a la prevención y/o el tratamiento del cáncer, y, más concretamente, al tratamiento de tumores, incluyendo tumores sólidos y sus metástasis, sin radiación o agentes quimioterapéuticos convencionales. En una realización, la invención proporciona un método de preparación de un agente anticanceroso que comprende

1. (a) exponer ex vivo una porción de células obtenidas a partir de una línea celular de cáncer o una porción

de células tumorales obtenidas de un paciente a un agente seleccionado entre tapsigargina y tapsigargicina,

con el fin de crear células tumorales tratadas;

2. (b) Usar dichas células tumorales tratadas para crear fragmentos de células, en donde dichos fragmentos

son adecuados para generar un efecto terapéutico contra el cáncer.

Las células tratadas se pueden lavar para reducir al mínimo la cantidad de agente transportado en la siguiente etapa. No se pretende que la presente invención esté limitada por ningún tiempo de exposición/tratamiento concreto. Se contempla una variedad de tiempos de exposición, incluyendo tiempos de exposición entre 1 segundo y 72 horas, más preferiblemente entre 30 segundos y 1 hora, aún más preferiblemente 1 minuto y 30 minutos. No se pretende que la presente invención esté limitada por la naturaleza de la lisis en la etapa (b). En una realización, las células tumorales tratadas se Usan mediante congelación /descongelación de las células. En otra realización, se usa un agente de lisis; los agentes de lisis pueden ser detergentes (p. ej., dodecil sulfato... [Seguir leyendo]

1. Un método para preparar un agente anticanceroso que comprende

(a) exponer ex vivo una porción de células obtenidas a partir de una línea celular de cáncer o una porción de células tumorales obtenidas de un paciente a un agente seleccionado entre tapsigargina y tapsigargicina, con el fin de crear células tumorales tratadas;

(b) lisar dichas células tumorales tratadas para crear fragmentos de células, en donde dichos fragmentos son adecuados para generar un efecto terapéutico contra el cáncer.

2. El método de la reivindicación 1, en donde la etapa (b) comprende adicionalmente la preparación de extractos de células tumorales de dichas células tumorales tratadas, y en donde dicho extractos son adecuados para generar un efecto terapéutico contra el cáncer.

3. El método de la reivindicación 2, en donde dicho extractos están libres de células.

4. El método de la reivindicación 1, en donde dicho tratamiento de la etapa (a) es durante un tiempo entre 1 minuto y 30 minutos.

5. El método de la reivindicación 1, en donde dichas células tumorales se seleccionan del grupo que consiste en células de cáncer de próstata, células de cáncer de mama, células de cáncer cervical, células de cáncer de útero, células de cáncer pancreático, células de cáncer de colon, células de cáncer de pulmón y células de cáncer de hueso.

6. El método de la reivindicación 1, en donde dichas células tumorales son células de cáncer de piel.

7. El método de la reivindicación 1, en donde dichas células tumorales son células de linfoma.

8. El método de la reivindicación 1, en donde dicho agente comprende tapsigargina.

9. El método de la reivindicación 1, en donde dicho agente comprende tapsigargicina.

10. Un agente contra el cáncer producido por un método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para uso en el tratamiento o prevención del cáncer en un paciente.

11. El agente contra el cáncer para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicho tratamiento comprende adicionalmente introducir un constructo de expresión de CD40L en dicho paciente.

12. El agente contra el cáncer para el uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicho tratamiento comprende una reducción del tamaño del tumor.