Reactivo para la medición de plaquetas, kit de reactivos para la medición de plaquetas, y método de medición de plaquetas.

Un reactivo para la medición de las células plaquetarias de la sangre que comprende,

como colorante para la tinción de las células plaquetarias de la sangre, un compuesto de la siguiente fórmula (III):**Fórmula**

y un disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol; en donde dicho compuesto se disuelve en dicho disolvente orgánico soluble en agua.

Reactivo para la medición de plaquetas, kit de reactivos para la medición de plaquetas, y método de medición de plaquetas

Campo técnico

La presente invención se refiere a un reactivo para la medición de las plaquetas, a un kit de reactivos para la medición de las plaquetas y a un método para la medición de las plaquetas que lo utiliza. Más específicamente, la presente invención se refiere al reactivo para medir plaquetas que comprende Azul Nilo, concretamente Azul Nilo hidrogenosulfato.

Antecedentes de la técnica

Se conocen métodos en los que las células sanguíneas, es decir, leucocitos, reticulocitos, eritrocitos y similares se miden rápidamente mediante el uso del principio de la citometría de flujo.

En cuanto a uno de tales métodos de medición, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.114.173 describe un método para el recuento y la determinación de reticulocitos, eritrocitos y plaquetas en muestras de sangre completa, así como una composición de reactivos utilizada para el método. Específicamente, los reticulocitos se tiñen con una mezcla de reactivos que contiene un colorante catiónico, en particular Oxazina 75, y se miden la señal de luz dispersada y la señal de absorbancia de luz utilizando la citometría de flujo. A continuación, se diferencian los eritrocitos y los reticulocitos en las muestras de sangre por la diferencia en las señales de absorbancia, y se diferencian el grupo de los eritrocitos y reticulocitos y las plaquetas por la diferencia en las señales de luz dispersa, con el fin de determinar el número total de cada especie.

Compendio de la invención

Problema Técnico

Se sabe que los glóbulos rojos fragmentados, los lípidos y similares que aparecen en la sangre tienen un tamaño similar al de las plaquetas, de modo que afectan a las mediciones como contaminantes. Especialmente, las muestras que contienen pocas plaquetas para las que se puede requerir transfusión de sangre se ven significativamente más afectadas por estos contaminantes en las mediciones. Semejante problema puede producirse en el método descrito en la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.114.173. No Obstante, la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.114.173 no describe que las plaquetas se midan evitando cualquier efecto por los contaminantes.

Además, los colorantes que pueden teñir las plaquetas pueden ser degradados en una solución con el tiempo. Las mediciones de plaquetas mediante citometría de flujo se llevan a cabo mediante detección de la luz dispersada y de la fluorescencia obtenida mediante la aplicación de luz a las células teñidas con el colorante en las muestras. Sin embargo, cuando se utiliza una solución de colorante en la que se ha disminuido la cantidad de colorante contenida para la tinción de plaquetas, no se pueden obtener una luz dispersada o una fluorescencia precisas, y no se pueden obtener unos resultados de medición precisos.

La presente invención se ha logrado a la vista de las circunstancias anteriores, y tiene por objeto proporcionar un reactivo y un kit de reactivos para la medición de las plaquetas que hace posible medir las plaquetas con mayor precisión mediante la prevención de los efectos de los contaminantes que pueden estar contenidos en las muestras y evitar la detección de las plaquetas y que tienen una alta estabilidad de almacenamiento. La presente invención también tiene por objeto proporcionar un método para la medición de las plaquetas que hace posible medir las plaquetas con mayor precisión.

Medios para resolver los problemas

Por lo tanto, la presente invención proporciona un reactivo para la medición de las plaquetas que comprende, como colorante para la tinción de las plaquetas, Azul Nilo que tiene iones de hidrogenosulfato como contraiones que se disuelven en etilenglicol.

La presente invención también proporciona un kit de reactivos para la medición de las plaquetas que comprende:

un primer reactivo que comprende, como un colorante para la tinción de las plaquetas, Azul Nilo que tiene iones de hidrogenosulfato como contraiones que se disuelven en etilenglicol, y un segundo reactivo que comprende un agente tamponador.

Además, la presente invención proporciona un método para la medición de las plaquetas que comprende las etapas de:

mezclar un primer reactivo que comprende, como colorante para la tinción de las plaquetas, Azul Nilo que tiene iones hidrogenosulfato como contraiones que se disuelven en etilenglicol y una muestra con o sin la adición de un segundo reactivo que comprende un agente tamponador para preparar una muestra de medición;

aplicar luz a las células de la muestra de medición obtenida para detectar la luz dispersada y la fluorescencia emitida por las células; y

detectar las plaquetas contenidas en la muestra de medición basándose en la luz dispersada y la fluorescencia detectadas.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un reactivo para la medición de las plaquetas que comprende, como colorante para la tinción de las plaquetas, Azul Nilo que tiene 1/2 SO42 como contraión y un ácido que se disuelven en etilenglicol con una razón de concentración molar entre el colorante y el ácido de 1:1 a 1:1.

Adicionalmente, la presente invención proporciona un kit de reactivos para la medición de las plaquetas que comprende:

un primer reactivo que comprende, como colorante para la tinción de las plaquetas, Azul Nilo que tiene 1/2 SO42' como contraión y un ácido que se disuelven en etilenglicol con una razón de concentración molar entre el colorante y el ácido de 1:1 a 1:1, y un segundo reactivo que comprende un agente tamponador.

Adicionalmente, la presente invención proporciona un método para la medición de las plaquetas que comprende las etapas de:

mezclar un reactivo para la medición de las plaquetas que comprende Azul Nilo que tiene 1/2 SO42' como contraión y un ácido que se disuelven en etilenglicol con una razón de concentración molar entre el colorante y el ácido de 1:1 a 1:1 y una muestra con o sin la adición de un segundo reactivo que comprende un agente tamponador para preparar una muestra de medición;

aplicar luz a las células de la muestra de medición obtenida para detectar la luz dispersada y la fluorescencia emitida por las células; y

detectar las plaquetas contenidas en la muestra de medición basándose en la luz dispersada y la fluorescencia detectadas.

Según se utiliza en la presente memoria, "Azul Nilo" indica colorantes que consisten en el compuesto que está representado, por ejemplo, por la siguiente fórmula (II):

(I 1 >

en donde X' es un anión;

y está en forma de una sal con el contraión representado porX'. En la presente memoria descriptiva, los colorantes representados por la fórmula (II) en la que el contraión representado por X' no está limitado específicamente se llaman simplemente "Azul Nilo", y los colorantes representados por la fórmula (II) en la que el contraión se define específicamente se llaman "Azul Nilo XXX (XXX denota una sal con un ion particular)". Por ejemplo, el colorante que tiene ion sulfúrico (1/2 S42') como contraión se llama "Azul Nilo sulfato" y el colorante que tiene ión hidrogenosulfato (HS4 ) como un contraión se llama "Azul Nilo hidrogenosulfato".

Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 muestra recipientes que pueden contener el kit de reactivos para la medición de las plaquetas de la presente invención.

La Fig. 2 es una vista frontal de la constitución esquemática de un analizador de muestras.

La Fig. 3 es un diagrama de bloques que muestra la constitución esquemática del analizador de muestras. La Fig. 4 es una vista esquemática en planta que muestra la constitución de una sección de detección.

La Fig. 5 muestra los diagramas de dispersión obtenidos por la medición de las plaquetas utilizando el reactivo para la medición de las plaquetas del Ejemplo Experimental 9.

La Fig. 6 muestra los diagramas de dispersión obtenidos por la medición de las plaquetas utilizando el reactivo para la medición de las plaquetas del Ejemplo Experimental 1.

La Fig. 7 muestra los diagramas de dispersión obtenidos por la medición de las plaquetas utilizando el reactivo para la medición de las plaquetas del Ejemplo Experimental 11.

La Fig. 8 muestra los diagramas de dispersión obtenidos por la medición de las plaquetas utilizando el reactivo para la medición de las plaquetas del Ejemplo Experimental 12.

La Fig. 9 muestra los diagramas de dispersión obtenidos por la medición de las plaquetas utilizando el reactivo colorante del Ejemplo Experimental 13.

La Fig. 1 muestra... [Seguir leyendo]

1. Un reactivo para la medición de las células plaquetarias de la sangre que comprende, como colorante para la tinción de las células plaquetarias de la sangre, un compuesto de la siguiente fórmula (III):

(III)

y un disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol; en donde dicho compuesto se disuelve en dicho disolvente orgánico soluble en agua.

2. Un kit de reactivos para la medición de las células plaquetarias de la sangre que comprende:

un primer reactivo que comprende, como colorante para la tinción de las células plaquetarias de la sangre, un compuesto de la siguiente fórmula (III):

(III)

y un disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol; en donde dicho compuesto se disuelve en dicho disolvente orgánico soluble en agua, y un segundo reactivo que comprende un agente tamponador.

3. El kit de reactivos para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la reivindicación 2, en

donde el segundo reactivo es un tampón que tiene un pH de 6, a 11,.

4. El kit de reactivos para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la reivindicación 2, en

donde el segundo reactivo tiene una osmolalidad de 15 a 6 mOsm/kg.

5. El kit de reactivos para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el segundo reactivo comprende adicionalmente un tensioactivo para la aceleración de la tinción de las células plaquetarias de la sangre con el colorante.

6. El kit de reactivos para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el tensioactivo es un tensioactivo catiónico.

7. Un método para la medición de las células plaquetarias de la sangre que comprende las etapas de:

mezclar un primer reactivo que comprende, como colorante para la tinción de las células plaquetarias de la sangre, un compuesto de la siguiente fórmula (III):

(ni)

y un disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol; en donde dicho compuesto se disuelve en dicho disolvente orgánico soluble en agua, y una muestra con o sin la adición de un segundo reactivo que comprende un agente tamponador para preparar una muestra de medición; aplicar luz a las células de la muestra de medición obtenida para detectar la luz dispersada y la fluorescencia emitida por las células; y

detectar las células plaquetarias de la sangre contenidas en la muestra de medición basándose en la luz dispersada y la fluorescencia detectadas.

8. El método para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende adicionalmente una etapa de recuento de las células plaquetarias de la sangre detectadas.

9. Un reactivo para la medición de las células plaquetarias de la sangre que comprende, como colorante para la tinción de las células plaquetarias de la sangre, un compuesto de la siguiente fórmula (II):

(II)

en donde X- es 1/2 SO42'; un ácido; y

un disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol, en donde dicho compuesto y dicho ácido se disuelven en dicho disolvente orgánico soluble en agua, y en donde la razón de concentración molar entre el colorante y el ácido es de 1:1 a 1:1.

1. El reactivo para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la Reivindicación 9, en donde el ácido es un ácido inorgánico.

11. Un kit de reactivos para la medición de las plaquetas de la sangre que comprende:

un primer reactivo que comprende, como colorante para la tinción de las células plaquetarias de la sangre, un compuesto de la siguiente fórmula (II):

(II)

en donde X" es 1/2 SO42'; un ácido; y un disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol; en donde dicho compuesto y dicho ácido se disuelven en dicho disolvente orgánico soluble en agua,y

un segundo reactivo que comprende un agente tamponador, y

en donde la razón de concentración molar entre el colorante y el ácido en el primer reactivo es de 1:1 a

1:1.

12. Un método para medir las células plaquetarias de la sangre que comprende las etapas de:

mezclar un primer reactivo que comprende un compuesto de la siguiente fórmula (II):

<n>

en donde X' es 1/2 SO42; un ácido; y un disolvente orgánico soluble en agua; en donde dicho compuesto y dicho ácido se disuelven en dicho disolvente orgánico soluble en agua, dicho disolvente es etilenglicol, en donde la razón de concentración molar entre el colorante y el ácido en el primer reactivo es de 1:1 a 1 1:1, y una muestra con o sin la adición de un segundo reactivo que comprende un agente tamponador

para preparar una muestra de medición;

aplicar luz a las células de la muestra de medición obtenida para detectar la luz dispersada y la fluorescencia emitida por las células; y

detectar las células plaquetarias de la sangre contenidas en la muestra de medición basándose en la luz 15 dispersada y la fluorescencia detectadas.

13. El método para la medición de las células plaquetarias de la sangre de acuerdo con la reivindicación 12, que comprende adicionalmente una etapa de recuento de las células plaquetarias de la sangre detectadas.