Proteínas mutantes de la proteína F de PIV-5 y de PIV-2.

Proteína mutante, cuya secuencia en aminoácidos comprende una secuencia que difiere de la de la proteína F de un virus PIV-5 o PIV-2:

- por sustitución:

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 22, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 24, por el aminoácido P, y

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 132, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 133, por el aminoácido E, y

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 290, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 294, por el aminoácido A, y

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 449, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 439, por el aminoácido P,

- y, opcionalmente:

- por sustitución del sitio de escisión nativo de dicha proteína F por otro sitio de escisión enzimático, y/o por inserción en dicha proteína F de un sitio de escisión enzimático diferente del sitio de escisión nativo de esta proteína F, y/o

- por supresión de una parte C-terminal de dicha proteína F, extendiéndose dicha parte C-terminal en dirección Nterminal a partir del último aminoácido en el extremo C-terminal de la proteína, pero sin extenderse más allá del dominio HR2 de dicha proteína F,

la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5 o PIV-2 que comprende la secuencia de la SEC ID NO: 34.

Proteínas mutantes de la proteína F de PIV-5 y de PIV-2 Campo técnico

La presente solicitud se refiere a proteínas mutantes de la proteína de fusión (proteína F) del virus Parainfluenza (PIV) que están actualmente catalogadas bajo PIV de tipo 5 (PIV-5 o PIV5) y PIV de tipo 2 (PIV-2 o PIV2).

La presente solicitud se refiere a productos que derivan de ellos, tales como:

* ácidos nucleicos, vectores, células,

* inhibidores de fusión de tipo anticuerpo, aptámeros, ARN interferente,

* mielomas, hibridomas,

* células madre y progenitoras.

La presente solicitud se refiere también a estas proteínas mutantes y productos que derivan de ellas para su utilización en aplicaciones médicas y biotecnológicas.

Técnica anterior

El virus Parainfluenza (PIV) que está actualmente catalogado bajo PIV de tipo 5 (PIV-5 o PIV5) es un virus con envoltura del género Rubulavirus de la familia de las Paramyxoviridae. PIV-5 se conocía anteriormente bajo el nombre de SV5 (Simian Virus 5), ya que su aislamiento se realizó inicialmente a partir de cultivos primarios de células de mono. El hospedante natural de PIV-5 parece ser sin embargo el perro, en el que causa una tos conocida con el nombre de tos de las perreras.

Después, se han obtenido algunos aislados de PIV-5 a partir de muestras extraídas en humanos, pero que han sido colocadas en cultivo sobre células animales. Además, no está asociado ningún síntoma o enfermedad al PIV-5 en el ser humano. La cuestión de saber si el ser humano es efectivamente un hospedante para PIV-5 está por lo tanto hoy día todavía sujeta a debate.

En cualquier caso, el virus PIV-5 es actualmente considerado como un virus animal.

El virus de la Parainfluenza (PIV) que está actualmente catalogado bajo el PIV de tipo (PIV-2 o PIV2) es también un virus con envoltura del género Rubulavisu de la familia de los Paramyxoviridae.

Ploy día, sólo se han identificado unos aislados humanos de PIV-2 (hPIV-2), de manera que el PIV-2 está considerado como un virus humano.

Los virus PIV-5 y PIV-2 son muy parecidos el uno del otro, tanto en términos de secuencias de ácidos nucleicos, como de secuencias proteicas, de organización, de estructura y de morfología.

Entre los virus de Parainfluenza humanos, el PIV-2 es el virus más parecido a PIV-5 que se ha encontrado en el ser humano.

El PIV-2 se puede considerar, y así se considera por lo menos por los inventores, como el equivalente humano de PIV-5.

La infección por PIV-5 o PIV-2 conduce a la formación de estructuras plurinucleares denominadas sincitio, que resulta de la fusión de células del hospedante Infectado.

La entrada de los virus PIV-5 y PIV-2 en la célula hospedante se realiza mediante la fusión de la envoltura viral con la membrana celular.

Esta fusión implica dos glicoproteínas virales: la proteína de fijación hemaglutinina-neuraminidasa (FIN) y la proteína de fusión (F).

La proteína de fusión F de PIV-5 y PIV-2 se sintetiza en forma de un simple precursor (F) y se presenta en forma de un homotrímero glicosilado. La proteína de fusión F de PIV-5 y PIV-2 necesita una escisión proteolítica por unas furinas del hospedante para generar una forma "pre-activada" que consiste en dos subunidades unidas por unos puentes disulfuros: una gran subunidad F1 carboxi-terminal y una pequeña subunidad amino-terminal F2.

La sub-unidad F1 está compuesta de un péptido de fusión hidrófobo (FP) así como dos dominios repetidos en heptadas (HR-1 y HR-2), que presentan una conformación de tipo super-enrollado ("coiled-coil"). Después de la activación por HN, la proteína de fusión sufre un conjunto de cambios conformacionales que resultan en la inserción del péptido de fusión en la membrana celular diana. Tras lo cual se produce la interacción entre los dominios HR-1 y HR-2 que acercan la envoltura viral de la membrana celular (Russell ef al. 26). Estos dominios son conocidos por formar un haz ("bundle") de seis hélices muy estable constituido de una estructura trimérica super-enrollada ("coiled- coil") en la que tres dominios HR-1 están unidos con tres dominios HR-2 en orientación antiparalela. Esta conformación representa la forma de post-fuslón de la proteína F (Baker et al. 1999, Sergel-Germano ef al. 2, West et al. 25).

La proteína de fusión F de PIV-5 y PIV-2 necesita una proteína HN que proviene del mismo tipo viral para que no haya promoción de la fusión (Yao et al. 1997). Sin embargo, la naturaleza precisa de las interacciones que existen entre F y HN no es todavía bien conocida.

No obstante, varios estudios han mostrado que algunas cepas de PIV-5 y de PIV-2 difieren en su necesidad de HN para la activación de la fusión.

Por ejemplo, Ito et al. 1997 describen dos cepas de "SV5" (PIV-5) a saber W3A y WR, cuyas proteínas F difieren sólo por los tres aminoácidos (residuos 22, 443 y 516). La proteína F de la cepa W3A es capaz de inducir la fusión de manera autónoma, es decir en ausencia de la proteína HN, mientras que la proteína F de la cepa WR no es capaz de ello.

Ito ef al. 1997 indican que la actividad fusogénica de la proteína F de la cepa WR puede ser reestablecida sustituyendo el aminoácido de la posición 22 de esta proteína por un aminoácido prolina.

Ito ef al. 2 sugieren que el aminoácido E de la posición 132 y el aminoácido A de la posición 29 de la proteína F de las cepas W3A y WR podrían estar implicados en la capacidad de la proteína F de estas cepas para ser autónoma de la proteína HN.

Paterson ef al. 2 Indican que la presencia del aminoácido prolina de la posición 22 de la proteína F de la cepa W3A, la presencia del aminoácido 443 de la proteína F de la cepa WR podrían aumentar la capacidad fusogénica de estas cepas virales.

Russell ef al. 23 indican que el hecho de sustituir los residuos L447 y I449 de la proteína F de la cepa W3A por unos aminoácidos aromáticos podría aumentar la capacidad fusogénica de esta cepa viral.

Gardner y Dutch 27 indican que la mutación I49A de la proteína F de un virus "SV5" (PIV-5) de tipo salvaje tendría un efecto pro-fusogénico.

Gardner ef al. 27 indican que la mutación V42A de la proteína F de un virus "SV5" (PIV-5) de tipo salvaje tendría un efecto pro-fusogénico.

En lo referente a la proteína PIV-2, no parece haber documento en la técnica anterior que describiera la introducción de mutación(es) en la secuencia de la proteína F de este virus, a fin de intentar aumentar su autonomía y su capacidad fusogénica.

Por otra parte, existen otras numerosas proteínas virales capaces de fusión, tales como por ejemplo las proteínas HA1/HA2 de Influenza, la proteína G de los Rhabdovirus, las proteínas gp41/gp12 del VIH.

Los conocimientos actuales en cuestión de capacidades de fusogenicidad y de autonomía de estas diferentes proteínas virales siguen siendo hoy día muy limitados.

En cualquier caso, los conocimientos actuales en cuestión de proteínas de fusión virales no aportan un dominio técnico que sea suficiente para considerar unas aplicaciones médicas y/o biotecnológicas efectivas.

Resumen de la invención

Los inventores han considerado que el hecho de disponer de una proteína de fusión que sea hiperfusogénica y que tenga asimismo una gran autonomía en su capacidad de fusión permitiría aportar una solución a un cierto número de situaciones médicas y biotecnológicas.

Los Inventores han realizado entonces una selección selectiva frente a la proteína F de PIV-5 y/o PIV-2 con respecto al conjunto de las demás proteínas de fusión virales, tales como las proteínas HA1/HA2 de Influenza, la proteína G de los Rhabdovirus, las proteínas gp41/gp12 del VIH.

Después, han construido unas proteínas F mutantes, que son capaces de fusogenicidad en ausencia de la proteína HN.

Las proteínas mutantes de la invención demuestran una fuerte capacidad de fusogenicidad y una fuerte autonomía. No necesitan la presencia de la protelna HN para inducir la fusión celular y la formación de sincitio.

Los inventores muestran además que es posible introducir en estas proteínas mutantes un sitio de escisión diferente del que presenta la proteína F en estado natural, y más particularmente un sitio de escisión especifico del tejido.

Los inventores proponen además unas aplicaciones médicas (terapéuticas, preventivas, paliativas, pero también de diagnóstico) y/o biotecnológicas de las proteínas mutantes de la invención y/o de los productos que resultan o que derivan de ello.

Más particularmente, los inventores proponen utilizar las proteínas mutantes de la invención o los ácidos... [Seguir leyendo]

1. Proteína muíante, cuya secuencia en aminoácidos comprende una secuencia que difiere de la de la protema F de un virus PIV-5 o PIV-2:

- por sustitución:

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha protema F de virus PIV-5, está en la posición 22, o que, en la secuencia de dicha protema F de virus PIV-2, está en la posición 24, por el aminoácido P, y

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 132, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 133, por el aminoácido E, y

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 29, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 294, por el aminoácido A, y

- del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5, está en la posición 449, o que, en la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-2, está en la posición 439, por el aminoácido P,

- y, opcionalmente:

- por sustitución del sitio de escisión nativo de dicha proteína F por otro sitio de escisión enzimático, y/o por inserción en dicha proteína F de un sitio de escisión enzimático diferente del sitio de escisión nativo de esta proteína F, y/o

- por supresión de una parte C-terminal de dicha proteína F, extendiéndose dicha parte C-terminal en dirección N- terminal a partir del último aminoácido en el extremo C-terminal de la proteína, pero sin extenderse más allá del dominio HR2 de dicha proteína F,

la secuencia de dicha proteína F de virus PIV-5 o PIV-2 que comprende la secuencia de la SEC ID NO: 34.

2. La proteína mutante según la reivindicación 1, caracterizada por que la secuencia de dicha proteína F es una proteína F de PIV-5.

3. La proteína mutante según la reivindicación 2, caracterizada porque la secuencia de dicha proteína F consiste en:

- la secuencia de la SEC ID NO: 31, o la secuencia alternativa que es idéntica a la secuencia de SEC ID NO: 31 con la excepción del aminoácido en la posición 443, que es S en esta secuencia alternativa (en lugar de P en la SEC ID NO: 31), o en

- una secuencia variante de esta secuencia de la SEC ID NO: 31 o de dicha secuencia alternativa, esta secuencia variante:

o es de un tamaño idéntico al de la SEC ID NO: 31, o es de un tamaño superior en un máximo de 7 aminoácidos al de la SEC ID NO: 31, o es de un tamaño inferior en un máximo de 7 aminoácidos al de la SEC ID NO: 31, y

o presenta una identidad de secuencia de más del 95%, preferiblemente de al menos el 96%, más preferiblemente de al menos el 97%, con respecto a la secuencia de la SEC ID NO: 31 o a dicha secuencia alternativa, siendo esta identidad calculada sobre la longitud de la secuencia de la SEC ID NO: 31 o, llegado el caso, de dicha secuencia alternativa.

4. La proteína mutante según la reivindicación 3, caracterizada por que la secuencia de dicha proteína F consiste en la secuencia de la SEC ID NO: 31 modificada por las sustituciones de aminoácidos indicados en la tabla 1 en la columna "W3A" o "MIL" o "DEN" o "LN" o "MEL" o "Criptovirus" o "CPI+" o "CPI-" o "H221" o "78524" o "T1" o "SER".

5. La proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizada por que su secuencia en aminoácidos no comprende otra mutación con respecto a dicha secuencia de la proteína F de PIV-5.

6. La proteína mutante según la reivindicación 5, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F es la secuencia de la SEC ID NO: 65.

7. La proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- al menos una mutación de prefusión seleccionada de entre:

- la sustitución del aminoácido en la posición 49 por el aminoácido A,

- la sustitución del aminoácido en la posición 42 por el aminoácido A,

- la sustitución del aminoácido en la posición 443 por el aminoácido P,

- la sustitución del aminoácido en la posición 447 por el aminoácido P,

y/o por

- al menos una mutación de post-fusión seleccionada de entre:

- la sustitución del aminoácido en la posición 147 por un aminoácido hidrófobo,

- la sustitución del aminoácido en la posición 158 por un aminoácido hidrófobo.

8. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 y 7, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 49, por el aminoácido A, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 42, 147, 158 y 463 por los aminoácidos A, V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 49, 42, 147, 158 y 463, por los aminoácidos A, A, V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 42, por el aminoácido A, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 147, por el aminoácido V, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 158, por el aminoácido V, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 147 y 158, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 147 y 463, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 158 y 463, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 147, 158 y 463, por los aminoácidos V, V y V, respectivamente.

9. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 y 7 a 8, caracterizada por que la secuencia de dicha proteína F es la secuencia de la SEC ID NO: 31 con el aminoácido S en la posición 443, y por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 49, por el aminoácido A, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 42, 147, 158 y 463 por los aminoácidos A, V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 49, 42, 147, 158 y 463, por los aminoácidos A, A, V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 42, por el aminoácido A, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 147, por el aminoácido V, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 158, por el aminoácido V, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 147 y 158, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 147 y 463, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 158 y 463, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 147, 158 y 463, por los aminoácidos V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 49 y 158, por los aminoácidos A y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 49, 147 y 158, por los aminoácidos A, V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 49, 147, 158 y 463, por los aminoácidos A, V, V y V, respectivamente.

1. La proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5 y 7 a 9, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- la sustitución del aminoácido en la posición 147 por un aminoácido hidrófobo, y

- la sustitución del aminoácido en la posición 158 por un aminoácido hidrófobo.

11. La proteína mutante según la reivindicación 1, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F es la secuencia de la SEC ID NO: 78.

12. La proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 y 7 a 1, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- al menos una mutación de post-fusión seleccionada de entre:

- la sustitución del aminoácido en la posición 147 por un aminoácido hidrófobo,

- la sustitución del aminoácido en la posición 158 por un aminoácido hidrófobo;

y

- al menos otra mutación de post-fusión, a saber la sustitución del aminoácido en la posición 463 por un aminoácido hidrófobo, preferentemente V, I o L, más preferiblemente V.

13. La proteína mutante según la reivindicación 1, caracterizada por que la secuencia de dicha proteína F es una proteína F de PIV-2.

14. La proteína mutante según la reivindicación 13, caracterizada porque la secuencia de dicha proteína F consiste en:

- la secuencia de la SEC ID NO: 33, o en

- una secuencia variante de esta secuencia de SEC ID NO: 33, esta secuencia variante:

* es de un tamaño idéntico al de la SEC ID NO: 33, o es de un tamaño superior en un máximo de 2 aminoácidos al de la SEC ID NO: 33, o es de un tamaño inferior en un máximo de 2 aminoácidos al de la SEC ID NO: 33, y

* presenta una Identidad de la secuencia de más del 95%, preferiblemente de al menos el 96%, más preferiblemente de al menos el 97%, con respecto a la secuencia de la SEC ID NO: 33, siendo esta identidad calculada sobre la longitud de la secuencia de SEC ID NO: 33.

15. La proteína mutante según la reivindicación 13 o 14, caracterizada porque dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha proteína F, está en la posición 53, por el aminoácido A, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha protema F, están en las posiciones 46, 151, 162 y 474, por los aminoácidos A, V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha protema F, están en las posiciones 53, 46, 151, 162 y 474, por los aminoácidos A, A, V, V y V, respectivamente, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha protema F, está en la posición 46, por el aminoácido A, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha protema F, está en la posición 151, por el aminoácido V, respectivamente, o por

- sustitución del aminoácido que, en la secuencia de dicha protema F, está en la posición 162, por el aminoácido V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 151 y 162, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 151 y 474, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 162 y 474, por los aminoácidos V y V, respectivamente, o por

- sustitución de los aminoácidos que, en la secuencia de dicha proteína F, están en las posiciones 151, 162 y 474, por los aminoácidos V, V y V, respectivamente.

16. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, caracterizada por que su secuencia en aminoácidos no comprende otra mutación con respecto a dicha secuencia de la proteína F de PIV-2.

17. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- al menos una mutación de pre-fusión seleccionada de entre:

- la sustitución del aminoácido en la posición 53 por el aminoácido A,

- la sustitución del aminoácido en la posición 46 por el aminoácido A,

- la sustitución del aminoácido en la posición 428 por el aminoácido P,

- la sustitución del aminoácido en la posición 445 por el aminoácido P,

y/o por

- al menos una mutación de post-fusión seleccionada de entre:

- la sustitución del aminoácido en la posición 151 por un aminoácido hidrófobo,

- la sustitución del aminoácido en la posición 162 por un aminoácido hidrófobo.

18. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 y 17, caracterizada por que dicha secuencia que difiere de la de dicha proteína F difiere además por:

- al menos una mutación de post-fusión seleccionada de entre:

- la sustitución del aminoácido en la posición 151 por un aminoácido hidrófobo,

- la sustitución del aminoácido en la posición 162 por un aminoácido hidrófobo;

y

- al menos otra mutación de post-fusión, a saber la sustitución del aminoácido en la posición 474 por un aminoácido hidrófobo, preferentemente V, I o L, más preferiblemente V.

19. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 7, 1, 12, 17, 18, caracterizada por que dicho aminoácido hidrófobo se selecciona de entre V, I, L, preferiblemente V.

2. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizada por que comprende una secuencia que difiere de la de la proteína F de un virus PIV-5 o PIV-2 por sustitución del sitio de escisión nativo de

dicha proteína F por otro sitio de escisión enzimático, y/o por inserción en dicha proteína F de un sitio de escisión enzimático diferente del sitio de escisión nativo de esta proteína F.

21. La proteína muíante según la reivindicación 2, caracterizada por que dicho sitio de escisión diferente del sitio de escisión nativo es un sitio de escisión específico de tejido.

22. La proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizada porque es fusogénica.

23. Ácido nucleico, ADN o ARN, que codifica una protelna muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o ácido nucleico complementario de tal ácido nucleico.

24. Vector de transfección, transducción o transformación, que comprende al menos un ácido nucleico según la reivindicación 23.

25. El vector de expresión según la reivindicación 24, caracterizado por que es un vector adenoviral oncolítico.

26. Célula, caracterizada por que comprende al menos una proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, y/o al menos un ácido nucleico, ADN o ARN según la reivindicación 23, y/o al menos un vector según la reivindicación 24 o 25.

27. Una proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, un ácido nucleico, ADN o ARN según la reivindicación 23, un vector según la reivindicación 24 o 25, una célula según la reivindicación 26, para una utilización en el tratamiento y/o la prevención y/o la paliación de una enfermedad o de un estado neoplásico, preferiblemente de un tumor metastásico, preferiblemente de un melanoma metastásico.

28. Una proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, un ácido nucleico, ADN o ARN según la reivindicación 23, un vector según la reivindicación 24, una célula según la reivindicación 26, para una utilización en el tratamiento y/o la prevención y/o la paliación de una deficiencia del desarrollo placentario.

29. Inhibidor de la fusión celular, caracterizado porque es:

- un anticuerpo dirigido contra una protelna muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o un fragmento Fab o F(ab')2 de tal anticuerpo,

- un ácido nucleico aptámero o un péptido aptámero que se une específicamente a al menos una protelna muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o a un ácido nucleico, ADN, ARN según la reivindicación 23,

- una célula del sistema inmunitario recombinante, preferiblemente una célula dendrítica recombinante, que expresa en su superficie al menos una proteína muíante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22,

- un ácido nucleico anti-sentido de un ácido nucleico según la reivindicación 23,

- un pequeño ARN interferente (small interfering RNA; siRNA) que comprende un ARN bicatenario de 19 a 22 nucleótidos, capaz de unirse a un ácido nucleico según la reivindicación 23.

3. La célula según la reivindicación 26, que es una célula del sistema inmunitario humano o animal no humano, preferiblemente una célula dendrítica humana o animal no humana, expresando dicha célula en su superficie al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22.

31. El inhibidor de fusión celular según la reivindicación 29, para una utilización en el tratamiento y/o la prevención y/o la paliación de una enfermedad o de un estado que implique un exceso de fusogenicidad celular, siendo dicha enfermedad o estado una infección por virus con envoltura (preferiblemente una infección por VIH y/o Influenza y/o Parainfluenza y/o Rhabdovirus), una alergia, una enfermedad autoinmune o un rechazo de injerto.

32. Una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, para una utilización a título de agente inmunógeno en el tratamiento y/o la prevención y/o la paliación de una enfermedad o de un estado que implique un exceso de fusogenicidad celular, siendo dicha enfermedad o estado una infección por virus con envoltura (preferiblemente una infección por VIH y/o Influenza y/o Parainfluenza y/o Rhabdovirus), una alergia, una enfermedad autoinmune o un rechazo de injerto.

33. Vacuna destinada al tratamiento y/o a la prevención y/o a la paliación de una enfermedad o de un estado que implique un exceso de fusogenicidad celular, siendo dicha enfermedad o estado una infección por virus con envoltura (preferiblemente una infección por VIH y/o Influenza y/o Parainfluenza y/o Rhabdovirus), una alergia, una enfermedad autoinmune o un rechazo de injerto, caracterizada por que comprende al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22.

34. Método in vitro para el diagnóstico o el pronóstico de una enfermedad que implique una formación insuficiente, o por el contrario excesiva, de sincitio, caracterizado por que comprende la detección en una muestra biológica de al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 o de al menos un ácido nucleico según la reivindicación 23.

35. Método in vitro para el cribado de un compuesto capaz de disminuir o bloquear la formación de sincitio, caracterizado por que comprende la puesta en contacto de un compuesto candidato con unas células que expresan al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, a fin de determinar si este compuesto candidato disminuye o bloquea la fusión de dichas células.

36. Célula tumoral, más particularmente mieloma, que comprende al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, preferiblemente que comprende al menos tal proteína mutante en su superficie, y/o que comprende al menos un ácido nucleico según la reivindicación 23, y/o que comprende al menos un vector según la reivindicación 24.

37. La célula tumoral, más particularmente el mieloma, según la reivindicación 36, para una utilización en la producción de un hibridoma.

38. Hibridoma, caracterizado por que comprende al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, y/o al menos un ácido nucleico según la reivindicación 23, y/o al menos un vector según la reivindicación 24.

39. Célula madre o progenitora, que presenta una capacidad de diferenciación en célula muscular, caracterizada por que comprende al menos una proteína mutante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, preferiblemente que comprende al menos tal proteína mutante en su superficie, y/o que comprende al menos un ácido nucleico según la reivindicación 23, y/o que comprende al menos un vector según la reivindicación 24, no siendo dicha célula una célula embrionaria humana.

4. La célula madre o progenitora de la reivindicación 39, para una utilización como célula madre o progenitora de fibra muscular.