Método para la descontaminación de priones.

Un método secuencial para la descontaminación o desinfección de priones,

que comprende:

(a) poner en contacto en primer lugar una entidad contaminada con priones que va a ser descontaminada con al menos un tensioactivo, y seguidamente

(b) poner en contacto la entidad con un agente oxidante, en que dicho agente oxidante comprende una fuente de peroxígeno y un activador, y seguidamente

(c) poner en contacto la entidad con al menos una proteasa.

Método para la descontaminación de priones Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos y reactivos para ser usados en la descontaminación de priones. En particular, la invención se refiere a la descontaminación de priones de instrumentos quirúrgicos, evitando ventajosamente un tratamiento con autoclave.

Antecedentes de la invención

La persistencia y resistencia de los agentes de priones responsables de CJD (enfermedad de Creutzfeldt-Jakob) ha hecho surgir temores sobre la posibilidad de una transmisión iatrogénica a continuación de una cirugía. Las enfermedades de priones, que incluyen tembladera, tembladera atípica en ovejas, BSE (Encefalopatía Espongiforme Bovina) en ganado, CWD (Enfermedad de Wasting Crónica) en ciervos y CJD en seres humanos son un grupo nuevo de estados neurodegenerativos mortales, transmisibles. El agente transmisible denominado prión está comprendido ampliamente o únicamente por un isómero conformacional de una proteína de prión PrPc celular normal. El confórmero relacionado con la enfermedad, denominado PrPSc, tiene varias propiedades inusuales que incluyen resistencia a proteólisis, insolubilidad en detergentes y elevada estabilidad térmica. Estas propiedades físicas asociadas a observaciones de que PrPSc el se adhiere fuertemente al acero quirúrgico y otros materiales presentan problemas en la limpieza y esterilización de instrumentos quirúrgicos ya que la actividad de priones se conoce que es resistente al tratamiento convencional en autoclave.

En ausencia de un ensayo de diagnóstico pre-clínico para la CJD, no es posible un ensayo pre-quirúrgico de los pacientes. Aunque en una minoría de casos, en los que la CJD se sospecha o es confirmada, los instrumentos usados pueden ser sometidos a cuarentena o destruidos. Sin embargo, para la mayoría de los procedimientos, son necesarios nuevos métodos de descontaminación. Hay muchos esfuerzos en marcha, que incluyen los del Departamento de Sanidad del Reino Unido (por ejemplo, Medical Research Council (MRC), Prion Unit, Londres, Reino Unido), intentando abordar el problema de las transmisiones iatrogénicas de la CJD.

En tratamiento en autoclave estándar y, en algunos casos, el tratamiento en autoclave a temperaturas elevadas hasta 134°C, es el patrón hospitalario para la descontaminación de priones. Sin embargo, estudios convencionales han mostrado la supervivencia de priones bajo condiciones de autoclave (Taylor, DM., J. Hosp. Infect 43:S69-S76 (1999); Jackson et al., J. Gen. Virol 86:869-878 (25)). Claramente, los priones se acumularán gradualmente bajo estas condiciones. Incluso el autoclave más eficaz sólo esterilizará hasta el grado en que el calor y el vapor de agua penetren en los artículos que están siendo tratados. Esto no es adecuado cuando se manejan conjuntos quirúrgicos que comprenden numerosos instrumentos complejos.

Taylor (Taylor D.M., supra) describe el uso de soluciones de hipoclorito de sodio e hidróxido de sodio 2M en la inactivación de priones. Sin embargo, hay problemas con esta propuesta como una inactivación incompleta y una incompatibilidad con muchos dispositivos médicos. Además, se ha informado la resistencia de los priones al tratamiento en autoclave.

Las normas de la entidad WHO (Organización Mundial de la Salud) sobre la descontaminación de priones recomendaron tratamiento en autoclave y sumergir los instrumentos contaminados en NaOH 1M y 2. ppm de NaOCI (Informe de la WHO "Infection Control Guidelines forTransmissible Spongiform Encephalopathies", 23-26 de marzo de 1999, Ginebra, Suiza, WHO/CDS/CSR/APH/2.3). Esto es un procedimiento extremadamente peligroso y puede dejar residuos de sales no deseables sobre las superficies. Aparte de esto, además de los aspectos de seguridad, el efecto corrosivo de estas especies de halógenos alcalinas u oxidantes a esa concentración, combinado con las temperaturas y presiones propias del tratamiento en autoclave, probablemente destruirían o al menos deteriorarían los delicados instrumentos quirúrgicos.

Los reactivos en el comercio actualmente en uso para la limpieza de instrumentos quirúrgicos antes del tratamiento en autoclave tienen poco a ningún efecto sobre la contaminación de PrP3. Los métodos existentes de descontaminación como los que implican LpH® y LpH®sa (Steris, Inc. Mentor, OH), y Endozyme Plus (Ruhof Corp., Mineóla, NY) son de uso limitado en destruir ineficazmente. Además, algunos reactivos son incompatibles con materiales médicos como el polímero Dracom (polisulfona).

Fichet et al. (Lancet 364:521-526 (24)) describen tres métodos para la desinfección de dispositivos médicos contaminados con priones. En primer lugar describen el uso de un limpiador enzimático (KLENZYME®, Merk & Co., Inc., Whitehouse Station, NJ) con tratamiento en autoclave a 121°C. En segundo lugar, describen un limpiador alcalino (HAMO® 1 PID, Steris, Mentor, Ohio). El tercer método descrito es el único que se dice que es adecuado para dispositivos frágiles como endoscopios e implica el uso de un limpiador alcalino sobre los instrumentos húmedos seguido de un tratamiento con peróxido de hidrógeno vaporizado (VHP) seco. Fichet et al. describen también un limpiador enzimático seguido de tratamiento VHP como muy eficaz. No hay ninguna descripción de la composición del limpiador enzimático. El ácido peracético es usado y se muestra que es ineficaz (velocidad de transmisión de 1% a continuación del tratamiento).

La presente invención busca superar el (los) problema(s) asociado(s) con las composiciones y métodos asociados con la técnica anterior proporcionando composiciones y métodos eficaces de descontaminación de priones.

Sumario de la invención

Se proporciona una composición acuosa de degradación de priones para ser usada en el método de la reivindicación 1.

Una composición acuosa de degradación de priones comprende (a) una cantidad eficaz de al menos un agente oxidante; (b) una cantidad eficaz de al menos una primera proteasa; (c) una cantidad eficaz de al menos una segunda proteasa en que dicha segunda proteasa es diferente de dicha al menos una primera proteasa; y (d) una cantidad eficaz de un tensioactivo.

En una realización preferida, la composición acuosa de degradación de priones comprende dos proteasas seleccionadas entre el grupo que consiste en NEUTRASE®, ALCALASE®, PRONASE® y Proteinasa K. En una realización preferida adicional, las dos proteasas son NEUTRASE® y ALCALASE®.

En una realización preferida, el tensioactivo es dodecil-sulfato de sodio (SDS).

En otra realización, la composición acuosa de degradación de priones comprende adicionalmente un ingrediente adicional seleccionado entre el grupo que consiste en ajustadores del pH, agentes tamponantes, agentes quelantes, inhibidores de la corrosión, estabilizadores de peroxígeno y sus mezclas.

La presente invención proporciona métodos mediante los cuales entidades con priones como instrumentos médicos pueden ser descontaminadas de la ineficacia de los priones. Según los métodos de esta invención, la entidad descontaminada de priones se pone en contacto con los compuestos de la composición acuosa de degradación de priones de forma secuencial.

Se ha encontrado sorprendentemente que los métodos de la invención dan lugar a una potenciación de la actividad de los componentes de la composición de degradación de priones, dando lugar a mejoras en la descontaminación de priones. En particular, el uso del agente oxidante en combinación con la proteasa descrita con posterioridad da lugar a un efecto sinérgico.

Se proporciona un método para la descontaminación o desinfección de priones que comprende: (a) poner en contacto una entidad contaminada con priones con al menos un tensioactivo; (b) poner en contacto la entidad con un agente oxidante y (c) poner en contacto la entidad con al menos una proteasa.

Se proporciona un método secuencial para la descontaminación o desinfección de priones de una entidad contaminada con priones que comprende: (a) en primer lugar poner en contacto la entidad que va a ser descontaminada con un tensioactivo y seguidamente (b) poner en contacto la entidad que va a ser descontaminada con un agente oxidante, en que dicho agente oxidante comprende una fuente de peroxígeno y un activador y seguidamente (c) poner en contacto la entidad con una proteasa.

En otra realización, un método para la descontaminación o desinfección de priones de una entidad contaminada con priones comprende: (a) en primer lugar poner en contacto la entidad con un tensioactivo y seguidamente (b) poner en contacto la entidad con un agente oxidante y seguidamente (c) poner en contacto la entidad con una primera proteasa y (d) poner... [Seguir leyendo]

1. Un método secuencial para la descontaminación o desinfección de priones, que comprende:

(a) poner en contacto en primer lugar una entidad contaminada con priones que va a ser descontaminada con al menos un tensioactivo, y seguidamente

(b) poner en contacto la entidad con un agente oxidante, en que dicho agente oxidante comprende una fuente de

peroxígeno y un activador, y seguidamente

(c) poner en contacto la entidad con al menos una proteasa.

2. El método de la reivindicación 1, en que el agente oxidante comprende:

(a) perborato o percarbonato; y

(b) tetraacetil-etilenodiamina (TAED) o N-acetil-caprolactama.

3. El método según la reivindicación 1 o 2, en que la al menos una proteasa comprende Neutrasa aislada a partir de Bacillus amyloliquefaciens o Alcalasa aislada a partir de Bacillus licheniformis.

4. El método según la reivindicación 1 o 2, en que el al menos un tensioactivo es dodecil-sulfato de sodio.