HbF y A1M como marcadores de fase inicial para preeclampsia.

Método para predecir el riesgo de desarrollar preeclampsia, estando el método caracterizado por comprender las etapas de

a) durante la semana de gestación 10-20 medir los niveles de A1M,

HbA y HbF en una muestra de suero aislada de un sujeto,

b) calcular la razón de HbF/Hb total (razón de HbF),

en el que se considera que el sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF medida supera 0,0020 y el nivel de A1M medido supera 21 μg/ml.

HbF y A1M como marcadores de fase inicial para preeclampsia

Campo de la técnica

La presente invención se refiere al uso de hemoglobina fetal (HbF) y (A1M) como marcadores para preeclampsia (PE) .

Antecedentes de la invención

La preeclampsia (PE) afecta a hasta el 7-15% de todos los embarazos y es un factor importante de morbimortalidad materna. Las manifestaciones clínicas de PE aparecen en del segundo al tercer trimestre. La PE de aparición temprana, la forma más grave, aparece antes de las 34 semanas de gestación (SG) . Los síntomas son a menudo poco claros y diversos, tales como dolor de cabeza, visión borrosa y edema. La hipertensión y proteinuria no son sólo características de la enfermedad, sino también son fundamentales para el diagnóstico.

En general se cree que la PE se desarrolla en dos fases, estando la primera fase caracterizada por placentación defectuosa, que conduce a perfusión sanguínea desigual, lesiones por reperfusión isquémica y aumento del estrés oxidativo en la placenta. La segunda fase de la PE, el síndrome materno, se caracteriza por una disfunción vascular general basada en daño endotelial grave que provoca eventualmente vasoconstricción, inflamación vascular general y disfunción multiorgánica.

Aunque hay parámetros clínicos usados para el diagnóstico de PE, existen grandes dificultades en el diagnóstico clínico de PE principalmente debido a los síntomas poco claros. Ni la cantidad de proteinuria ni el nivel de hipertensión se correlacionan muy bien con la gravedad de la PE tal como se examina por Schroeder BM. ACOG practice bulletin on diagnosing and managing preeclampsia and eclampsia, 15;66 (2) :330-1 y Redman CW & Sargent IL, Science ;308 (5728) :1592-4) .

Debido al hecho de que no hay biomarcadores fiables para predecir y/o diagnosticar la PE, últimamente se han dedicado grandes esfuerzos a este campo. Sin embargo, encontrar un buen biomarcador es un gran reto. Muchos de los marcadores sugeridos necesitan combinarse entre sí y/o evaluarse en combinación con ultrasonido Doppler para mejorar la precisión del diagnóstico. Hasta la fecha, se han sugerido varios marcadores, pero ninguno se acepta como biomarcador útil para el diagnóstico o la predicción clínica de la PE. Dos factores antiangiogénicos son prometedores, mostrando una asociación significativa con PE: tirosina cinasa 1 similar a fms soluble (sFlt) y endoglina soluble tal como se discute y se revisa en Baumann et al., Molecular aspects of medicine, abril de 2007;28 (2) :227-44, Grill et al., Reprod Biol Endocrinol 2009;7:70, Levine et al, . The New England journal of medicine, 12 de febrero de 2004;350 (7) :672-83 y en Papageorghiou et al., Current opinion in obstetrics & gynecology, diciembre de 2006;18 (6) :594-600.

Se han descrito algunos métodos de diagnóstico en la técnica anterior pero ninguno de ellos se ha usado aún con éxito en la práctica clínica a gran escala. Por ejemplo pueden mencionarse: el documento US 5.079.171 y el documento US 5.108.898, que dan a conocer que la PE, hipertensión inducida por el embarazo y la eclampsia pueden diagnosticarse identificando la presencia de un marcador de células endoteliales, fibronectina celular, en una muestra de sangre, plasma o suero de una mujer embarazada, por ejemplo, usando un inmunoensayo de tipo sándwich o de competición. La fibronectina celular se deriva de células endoteliales que se rompen o alteran durante el proceso patológico.

Varios estudios han mostrado una tasa de predicción alrededor del 50% particularmente para PE de aparición temprana, usando ultrasonido Doppler.

El marcador antiangiogénico sFlt es un posible marcador de PE ampliamente descrito cuando se usa en el segundo y tercer trimestre. Sin embargo, en el primer trimestre, los niveles de sFlt no cambian en comparación con los embarazos normales, haciéndolo menos útil para la predicción de PE. También se ha propuesto el factor de crecimiento placentario (PIGF) como marcador de PE, pero los datos disponibles muestran resultados contradictorios. La endoglina tiene una menor eficiencia de detección en la fase inicial del embarazo en comparación con los valores predictivos obtenidos cuando se usó la combinación sFlt/PIGF.

El documento US 5.238.819 da a conocer el diagnóstico de PE usando un ensayo para medir un factor mitogénico en la sangre. El factor mitogénico es un compuesto proteínico de aproximadamente 160 kDa y puede estimular la mitosis de fibroblastos. Se detecta su presencia detectando la absorción de timidina radiomarcada por células activadas mediante los sueros o el plasma de un sujeto con PE. Este marcador aparece una vez que ya se ha producido el daño en el lecho vascular materno, por tanto de manera tardía en el progreso de la enfermedad.

El documento WO 05/093413 (Yale University y Brigham and Womens Hospital) da a conocer un método de diagnóstico de PE grave en una mujer embarazada, que comprende medir el nivel de hemoglobina (Hb) libre en una muestra de líquido cefalorraquídeo.

Olsson et al. (Free Radical Biology and Medicine, vol. 48, 2010, 284-291) describen mediciones de HbA, HbF y A1M en plasma y orina. Se recogieron muestras de mujeres embarazadas justo antes del parto.

El documento WO 2008/098734 da a conocer el uso de HbF para el diagnóstico de preeclampsia.

Actualmente, no hay curas conocidas para la PE. La PE puede variar en su gravedad desde leve hasta potencialmente mortal. Una forma leve de PE puede mantenerse leve con reposo en cama y monitorización frecuente. Para casos de moderados a graves, es necesaria la hospitalización y medicación para la tensión arterial y se prescriben medicaciones anticonvulsivas para prevenir convulsiones. Si el estado se vuelve potencialmente mortal para la madre o el bebé, la única cura es terminar el embarazo lo que a menudo da como resultado un bebé de parto prematuro.

Claramente, la falta de terapia para PE asociada con la falta tradicional de capacidad de diagnosticarla hasta que la enfermedad ha progresado a una forma más grave, da lugar a la necesidad de enfoques novedosos para diagnosticar y tratar la PE, que es un problema significativo de salud pública.

Sumario de la invención

La invención, tal como se da a conocer en el presente documento, se basa en datos de estudios del perfil de proteínas y genes que han revelado un aumento en la síntesis y acumulación de hemoglobina fetal (HbF) en la luz vascular de placenta obtenida de mujeres con PE. Además, los inventores han encontrado que las concentraciones en suero y/o plasma materno de HbF y el eliminador de grupo hemo 1-microglobulina (A1M) se correlacionan con la gravedad de la enfermedad en embarazos a término.

Tal como se da a conocer en el presente documento, los inventores han encontrado sorprendentemente que la combinación de la razón de HbF y los niveles de A1M proporciona una predicción precisa extraordinaria y puede aplicarse como biomarcadores para la detección temprana de la PE.

La invención proporciona un método para predecir el riesgo de desarrollar preeclampsia, estando el método caracterizado por comprender las etapas de a) durante la semana de gestación 10-20 medir los niveles de A1M, HbA y HbF en una muestra de suero aislada de un sujeto, b) calcular la razón de HbF/Hb total (razón de HbF)

en el que se considera que el sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF medida supera 0, 0020 y el nivel de A1M medido supera 21 µg/ml.

La invención también proporciona el uso de A1M, HbA y HbF como marcadores de fase inicial durante la semana de gestación 10-20 para predecir la posibilidad de que un sujeto desarrolle preeclampsia, en el que se considera que el sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF/Hb total (razón de HbF) supera 0, 0020 y el nivel de A1M medido supera 21 µg/ml.

Descripción detallada de la invención

Estudios realizados por los inventores han indicado la implicación de estrés oxidativo inducido por Hb en el desarrollo de PE. Se han observado la regulación por incremento de los genes de HbF y la acumulación de la proteína en la placenta de sujetos con PE. La Hb libre, es decir fuera de los glóbulos rojos, y sus metabolitos grupo hemo e hierro inducen estrés oxidativo mediante la formación de especies reactivas de oxígeno (ERO) . El estrés oxidativo puede dañar la barrera hematoplacentaria, conduciendo a la fuga de HbF a la circulación materna y provoca eventualmente niveles elevados en el suero o plasma materno. De hecho, se encontró que los niveles aumentados de HbF, Hb total y marcadores para el estrés oxidativo, así como el eliminador de grupo... [Seguir leyendo]

1. Método para predecir el riesgo de desarrollar preeclampsia, estando el método caracterizado por comprender las etapas de a) durante la semana de gestación 10-20 medir los niveles de A1M, HbA y HbF en una muestra de suero aislada de un sujeto, b) calcular la razón de HbF/Hb total (razón de HbF) , en el que se considera que el sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF medida supera 0, 0020 y el nivel de A1M medido supera 21 µg/ml.

2. Método según la reivindicación 1, en el que la muestra es una muestra materna.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que se aísla la muestra de un sujeto en la semana de gestación 11-16.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se realiza la medición durante la semana de gestación 11-16.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se determina el nivel de HbF mediante ELISA.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se determina el nivel de A1M mediante radioinmunoensayo (RIA) o ELISA.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se mide la concentración de Hb total mediante ELISA o ELISA competitivo.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se analiza la probabilidad de desarrollar preeclampsia usando un análisis de regresión logística binaria con una prueba de la razón de verosimilitud (LR) .

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se considera que un sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si el nivel de HbF medido supera 0, 45 µg/ml, 0, 75 µg/ml, 1, 0 µg/ml, 1, 5 µg/ml o 2, 5 µg/ml.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se considera que un sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si el nivel de A1M medido supera 23 µg/ml, 25 µg/ml, 30 µg/ml, 35 µg/ml o 40 µg/ml.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se considera que un sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF supera 0, 0025, 0, 0060 ó 0, 01.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se considera que un sujeto tiene una probabilidad sumamente elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF supera 0, 0020, 0, 0025, 0, 0060 ó 0, 01 y el nivel de A1M supera 21 µg/ml, 23 µg/ml, 25 µg/ml, 30 µg/ml, 35 µg/ml o 40 µg/ml.

13. Uso de A1M, HbF y Hb total como marcadores de fase inicial durante la semana de gestación 10-20 para predecir la posibilidad de que un sujeto desarrolle preeclampsia, en el que se considera que el sujeto tiene una probabilidad elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF/HB total (razón de HbF) supera 0, 0020 y el nivel de A1M medido supera 21 µg/ml.

14. Uso según la reivindicación 13, en el que se miden los niveles de A1M, HbA y HbF en una muestra de suero aislada.

15. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 13-14, en el que se aísla la muestra de un sujeto durante la semana de gestación 11-16.

16. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 13-15, en el que se considera que un sujeto tiene una probabilidad sumamente elevada de desarrollar preeclampsia si la razón de HbF supera 0, 0020, 0, 0025, 0, 0060 ó 0, 01 y el nivel de A1M supera 21 µg/ml, 23 µg/ml, 25 µg/ml, 30 µg/ml, 35 µg/ml o 40 µg/ml.