Vacunas de péptidos para cánceres de pulmón que expresan polipéptidos TTK, URLC10 o KOC1.

Un péptido de los siguientes (A) o (B):

(A) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.

º: 67;

(B) un péptido de menos de 15 aminoácidos que tiene inducibilidad de linfocitos T citotóxicos en el que dicho péptido comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 67, en el que 1 o 2 aminoácidos están sustituidos, eliminados, o añadidos.

Vacunas de péptidos para cánceres de pulmón que expresan polipéptidos TTK, URLC10 o KOC1

Campo técnico

La presente invención se refiere al campo de las ciencias biológicas, más específicamente al campo de terapia contra el cáncer. En particular, se divulgan nuevos péptidos que son extremadamente eficaces como vacunas contra el cáncer y fármacos para tratar y prevenir tumores que contienen estos péptidos.

Técnica anterior

El cáncer de pulmón es uno de los tumores humanos más comúnmente mortales. Se han referido muchas alteraciones genéticas asociadas con el desarrollo y progresión del cáncer de pulmón. Los cambios genéticos pueden ayudar en los esfuerzos de pronóstico y en las predicciones de riesgo de metástasis o respuesta a ciertos tratamientos. (Mitsudomi T y col., (2000) Clin Cancer Res 6: 4055-63; Niklinski y col., (2001) Lung Cancer. 34 supl. 2: S53-8; Watine J. (2000) Bmj 320: 379-80) . El cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) es con diferencia la forma más común de cáncer de pulmón, que supone casi el 80 % de los tumores de pulmón (Society, A.C. Cancer Facts and Figures 2001, 2001) . La tasa global de supervivencia a 10 años sigue siendo de solo el 10 %, a pesar de los recientes avances en terapias de múltiples modalidades, porque la mayoría de los CPCNP no se diagnostican hasta fases avanzadas (Fr y , W.A. y col., (1999) Cancer. 86: 1867-76) . Aunque los regímenes de quimioterapia basados en platino se consideran estándares de referencia para el tratamiento de CPCNP, estos fármacos son capaces de prolongar la supervivencia de pacientes con CPCNP avanzado solo seis semanas aproximadamente (Non-small Cell Lung Cancer Collaborative Group, (1995) BMJ. 311: 899-909) . Se están investigando numerosas terapias diana para esta enfermedad, entre ellas inhibidores de la tirosina-cinasa; sin embargo, hasta la fecha se han obtenido resultados prometedores solo en un número limitado de pacientes y algunos receptores sufren reacciones adversas graves (Kris MG y col., (2002) Proc Am Soc Clin Oncol. 21: 292a (A1166) ) .

Se ha demostrado que los linfocitos T citotóxicos (LTC) CD8+ reconocen péptidos de epítopos derivados de antígenos asociados a tumores (AAT) presentes en moléculas MHC de clase I y lisan las células tumorales. Desde el descubrimiento de la familia MAGE como primer ejemplo de AAT, se han descubierto otros muchos AAT usando enfoques inmunológicos (Boon T. (1993) Int J Cancer 54: 177-80; Boon T. y col., (1996) J Exp Med 183: 725-9; van der Bruggen P y col., (1991) Science 254: 1643-47; Brichard V y col., (1993) J Exp Med 178: 489-95; Kawakami Y y col., (1994) J Exp Med 180: 347-52) . Algunos de ellos se encuentran ahora en desarrollo clínico como dianas de inmunoterapia. Entre los AAT descubiertos hasta ahora se incluyen MAGE (van der Bruggen P y col., (1991) Science 254: 1643-7) , gp100 (Kawakami Y y col., (1994) J Exp Med 180: 347-52) , SART (Shichijo S y col., (1998) J Exp Med 187:277-88) y NY-ESO-1 (Chen YT y col., (1997) Proc. Natl. Acd. Sci. USA, 94: 1914-8) . Por otra parte, algunos productos génicos mostraron estar sobreexpresados en cierta medida en las células tumorales que han demostrado ser reconocidas como dianas que inducen respuestas inmunitarias celulares. Entre estos productos génicos se incluyen p53 (Umano Y y col., (2001) Br J Cancer, 84:1052-7) , HER2/neu (Tanaka H y col., (2001) Br Cancer, 84: 94-9) , CEA (Nukaya I y col., (1999) Int. J. Cancer 80, 92-7) y similares.

Se ha mostrado en De Nooij y col. (2002) , International Journal of Cancer 103: 768-774, que los antígenos Ly-6 humanos, incluyendo Ly-6k, se pueden usar como marcadores moleculares para carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.

A pesar del importante avance en la investigación básica y clínica relativa a los AAT (Rosenberg SA y col., (1998) Nature Med, 4: 321-7; Mukherji B. y col., (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92: 8078-82: Hu X y col., (1996) Cancer Res, 56: 2479-83) , están disponibles solo un número muy limitado de ATT candidatos adecuados para el tratamiento de adenocarcinomas, tales como cáncer de pulmón. Los AAT que se expresan abundantemente en células cancerosas y cuya expresión está limitada a células cancerosas, serían candidatos prometedores como dianas inmunoterapéuticas.

Se ha mostrado repetidamente en ensayos con liberación de 51Cr que las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) estimuladas por péptidos de ciertos donantes sanos producen niveles importantes de IFN-! en respuesta al péptido, pero raramente ejercen citotoxicidad frente a células tumorales de una manera restringida por HLA-A24 o A0201 (Kawano K y col., (2000) Cancer Res 60: 3550-8; Nishizaka y col., (2000) Cancer Res 60: 4830-7; Tamura y col., (2001) Jpn J Cancer Res 92: 762-7) . Sin embargo, tanto HLA-A24 como HLA-A0201 son alelos HLA comunes en las poblaciones japonesa y caucásica (Date Y y col., (1996) Tissue Antigens 47: 93-101; Kondo A y col., (1995) J Immunol 155: 4307-12; Kubo RT y col., (1994) J Immunol 152: 3913-24; Imanishi y col., Proceeding of the eleventh International Histocompatibility Workshop and Conference Oxford University Press, Oxford, 1065 (1992) ; Williams F y col., (1997) Tissue Antigen 49: 129) . Así, los péptidos antigénicos de cánceres presentados por estos alelos HLA pueden ser especialmente útiles para el tratamiento de cánceres entre pacientes japoneses y caucásicos. Además, se sabe que la inducción de LTC de baja afinidad in vitro procede habitualmente del uso de péptido a una concentración elevada, lo que genera un alto nivel de complejos péptido/MHC específicos de células presentadoras de antígenos (CPA) , que activarán eficazmente estos LTC (Alexander-Miller y col., (1996) Proc Natl Acad Sci USA 93: 4102-7) .

Desarrollos recientes en tecnologías de micromatriz de ADNc han permitido las construcciones de perfiles extensos de expresión génica de células malignas en comparación con células normales (Okabe, H. y col., (2001) Cancer Res., 61, 2129-37; Lin YM y col., (2002) Oncogene, 21; 4120-8; Hasegawa S. y col., (2002) Cancer Res 62:7012-7) . Este enfoque permite una comprensión de la naturaleza compleja de las células cancerosas y de los mecanismos de la carcinogenia y facilita la identificación de genes cuya expresión está desregulada en tumores (Bienz M. y col., (2000) Cell 103, 311-320) .

Entre los transcritos identificados como regulados por incremento comúnmente en cánceres de pulmón, UCLC10 (ADNc para gen CO16 expresado diferencialmente; Acceso GenBank n.º: AB1055187; SEC ID N.ºs: 3, 4) es de especial interés para los autores de la presente invención, estando regulado por incremento específicamente en células tumorales de los tejidos de cáncer de pulmón en más del 80 % de los casos analizados. En cambio, el análisis de transferencia northern demostró que estos productos génicos no se encuentran en órganos vitales normales (véase el documento WO-2004/031.413) . Así, los péptidos inmunógenos derivados de URLC10 pueden encontrar utilidad en células tumorales citolíticas que expresan esos antígenos. La presente invención aborda estas y otras necesidades.

Sumario de la invención El gen URLC10 (ADNc para gen CO16 expresado diferencialmente) se ha identificado como regulado por incremento en cáncer de pulmón. El gen se identificó usando perfiles de expresión génica con una micromatriz de ADNc del genoma completo que contenía 23.040 genes. Según se expone anteriormente, la expresión de TTK, URLC10 y KOC1 está regulada específicamente por incremento en células tumorales en más del 80 % de los pacientes con cáncer de pulmón pero ausente en otros órganos vitales normales.

La presente invención se basa, al menos en parte, en la identificación de péptidos de epítopos de los productos génicos del gen (URLC10) que provocan linfocitos T citotóxicos (LTC) específicos de las moléculas correspondientes. Según se expone en detalle más adelante, se estimularon Células Mononucleares de Sangre Periférica (CMSP) de donante sano usando péptidos candidatos de unión a HLA-A*2402 derivados de URLC10.

A continuación se establecieron clones de LTC con citotoxicidad específica frente a las células diana positivas de HLA-A24 pulsadas con este péptido candidato. El análisis ulterior de los clones de LTC mostró la potente actividad citotóxica no solo frente a las células diana pulsadas con péptidos, sino también frente a células tumorales que expresan endógenamente URLC10. Además, un ensayo de inhibición de diana fría y un ensayo de bloqueo de anticuerpos revelaron que los clones de células LTC reconocieron específicamente el complejo peptídico MHC de clase I. Estos resultados demuestran que estos péptidos... [Seguir leyendo]

1. Un péptido de los siguientes (A) o (B) :

(A) un péptido de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 67;

(B) un péptido de menos de 15 aminoácidos que tiene inducibilidad de linfocitos T citotóxicos en el que dicho péptido comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 67, en el que 1 o 2 aminoácidos están sustituidos, eliminados, o añadidos.

2. El péptido de la reivindicación 1, en el que dicho péptido es el siguiente (A) o (B) :

(A) un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 67;

(B) un péptido que tiene inducibilidad de linfocitos T citotóxicos en el que dicho péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 67, en el que 1 o 2 aminoácidos están sustituidos, eliminados, o añadidos.

3. El péptido de la reivindicación 1 o 2, en el que el segundo aminoácido del extremo N-terminal es fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano.

4. El péptido de la reivindicación 1 o 2, en el que el aminoácido del extremo C-terminal es fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina.

5. Una composición farmacéutica que comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a

4.

6. Una composición farmacéutica para usar en tratar o evitar cáncer de pulmón, comprendiendo dicha composición uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Un exosoma que presenta en su superficie un complejo que comprende un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un antígeno HLA.

8. El exosoma según la reivindicación 7, en el que el antígeno HLA es HLA-A24.

9. El exosoma según la reivindicación 8, en el que el antígeno HLA es HLA-A2402.

10. Un procedimiento in vitro para inducir células presentadoras de antígenos que tienen una alta inducibilidad de linfocitos T citotóxicos que comprende la etapa de puesta en contacto de una célula presentadora de antígenos con un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

11. Un procedimiento in vitro para inducir linfocitos T citotóxicos mediante la puesta en contacto de un linfocito T con un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

12. El procedimiento para inducir células presentadoras de antígeno que tienen una alta inducibilidad de linfocitos T citotóxicos según la reivindicación 10, en el que dicho procedimiento comprende la etapa de transferencia de un gen que comprende un polinucleótido que codifica un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1a4a una célula presentadora de antígeno.

13. Un linfocito T citotóxico, inducido poniendo en contacto una célula T con un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que actúa específicamente contra células diana que presentan el péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 67.

14. Una célula presentadora de antígenos, que comprende un complejo formado entre un antígeno HLA y un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

15. La célula presentadora de antígenos de la reivindicación 14, inducida por el procedimiento de la reivindicación

10.

16. Una vacuna que comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un polinucleótido codificante del/de los mismo (s) como el ingrediente activo.

17. Una vacuna para usar en inhibir proliferación de células de cáncer de pulmón, en la que la vacuna comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un polinucleótido codificante del/de los mismo (s) como el ingrediente activo.

18. Una vacuna para usar en tratar o evitar cáncer de pulmón, en la que dicha vacuna comprende uno o más péptidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un polinucleótido que codifica dicho péptido o agente inmunológicamente activo.

19. La vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, o la composición farmacéutica de una cualquiera

de las reivindicaciones 5 o 6, en la que dicha vacuna o composición farmacéutica está formulada para administración a un sujeto cuyo antígeno HLA es HLA-A24.

20. La vacuna de la reivindicación 19, o la composición farmacéutica de la reivindicación 19, en la que dicha vacuna

o composición farmacéutica está formulada para administración a un sujeto cuyo antígeno HLA es HLA-A2402.

Sometidas a pulso con péptidos

No sometidas a pulso con péptidos Sometidas a pulso con péptidos

No sometidas a pulso con péptidos Sometidas a pulso con péptidos

No sometidas a pulso con péptidos A24LCL sometidas a pulso con péptidos

A24LCL no sometidas a pulso con péptidos

A24LCL sometidas a pulso con péptidos A24LCL no sometidas a pulso con péptidos