Purificación de mupirocina.

Procedimiento para purificar mupirocina, que comprende las etapas siguientes:

a) provocar o permitir la precipitación de mupirocina a partir de una disolución acuosa de mupirocina, estando el pH de la disolución durante la precipitación en el intervalo comprendido entre 2,0 y 6,0;

b) recuperar el precipitado;

c) disolver el precipitado recuperado en un disolvente orgánico; y opcionalmente

d) recuperar mupirocina a partir del disolvente.

Purificación de mupirocina.

Campo de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento para la purificación del antibiótico mupirocina (ácido pseudomónico A) .

Antecedentes de la invención Se sabe que las cepas de Pseudomonas fluorescens son capaces de biosintetizar en pequeñas cantidades, además de ácido pseudomónico A, otros antibióticos relacionados designados por las letras B-D [E. B. Chain, G. Mellows, J. Chem. Soc. Perkin Trans I. 318 (1977) ; J. P. Clayton et al., Tetrahedron Lett., 21, 881 (1980) ; P. J. O. Hanlon, N. H.

Rogers, J. Chem. Soc. Perkin Trans I. 2665 (1983) ]. Entre los antibióticos de ácido pseudomónico, desde un punto de vista terapéutico, el más valioso es el ácido pseudomónico A, que tiene un efecto inhibidor del crecimiento principalmente frente bacterias grampositivas.

Un procedimiento para aislar ácido pseudomónico A a partir del caldo de cultivo que contiene un complejo de antibióticos es la extracción líquido-líquido. Según la patente alemana no 2227739 y la patente US no 4.289.703, se añaden sales de bario solubles al caldo de fermentación, después las células del microorganismo con los agentes inactivos insolubles se separan mediante centrifugación, y finalmente los antibióticos se extraen con metil isobutil cetona (MIBK) . Los antibióticos se eliminan entonces del extracto de metil isobutil cetona mediante agua alcalina, y el extracto acuoso alcalino resultante se limpia mediante reextracción con metil isobutil cetona. El producto bruto obtenido se cromatografía, y se prepara un derivado de éster a partir del complejo de antibióticos de ácido pseudomónico y se purifica con cromatografía de capa fina preparativa. La forma ácida del antibiótico puro se obtiene mediante hidrólisis.

La patente belga no 870.855 se refiere a un procedimiento en el que el caldo de cultivo se extrae con metil isobutil

cetona, y del extracto se extrae la sustancia activa mediante disolución de hidrogenocarbonato de sodio. Los materiales insolubles en agua alcalina se separan mediante filtración, después el pH del filtrado se acidifica y se extrae con metil isobutil cetona. Finalmente, el ácido pseudomónico A se obtiene mediante la concentración del extracto y cristalización en una mezcla de metil isobutil cetona-n-heptano.

La patente US no 4.222.942 se refiere a un procedimiento para el aislamiento de mupirocina extrayendo una disolución de preparación de mupirocina bruta en un disolvente orgánico inmiscible con agua con un medio acuoso, reduciendo el pH de dicha disolución acuosa, y extrayendo la disolución con un disolvente orgánico polar inmiscible con agua, y añadiendo después un diluyente que es suficientemente no polar para reducir la polaridad de, pero que es miscible con, dicho disolvente orgánico polar para efectuar la cristalización de mupirocina. Las etapas de este esquema de reacción son variadas y, como consecuencia, el esquema requiere una gran cantidad de disolvente.

La patente US no 6.245.921 describe un procedimiento para el aislamiento de mupirocina, que comprende extraer un caldo de cultivo acidificado usando un hidrocarburo alifático clorado o acetato de isobutilo, de manera que se obtiene un extracto que contiene mupirocina; y purificando la mupirocina a partir de dicho extracto distribuyendo el extracto 45 entre una fase acuosa y una fase orgánica que comprende al menos un disolvente orgánico, y evaporando el disolvente orgánico.

Ninguno de los procedimientos anteriores son satisfactorios desde un punto de vista comercial y ecológico. En consecuencia, existe todavía la necesidad de un nuevo procedimiento para la purificación de mupirocina, que esté

libre de al menos algunas de las desventajas de los procedimientos conocidos, y cuya aplicación, a escala de producción, puede dar como resultado un rendimiento elevado de la recuperación del antibiótico mencionado anteriormente.

La presente invención proporciona un procedimiento para la purificación de la mupirocina, que satisface al menos 55 algunos de los objetivos definidos anteriormente en cuanto a que sea económicamente sensato y, preferentemente, menos perjudicial ecológicamente, y dé como resultado un rendimiento elevado de mupirocina con una pureza elevada. El procedimiento comprende precipitar mupirocina a partir de una disolución acuosa de mupirocina, y disolver el precipitado en un disolvente orgánico.

La presente invención se refiere a un procedimiento para purificar mupirocina, que comprende las etapas siguientes:

a) provocar o permitir la precipitación de mupirocina a partir de una disolución acuosa de mupirocina; b) recuperar el precipitado; c) disolver el precipitado recuperado en un disolvente orgánico; y opcionalmente

d) recuperar mupirocina a partir del disolvente.

La expresión “mupirocina” comprende mupirocina como se define en cualquiera de las referencias mencionadas anteriormente, así como sus derivados de origen natural y sintéticos. La expresión comprende la forma ácida y sus sales, tales como la sal cálcica, así como solvatos y formas polimórficas de éstos.

En una forma de realización de la invención, la disolución de mupirocina es caldo de fermentación, tal como caldo aclarado, tal como aclarado mediante centrifugación o filtración. La fuente del caldo de fermentación no es crucial, y el caldo se puede obtener como se describe en la técnica anterior, por ejemplo como se describe en las referencias mencionadas anteriormente, en los documentos US no 3.977.943, no 4.071.536 y no 4.289.703, WO 00/46389 o WO 03/000910. Opcionalmente, el caldo se puede concentrar antes de precipitar la mupirocina. Se pueden usar disoluciones distintas de caldos de fermentación, por ejemplo una disolución que resulta de la síntesis química de mupirocina o un derivado de la misma.

La mupirocina se puede precipitar a partir de la disolución acuosa añadiendo un ácido, tal como un ácido seleccionado de entre el grupo constituido por ácido acético; ácido cítrico; ácido sulfúrico; y ácido clorhídrico. Cuando se usa un ácido, el pH durante la precipitación está convenientemente en el intervalo comprendido entre 2, 0 y 6, 0, preferentemente en el intervalo comprendido entre 3, 5 y 5, 0, y lo más preferido en el intervalo comprendido entre 4, 2 y 4, 6. En una forma de realización, la disolución se deja agitar hasta que ha precipitado mupirocina, tal como durante un período de 10-40 minutos.

El precipitado que contiene mupirocina se puede recuperar mediante centrifugación o filtración, prefiriéndose la centrifugación. La centrifugación se debería llevar a cabo en condiciones tales que se forme un gel, por ejemplo, centrifugando durante 5-30 minutos a 5000-15000 g, o en una centrifugadora continua a 5000-15000 g.

En una forma de realización de la invención, el precipitado recuperado se disuelve en un disolvente orgánico polar, sustancialmente inmiscible con agua. Como disolvente, se puede usar una cetona, por ejemplo que tiene la fórmula alquilo-C (=O) -alquilo, tal como metil isobutil cetona; un éster, por ejemplo, que tiene la fórmula alquilo-C (=O) -Oalquilo, tal como acetato de etilo; un alcanol, por ejemplo que tiene la fórmula alquilo-OH, tal como n-butanol; o una mezcla que comprende cualquiera de éstos. En la presente memoria, la expresión “alquilo”, cuando se refiere a alcoholes, se refiere a grupos de hidrocarburos alifáticos de más de cuatro carbonos, e incluye un grupo de hidrocarburo alifático de cadena lineal o ramificada que está saturado o insaturado, y, en otros disolventes, la expresión “alquilo” se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático de cadena lineal o ramificada que está saturado o insaturado y tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6 o más átomos de carbono.

Actualmente se prefiere que el disolvente sea metil isobutil cetona (MIBK) pura. Esto es, el disolvente debería comprender más de 90% (tal como más de 92%, más de 94%, más de 96%, o incluso más de 98% o 99%) de MIBK. Si es necesario, la mupirocina se puede recuperar del disolvente, tal como mediante cristalización, opcionalmente después de la eliminación del agua a partir del disolvente.

En otra forma de realización, el procedimiento de la invención comprende una o más etapas adicionales, a fin de obtener un antibiótico más puro. Tales etapas se pueden aplicar antes de la etapa a) y/o después de la etapa d) , y/o entre las etapas a) y b) y/o entre las etapas b) y c) y/o después de la etapa c) , y comprenden etapas seleccionadas de entre el grupo constituido por: una etapa de decoloración; una etapa para eliminar componentes hidrófilos; una etapa de concentración; una etapa de evaporación;... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para purificar mupirocina, que comprende las etapas siguientes:

a) provocar o permitir la precipitación de mupirocina a partir de una disolución acuosa de mupirocina, estando el pH de la disolución durante la precipitación en el intervalo comprendido entre 2, 0 y 6, 0;

b) recuperar el precipitado;

c) disolver el precipitado recuperado en un disolvente orgánico; y opcionalmente d) recuperar mupirocina a partir del disolvente.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque se hace precipitar mupirocina añadiendo un ácido,

tal como un ácido seleccionado de entre el grupo constituido por ácido acético; ácido cítrico; ácido sulfúrico; y ácido clorhídrico.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el pH de la disolución durante la precipitación está en el intervalo comprendido entre 3, 5 y 5, 0. 20

4. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el pH de la disolución durante la precipitación está en el intervalo comprendido entre 4, 2 y 4, 6.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la disolución de mupirocina 25 es caldo de fermentación aclarado.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el precipitado que contiene mupirocina se recupera en la etapa b) mediante centrifugación o filtración.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que, en la etapa c) , el precipitado recuperado orgánico se disuelve en un disolvente orgánico polar, inmiscible o moderadamente soluble en agua.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el disolvente orgánico es una cetona; un éster; o un alcanol; o una mezcla que comprende cualquiera de éstos. 35

9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el disolvente orgánico es metil isobutil cetona pura.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la mupirocina se recupera a partir 40 del disolvente mediante cristalización.

11. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además una o más etapas adicionales seleccionadas de entre el grupo constituido por una etapa de decoloración; una etapa de eliminación de componentes hidrófilos; una etapa de concentración; una etapa de evaporación; una etapa de aclarado; una etapa 45 de eliminación del agua; una etapa de secado; una etapa de filtración; una etapa de extracción; y una etapa de cristalización.