Péptidos que imitan epítopos protectores sin reactividad cruzada en seres humanos del polisacárido capsular de meningococo del grupo B.

Mimético molecular de un epítopo único de Neisseria meningitidis serogrupo B (MenB),

en el que dicho mimético consiste en un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO 1 ó 3.

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se encuentra en el campo de los patógenos bacterianos, en concreto la invención se refiere a péptidos que inducen actividad funcional contra Neisseria meningitidis serogrupo B y también carecen de actividad autoinmunitaria. La invención también se refiere a métodos de obtención y utilización de los péptidos de la invención.

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA

Neisseria meningitidis es una bacteria encapsulada clasificada en diferentes serogrupos en base a la composición química y a las características inmunitarias del polisacárido capsular (CP; 1) . Los aislados humanos están casi totalmente representados por 5 serogrupos (A, B, C, Y y W135) . No se dispone en general de ninguna vacuna para prevenir las infecciones causadas por cepas del serotipo B, que a menudo representan más que la mitad de los casos de enfermedad meningocócica en los países desarrollados (2) . Los principales obstáculos para el desarrollo de vacunas basadas en la cápsula son la escasa inmunogenicidad del polisacárido capsular del grupo B (MenB CP) , incluso después de la conjugación a proteínas, y las preocupaciones sobre la inducción de autoanticuerpos (3) . Estas características están probablemente relacionados con la identidad estructural entre el polisacárido capsular de Neisseria meningitidis grupo B y el ácido polisiálico humano (PSA) , que consisten en ácido N-acetilneuramínico unido mediante enlace alfa 2-8. Resulta obvio que la producción de una vacuna segura y eficaz contra MenB sería particularmente deseable. Los estudios que utilizan anticuerpos monoclonales han definido dos clases diferentes de epítopos capsulares presentes de forma natural en la superficie meningocócica (4, 5, 6) . Una clase presenta reactividad cruzada con el PSA humano, mientras que la otra no presenta reactividad cruzada y es protectora. Moe et al. (FEMS Immunol Med Microbiol, 1999, 26 (3-4) :209-26) describen el uso de anticuerpos monoclonales anticapsulares para identificar miméticos moleculares de MenB CP a partir de bibliotecas de péptidos de presentación en fagos.

Por lo tanto, es un objeto de la invención proporcionar más y mejores composiciones inmunogénicas para proporcionar inmunidad contra Neisseria meningitidis. Es un objeto adicional de la invención proporcionar péptidos que imiten las características antigénicas de los epítopos capsulares presentes de forma natural en la superficie meningocócica que no presenten reactividad cruzada y sean protectores.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Los autores de la invención han identificado péptidos que imitan las características antigénicas de epítopos MenB CP que no presentan reactividad cruzada con el PSA humano ("epítopos protectores sin reactividad cruzada en seres humanos") . Por lo tanto, la presente invención se refiere a miméticos peptídicos de epítopos únicos de MenB CP. Los anticuerpos inducidos por estos péptidos no se unen al ácido polisiálico en los tejidos del hospedador como se determina mediante los ensayos de autorreactividad descritos en el presente documento, y por tanto proporcionan un método seguro y eficaz para la prevención frente a MenB. Además, la presente invención se refiere a ácidos nucleicos que codifican los miméticos peptídicos de la presente invención y a métodos para utilizarlos en la inmunización con ácidos nucleícos.

Por consiguiente, en una forma de realización, la presente invención se refiere a un mimético molecular de un epítopo de MenB, en la que dicho mimético es un péptido que no presenta reactividad cruzada con el PSA humano. El péptido puede tener una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO 1 y 3. En otra forma de realización, la presente invención se refiere a ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos de la invención. Preferentemente, la presente invención se refiere a ácidos nucleicos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NO 18, 19, 22 y 23.

En otra forma de realización, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas tales como vacunas, que comprenden los polipéptidos o ácidos nucleicos de la presente invención en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

La invención también proporciona un método para proteger a un paciente de la infección por MenB, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica de la invención.

En otra forma de realización, la presente invención se refiere a un polipéptido o ácido nucleico de la presente invención, para uso en medicina.

En otra forma de realización, la presente invención se refiere al uso de un polipéptido o ácido nucleico de la presente invención, en la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmunitaria en un paciente en el

que la respuesta inmunitaria protege, por ejemplo, frente a la infección por MenB.

En otra forma de realización, la presente invención se refiere al uso de un ácido nucleico de la presente invención como sensibilizador y al uso de un polipéptido de la presente invención como refuerzo, en la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmunitaria en un paciente en la que la respuesta inmunitaria protege, por ejemplo, frente a la infección por MenB.

Polipéptidos Los polipéptidos de la invención pueden comprender las secuencias de aminoácidos SEQ ID NO 1 ó 3.

Los polipéptidos descritos en el presente documento pueden comprender secuencias de aminoácidos que tienen identidad de secuencia con las secuencias de aminoácidos descritas en los ejemplos. Dependiendo de la secuencia concreta, el grado de identidad de secuencia es preferentemente superior a un 50% (por ejemplo, un 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99% o más) . Estos polipéptidos incluyen homólogos, ortólogos, variantes alélicas y mutantes. La identidad entre polipéptidos se determina preferentemente mediante el algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman como se aplica en el programa MPSRCH (Oxford Molecular) , utilizando una búsqueda de huecos afines con parámetros de penalización por apertura de hueco = 12 y penalización por extensión de hueco = 1.

Estos polipéptidos pueden incluir, en comparación con las SEQ ID NO 1 -13, uno o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, etc.) sustituciones de aminoácidos conservadoras, es decir, sustituciones de un aminoácido con otro que tiene una cadena lateral relacionada. Los aminoácidos codificados genéticamente se dividen generalmente en cuatro familias: (1) ácidos, es decir, aspartato, glutamato; (2) básicos, es decir, lisina, arginina, histidina; (3) no polares, es decir, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano; y (4) polares sin carga, es decir, glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina, tirosina. La fenilalanina, el triptófano y la tirosina se clasifican a veces conjuntamente como aminoácidos aromáticos. En general, la sustitución de aminoácidos individuales dentro de estas familias no tiene un efecto importante sobre la actividad biológica. Además, los polipéptidos pueden tener una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6 etc.) deleciones de aminoácidos únicas con respecto a una secuencia de referencia. Además, los polipéptidos pueden incluir una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6 etc.) inserciones (por ejemplo, cada una de 1, 2 ó 3 aminoácidos) con respecto a una secuencia de referencia.

Los polipéptidos descritos en el presente documento pueden comprender fragmentos de las SEQ ID NO 1 a 13. Los fragmentos deben comprender al menos n aminoácidos consecutivos de las secuencias y, dependiendo de la secuencia concreta, n es 5 o más (por ejemplo, 6, 7 u 8) .

Los polipéptidos de la invención pueden prepararse de muchas maneras, por ejemplo, mediante síntesis química (en su totalidad o en parte) , mediante digestión de polipéptidos más largos utilizando proteasas, mediante la traducción a partir de ARN, mediante purificación a partir de cultivo celular (por ejemplo, de expresión recombinante) , etc. Un método preferente para la producción de péptidos <40 aminoácidos de longitud implica la síntesis química in vitro [7, 8]. Resulta especialmente preferente la síntesis de péptidos en fase sólida, tal como los métodos basados en la química tBoc o Fmoc [9]. También puede utilizarse, en parte o en su totalidad, la síntesis enzimática [10]. Como alternativa a la síntesis química, puede utilizarse la síntesis biológica, por ejemplo, pueden producirse polipéptidos mediante traducción. Esto puede llevarse a cabo in vitro o in vivo. Los métodos biológicos están limitados en general a la producción de polipéptidos basados... [Seguir leyendo]

1. Mimético molecular de un epítopo único de Neisseria meningitidis serogrupo B (MenB) , en el que dicho mimético consiste en un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO 1 ó 3. 5

2. Ã?cido nucleico que codifica un polipéptido según la reivindicación 1.

3. Ã?cido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO 18, 19, 22 ó 23.

4. Composición de vacuna que comprende una molécula peptídica o de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

5. Composición de vacuna según la reivindicación 4, en la que la molécula peptídica tiene la secuencia de

aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 ó 3. 15

6. Composición de vacuna según la reivindicación 4 en la que dicha molécula peptídica está unida covalentemente a una molécula transportadora.

7. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 4-6 que comprende adicionalmente un adyuvante.

8. Composición de vacuna según la reivindicación 4, en la que la molécula de ácido nucleico tiene la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 18, 19, 22 ó 23.

9. Composición farmacéutica que comprende el polipéptido según la reivindicación 1 o el ácido nucleico según la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

10. Polipéptido según la reivindicación 1 o ácido nucleico según la reivindicación 2 o la reivindicación 3 para uso en medicina.

11. Uso del polipéptido según la reivindicación 1 o el ácido nucleico según la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en la fabricación de un medicamento para proteger a un paciente de la infección por MenB.

12. Uso según la reivindicación 11 en el que el ácido nucleico según la reivindicación 2 o la reivindicación 3 se utiliza 35 como sensibilizador y el polipéptido según la reivindicación 1 se utiliza como refuerzo.