Péptidos de survivina como vacunas contra el cáncer.

Una composición que comprende un péptido que consiste en la secuencia de SEQ ID NO:6.

(DLAQMFFCFKELEGW).

Péptidos de survivina como vacunas contra el cáncer

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere generalmente a vacunas contra el cáncer y más específicamente a un péptido de survivina modificado para su uso como vacuna contra el cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La survivina es una proteína intracelular de 16, 5 kDa que pertenece a la familia de las proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP) . La survivina actúa en sintonía con el aparato del huso mitótico para regular la división celular. Se expresa en ciertas células durante la fase G2/M del ciclo celular y se asocia con el centro 15 organizador de microtúbulos del huso durante esta fase de progresión del ciclo celular [Zhao J, y col. (2000) J Cell Sci, 113:4363-71; Li F y col. (1998) Nature, 396:580-4; Fortugno P y col. (2002) J Cell Sci, 115:575-85]. También se ha mostrado que la survivina modula la función de ciertas caspasas, inhibiendo directamente la apoptosis [Tamm I y col. (1998) Cancer Res, 58:5215-20; Conway y col. (2000) Blood 95:1435-42; Shin S y col. (2001) Biochemistr y , 40:1117-23]. Además, la survivina inhibe el complejo de ciclina D/cdk4 [Fukuda S, Pelus LM. (2002) Cell Cycle,

1 (5) :322-6], permitiendo la progresión del ciclo celular. Así, la survivina funciona en funciones críticas en varios sitios celulares diferentes para regular el ciclo celular y para inhibir la muerte de células apoptósicas.

La survivina se expresa en exceso durante la fase G (2) /M del ciclo celular en la mayoría de las células cancerosas y es uno de los antígenos del cáncer más específicos identificados hasta la fecha. Se expresa en un gran porcentaje de tumores y raramente es detectable en tejidos de adultos normales [Overwijk WW, y col. (1998) J Exp Med, 188:277-86; Adida C y col. (1998) Am J Pathol 152:43-49]. Aunque la survivina se expresa en algunos casos dentro de las células precursoras y progenitoras hematopoyéticas CD34 (+) que se han estimulado por factores de crecimiento hematopoyéticos, generalmente no se presenta sobre la superficie de estas células [Fukuda S, Pelus LM. (2002) Cell Cycle. 1 (5) :322-6].

Además de muchos otros cánceres, la expresión de survivina se produce comúnmente en gliomas malignos en los que está asociada a una mal pronóstico [Kajiwara Y, y col. (2003) Cancer 97:1077-1083; Sasaki T, (2002) Acta Neuropathol (Berl) 104:105-109; Chakravarti A, y col. (2002) J Clin Oncol, 20:1063-8]. Se han investigado los efectos antitumorales de una vacuna de células dendríticas derivadas de la médula ósea de survivina xenógena contra gliomas GL261 murinos [Ciesielski M. J. y col., (2006) Cancer Immunology, vol. 55, nº 12: 14911503]. Como la survivina se expresa por muchos tipos de cáncer diferentes, y por consiguiente, su uso como una diana de vacuna tumoral tiene amplias implicaciones para la terapia con vacunas contra el cáncer. Sin embargo, estudios previos no han identificado péptidos de survivina que sean eficaces cuando se administran tras la exposición al tumor. Además, están disponibles poco datos referentes a la posible eficacia de los péptidos de survivina en seres humanos. Por tanto, hay una necesidad continua de péptidos de survivina que puedan provocar fuertes respuestas inmunitarias celulares para su uso como inmunoterapias contra el cáncer anti-survivina.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona composiciones para tratar cánceres que expresan survivina y se desvelan procedimientos para las mismas. Las composiciones comprenden miméticos de péptidos de survivina que contienen una alteración de cisteína a metionina en la posición de aminoácido 57 de la secuencia de proteínas de survivina no mutada. Las composiciones de la invención se definen en las reivindicaciones 1-10. También se desvelan péptidos que tienen 9-23 aminoácidos de longitud y la secuencia de SEQ ID NO:4

(ENEPDLAQMFFCFKELEGWEPDD) o un fragmento de la misma, en la que el fragmento comprende al menos 9 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:4, y en la que el fragmento también comprende la secuencia de SEQ ID NO:5 (QMFFCF) . Los péptidos pueden estimular una respuesta inmunitaria mediada por células humanas mejorada contra células cancerosas humanas que expresan survivina, en comparación con la respuesta inmunitaria mediada por células provocada por péptidos que tienen la secuencia de survivina no mutada. También se demuestra que los 55 péptidos confieren supervivencia prolongada en un modelo de ratón de glioma.

El procedimiento desvelado comprende administrar a un individuo diagnosticado con o que se sospecha que tiene un cáncer que expresa survivina una composición que comprende un péptido de la invención de forma que se inhiba el crecimiento del cáncer.

También se proporciona una población sustancialmente purificada de células dendríticas de mamífero que se cargan con un péptido de la invención, como se define en la reivindicación 11.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS 5

La Figura 1 proporciona un resumen de secuencias de péptidos no mutadas y alteradas utilizadas en la presente invención.

La Figura 2 proporciona una comparación gráfica de secuencias de péptidos no mutadas y alteradas que muestran epítopes de la clase I del MHC (HLA-A*0201) en recuadros. Una secuencia común a todos los péptidos de la invención (QMFFCF) está en cursiva en Survivina-53-67/57M. La Figura 3 proporciona una representación gráfica de datos de pruebas in vitro obtenidos de ensayos de unión de péptidos de survivina.

La Figura 4 proporciona una representación gráfica de datos obtenidos de estudios de supervivencia intracraneal en un modelo murino GL261 que utiliza péptidos alterados basándose en los aminoácidos de survivina 53-67. Los péptidos se administraron usando vacunas de células dendríticas (CD) cargadas con péptido o como conjugados de hemocianina de lapa californiana (KLH) . La Figura 5 proporciona una representación fotográfica de análisis de imágenes por resonancia magnética de un ratón tratado según el procedimiento de la invención (panel derecho) y un control negativo (panel izquierdo) . La Figuras 6A, 6B y 6C proporcionan representaciones gráficas de los datos de un análisis de propiedades de unión de HLA-A*0201 de péptidos de survivina. Para obtener los datos resumidos en la Figura 6A y 6B, se usaron epítopes de péptidos de survivina en ensayos de desplazamiento competitivo de péptidos de la clase I del MHC. CI50 representa el 50 % de concentración de inhibición del péptido de survivina requerido para desplazar un ligando de la clase I del MHC humano conocido fluorescentemente marcado (HPV18-27) . Los péptidos de control positivo (Flu y gp100) representan ligandos de la clase I del MHC inmunogénicos conocidos. Los datos representan fluorescencia media ± E.E.M. de muestras por triplicado. La Figura 6C proporciona una representación gráfica de datos para la unión específica del pentámero HLA-A*0201 de epítopes del péptido de survivina no mutada y alterada.

La Figura 7 proporciona una representación fotográfica de la separación electroforética de la amplificación por RT-PCR de ARNm de survivina de especímenes de glioma humano. Se aisló ARN de lisados celulares de gliomas humanos y se amplificó usando RT-PCR. La banda de survivina de tamaño esperado se detectó abundantemente en 11/12 muestras, además de controles (M) . La banda de control se derivó de PCR de un ADNc de survivina.

La Figura 8 proporciona una representación gráfica de datos obtenidos de la estimulación de linfocitos T ex vivo mediante células dendríticas autólogas cargadas con survivina expuestas a un glioma U87 no coincidente alógeno (linfocitos T de HLA-A*03 frente a glioma HLA-A*02; Alo-discordante) . La Figura 9 proporciona una representación gráfica de datos obtenidos de la estimulación de linfocitos T ex vivo mediante células dendríticas autólogas cargadas con survivina expuestas a un glioma U87 alógeno (HLA-A*02;

Alo-coincidente) . La Figura 10 proporciona una representación gráfica de un segundo caso en el que se realizó la estimulación de linfocitos T ex vivo mediante células dendríticas autólogas cargadas con survivina expuestas al glioma U87 alógeno (HLA-A*02; Alo-coincidente) . La Figura 11 proporciona una representación gráfica de datos obtenidos de la estimulación de linfocitos T ex

vivo mediante células dendríticas autólogas cargadas con survivina expuestas a glioma autólogo (HLA-A*03, HLA-A*29; Auto) . La Figura 12 proporciona una representación gráfica de datos obtenidos de la estimulación de linfocitos T ex vivo mediante células dendríticas autólogas cargadas con survivina expuestas al glioma DS-GBM alógeno... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende un péptido que consiste en la secuencia de SEQ ID NO:6.

(DLAQMFFCFKELEGW) . 5

2. El péptido de la reivindicación 1, en el que el péptido está conjugado con un transportador de proteína inmunogénica.

3. La composición de la reivindicación 1, en la que la composición comprende además células 10 dendríticas que se han incubado con el péptido.

4. La composición de la reivindicación 1, que comprende además un adyuvante.

5. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para su uso en un procedimiento de

inhibición del crecimiento de células cancerosas en un individuo diagnosticado con o que se sospecha que tiene cáncer, en la que las células cancerosas expresan survivina.

6. Una composición para su uso según la reivindicación 5, en la que el individuo se ha diagnosticado con un glioma, o en la que el individuo se ha diagnosticado con linfoma. 20

7. Una composición para su uso según la reivindicación 5, en la que el péptido está conjugado con una proteína transportadora inmunogénica.

8. Una composición para su uso según la reivindicación 5, en la que el péptido en la composición está 25 presente en células dendríticas que han captado el péptido.

9. Una composición para su uso según la reivindicación 5, en la que las células cancerosas están presentes en un tumor, preferentemente en la que la composición se administra posterior a la resección del tumor.

10. Una composición para su uso según la reivindicación 5, en la que la administración de la composición estimula una respuesta inmunitaria mediada por células contra survivina en el individuo.

11. Una población sustancialmente purificada de células dendríticas de mamífero, en la que las células dendríticas se han incubado con un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, de forma que el péptido 35 es captado por las células dendríticas.