Nuevo biomarcador para diagnóstico, predicción y/o pronóstico de septicemia y usos del mismo.

Método para la predicción, pronóstico y/o diagnóstico de septicemia,

septicemia grave, choque septicémico, o MODS en un sujeto de prueba que comprende:

(a) medir el nivel de transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT1) y TREM-1 en una muestra de sangre o suero extraída de dicho sujeto de prueba, y

(b) comparar dicho nivel de transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT1) y TREM-1 con un nivel de referencia de transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT1) y TREM-1 obtenido de una muestra de un sujeto sano, en la que

(c) un nivel de expresión reducida de sTLT-1 y una expresión aumentada de TREM-1 en la muestra del sujeto de prueba en comparación con los de una muestra de un sujeto sano o sin septicemia indica que el sujeto de prueba tiene o corre el riesgo de tener septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS.

Nuevo biomarcador para diagnóstico, predicción y/o pronóstico de septicemia y usos del mismo Campo de la invención

La invención se refiere a biomarcadores a base de proteínas y/o péptidos y a moléculas que se unen específicamente a los mismos para su uso en diagnóstico, pronóstico y predicción de enfermedad o determinación de un estado particular en un sujeto. En particular, se abarcan en la invención determinados péptidos o proteínas como biomarcadores para septicemia y métodos para el uso de los mismos en diagnóstico, pronóstico y/o predicción de la aparición de septicemia incluyendo métodos que implican determinar una expresión aumentada, disminuida o alterada de dichos biomarcadores en una muestra de un sujeto.

Antecedentes a la invención

En muchas enfermedades y estados, un desenlace positivo de tratamiento y/o profilaxis se correlaciona fuertemente con un diagnóstico temprano y/o exacto de la enfermedad o el estado. Sin embargo, a menudo no existen métodos eficaces de diagnóstico temprano y por tanto los tratamientos a menudo se administran demasiado tarde, de manera inapropiada o a individuos que no se beneficiarán de los mismos. Como resultado, muchos fármacos que pueden ser beneficiosos para algunos pacientes pueden funcionar mal, no funcionar en absoluto o presentar un efecto adverso en otros pacientes. Por tanto, existe la necesidad de estrategias innovadoras que permitan la detección, predicción, pronóstico, diagnóstico y tratamiento tempranos de enfermedades y otros estados biológicos. También existe la necesidad de determinar la capacidad, o incapacidad, de un paciente a tolerar medicamentos o tratamientos.

La septicemia se denomina más comúnmente infección del torrente sanguíneo o toxemia. Es la presencia de bacterias (bacteriemia), organismos infecciosos o sus toxinas en la sangre u otros tejidos del cuerpo. La septicemia se produce a menudo en pacientes que padecen síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS), como resultado, por ejemplo, de intervención quirúrgica, traumatismo, quemaduras, pancreatitis y otros acontecimientos no infecciosos que provocan que se produzca una inflamación. El SIRS combinado con una infección se denomina septicemia y puede producirse en muchos grados diferentes de gravedad. La infección puede producirse simultáneamente con la aparición del SIRS, por ejemplo, debido a la infección de una herida o traumatismo o puede producirse más tarde debido a la presencia latente de un organismo infeccioso. La septicemia puede asociarse con síntomas clínicos de enfermedad sistémica (generalizada), tales como fiebre, escalofríos, malestar, hipotensión arterial y cambios del estado mental. La septicemia puede ser una situación grave, a menudo una enfermedad potencialmente mortal que requiere asistencia urgente y extensa. El tratamiento depende del tipo de infección, pero habitualmente empieza con antibióticos o medicamentos similares.

Ya que la septicemia puede ser el resultado de una infección por una amplia variedad de organismos, es un estado que es particularmente difícil de predecir y diagnosticar lo suficientemente temprano para una intervención eficaz. Es una respuesta inflamatoria en exceso y sin control en un individuo que resulta habitualmente de una respuesta inapropiada del sistema inmunitario del individuo a un organismo patógeno. Además, pueden no existir números significativos de organismos en sitios accesibles o en líquidos corporales del individuo afectado, aumentando por tanto la dificultad de diagnóstico. Por tanto, existe la necesidad de identificar biomarcadores que indiquen el riesgo o la aparición temprana de septicemia, independientemente del agente causante, para permitir una intervención temprana y eficaz. La diferenciación entre pacientes que corren el riesgo de desarrollar septicemia y aquéllos que no, también ayudará en el manejo del estado patológico. En particular, la capacidad de distinguir SIRS de septicemia en un paciente es altamente deseable, por ejemplo en un entorno clínico para pacientes que se someten a intervención quirúrgica o trasplante, que padecen traumatismo, etc. que tienen que monitorizarse durante y/o tras su estancia en el hospital.

Por tanto, existe una necesidad inmediata de la identificación de biomarcadores que puedan medirse y sean específicos para el estado, e indicativos del riesgo de la progresión a, o aparición temprana de, septicemia así como métodos para usar dichos marcadores en selección.

Los biomarcadores son indicadores biológicos que señalan un estado fisiológico cambiado debido a una enfermedad o intervención terapéutica. Se ha demostrado que determinadas sustancias, incluyendo proteínas y péptidos, se expresan de manera diferencial en muestras de tejido y líquido corporal con enfermedad en determinados estados tales como septicemia, en comparación con muestras de tejido y líquido corporal normales. Por tanto, proteína(s)/péptidos(s) expresado(s) de manera diferencial presente(s) en (o ausente(s) de) muestras con enfermedad de un paciente, mientras que está(n) ausente(s) de (o presente(s) en) tejido normal, es/son biomarcador(es) candidato(s) para esa enfermedad o estado.

A menudo un solo biomarcador individual puede ser insuficiente para el diagnóstico exacto de una enfermedad o estado, especialmente uno tan complejo como la septicemia. Como resultado existe la necesidad continua de la identificación de biomarcadores que puedan usarse para identificar u obtener el perfil del estado en diversos estadios en su patología.

El único biomarcador de diagnóstico aprobado por la FDA actualmente disponible para distinguir septicemia de causas no infecciosas de síndromes de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) es la procalcitonina (PCT). Sin embargo, el rendimiento de diagnóstico y pronóstico de PCT es bastante bajo tal como se mostró en un informe reciente de Tang y colaboradores (Tang B.M.J. et al., The Lancet vol. 7: pág. 21-217, 27), que indica que la 5 prueba de procalcitonina no puede distinguir con exactitud septicemia de SIRS en pacientes adultos con enfermedad crítica.

La proteína C reactiva es un marcador ampliamente usado adicional para diagnosticar septicemia, pero no puede distinguir entre septicemia y SIRS sin infección.

El documento WO 25/7148 describe un método de diagnóstico de enfermedad de origen bacteriano o fúngico 1 en un sujeto, método que comprende la etapa de medir el nivel de la forma soluble de TREK-1 (sTREM-1) en una muestra biológica obtenida de dicho sujeto.

Lu et al. (26, Hybridoma, vol. 25, n.° 1, páginas 2-26) describe la preparación y caracterización de anticuerpo monoclonal frente a la proteína transcrito similar a TREM-1 (TLT-1).

El documento US 24/1849 describe moléculas de ácido nucleico aisladas, denominadas moléculas de ácido 15 nucleico de TLT-1, que codifican para receptores inhibidores expresados en plaquetas. El documento US 24/1849 también describe moléculas de ácido nucleico antisentido, vectores de expresión recombinante que contienen moléculas de ácido nucleico de TLT-1, células huésped en las que se han introducido los vectores de expresión y animales transgénicos no humanos en los que se ha introducido o perturbado un gen de TLT-1. El documento US 24/1849 describe todavía adicionalmente proteínas TLT-1 aisladas, proteínas de fusión, 2 péptidos antigénicos, anticuerpos anti-TLT-1 y métodos de diagnóstico que usan las composiciones.

Washington (26, recuperado de Internet: http// www.aniara.com/pdf/literature/aniaragrant26.pdf ) describe el anuncio del ganador del Aniara Grant 26. El resumen completo describe que se espera ver una correlación positiva de la presencia del fragmento soluble (es decir de TLT-1) y la progresión de septicemia y, a medida que se recuperan los pacientes, se espera ver una disminución en la cantidad de TLT-1 soluble.

Ahora, los inventores han desarrollado métodos que permiten una rápida cuantificación, cualificación y comparación de perfiles de proteínas y péptidos derivados de diferentes muestras biológicas y, como resultado, han identificado biomarcadores novedosos para diagnóstico, pronóstico y/o predicción de septicemia y sus diferentes estadios.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona nuevos biomarcadores para la septicemia que permiten al doctor o al médico una 3 predicción, pronóstico y diagnóstico más exactos de SIRS (síndrome de respuesta inflamatoria sistémica), septicemia, septicemia grave o MODS (puntuación de disfunción orgánica múltiple) o que pueden diferenciar entre dichos estados diferentes y métodos para una predicción, pronóstico y/o diagnóstico exactos, rápidos y sensibles de dichos estados diferentes a través de (1)... [Seguir leyendo]

1. Método para la predicción, pronóstico y/o diagnóstico de septicemia, septicemia grave, choque septicémico, o MODS en un sujeto de prueba que comprende:

(a) medir el nivel de transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT 1) y TREM-1 en una muestra de

sangre o suero extraída de dicho sujeto de prueba, y

(b) comparar dicho nivel de transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT 1) y TREM-1 con un nivel de referencia de transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT1) y TREM-1 obtenido de una muestra de un sujeto sano, en la que

(c) un nivel de expresión reducida de sTLT-1 y una expresión aumentada de TREM-1 en la muestra del

sujeto de prueba en comparación con los de una muestra de un sujeto sano o sin septicemia indica que el

sujeto de prueba tiene o corre el riesgo de tener septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS.

2. Método según la reivindicación 1, en el que se mide adicionalmente el nivel de expresión de al menos un biomarcador adicional seleccionado del grupo que consiste en NGAL, procalcitonina (PCT) y proteína C

reactiva (CRP) en una muestra de sangre o suero de dicho sujeto de prueba y se compara con los niveles

de expresión de éstos uno o más marcadores en la muestra del sujeto sano o sin septicemia.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que

en la etapa (b) se usan las mediciones obtenidas en la etapa a) para crear un perfil para dichos biomarcadores; y

en la etapa (c) se compara dicho perfil obtenido en la etapa (b) con un perfil de biomarcadores de referencia

obtenido de un sujeto sano o sin septicemia.

4. Uso de un kit que comprende:

(a) moléculas de unión al transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble (sTLT 1) y TREM-1 humanos

(b) también opcionalmente moléculas de unión a al menos un biomarcador adicional seleccionado del grupo

que consiste en NGAL, procalcitonina (PCT) y proteína C reactiva (CRP), y

(c) valor(es) de referencia de la cantidad del/de los biomarcador(es) seleccionado(s) en un sujeto sano o sin septicemia para la comparación de los resultados, para la predicción, pronóstico y/o diagnóstico de septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS.

5. Uso según la reivindicación 4, en el que se usa la combinación de sTLT-1, TREM-1 y PCT.

6. Uso según la reivindicación 4 ó 5, en el que la molécula de unión se selecciona del grupo de anticuerpos

monoclonales, anticuerpos policlonales, aptámeros, fotoaptámeros, proteínas de interacción específicas, moléculas pequeñas de interacción específicas.

7. Método según la reivindicación 2 ó 3, en el que la etapa (c) comprende comparar la cantidad de los biomarcadores seleccionados en la muestra de sangre o suero del sujeto de prueba con un intervalo de 35 valores normales de los biomarcadores seleccionados en sujetos de control que están sanos o que no

tienen septicemia; mediante lo cual un aumento o disminución en la cantidad de los biomarcadores seleccionados en la muestra de sangre o suero hasta un nivel superior o inferior al intervalo de valores normales de biomarcadores seleccionados es indicativo de septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS.

8. Método según la reivindicación 2 ó 3, en el que la etapa (c) comprende comparar la cantidad de los

biomarcadores seleccionados en la muestra de sangre o suero del sujeto de prueba con un Intervalo de valores de los biomarcadores seleccionados obtenidos de sujetos sin septicemia, con septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS respectivamente; mediante lo cual una cantidad comparable de los biomarcadores seleccionados en dicha muestra con respecto al intervalo de valores de los 45 biomarcadores seleccionados en sujetos con septicemia es Indicativa de ausencia de septicemia, de

septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS respectivamente.

9. Método según la reivindicación 1, en el que la predicción, pronóstico y/o diagnóstico de septicemia, septicemia grave, choque septicémico o MODS se evalúa obteniendo un perfil de anticuerpos candidatos obtenido de una muestra biológica tomada de dicho Individuo en el que dicho perfil de anticuerpos 5 candidatos se basa en un anticuerpo frente al transcrito de receptor similar a TREM-1 soluble humano

(sTLT 1), TREM-1 y opclonalmente NGAL, procalcitonina (PCT) y/o proteína C reactiva (CRP); y (b) comparar dicho perfil de anticuerpos candidatos con un perfil de anticuerpos de referencia de un sujeto

sano o sin septicemia.

1. Uso del método según la reivindicación 1, para monitorizar la progresión del tratamiento o la intervención del estado de septicemia en un individuo.

11. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 ó 7 a 1, en el que se usa la combinación de sTLT-1, TREM-1 y PCT.

12. Método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el nivel de expresión o perfil de biomarcadores se establece usando tecnología de inmunoensayo seleccionada del grupo de ELISA directo, ELISA indirecto, ELISA de tipo sándwich, ELISA competitivo, ELISA multiplex, radioinmunoanálisis o tecnologías de ELISPOT o métodos de análisis por espectrometría de masas de las proteínas presentes en dicha muestra.

13. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el nivel de expresión del biomarcador o perfil de biomarcadores se establece usando tecnología de inmunoensayo seleccionada del grupo de ELISA directo, ELISA indirecto, ELISA de tipo sándwich, ELISA competitivo, ELISA multiplex, radioinmunoanálisis o tecnologías de ELISPOT o métodos de análisis por espectrometría de masas de las proteínas presentes en dicha muestra.