Método y conjunto de sondas para detectar el cáncer de vejiga.

Un método detección sistemática del cáncer de vejiga en un sujeto que comprende:

(a) hibridar un conjunto que comprenda sondas cromosómicas centroméricas para cada uno de los cromosomas 3, 7 y 17 a una muestra biológica de dicho sujeto;

(b) seleccionar las células de dicha muestra biológica sobre la base de una o más anomalías citológicas; y

(c) determinar la presencia o ausencia de células aneusómicas en dichas células seleccionadas examinando el patrón de hibridación de dicho conjunto de sondas cromosómicas en cada una de dichas células seleccionadas, donde las células con más de dos copias de cromosomas múltiples se consideran aneusómicas,

donde la presencia de células aneusómicas en las células seleccionadas se considera positiva para el cáncer.

Método y conjunto de sondas para detectar el cáncer de vejiga

La presente invención se refiere a medios y métodos para detectar el cáncer.

El cáncer de vejiga representa el quinto neoplasma más común y la duodécima causa de muerte por cáncer en los Estados Unidos, donde más de 53 000 nuevos casos se diagnostican por año. Más del 95% de los casos de cáncer de vejiga en los Estados Unidos son carcinoma de células transicionales (TCC, a veces denominado carcinoma urotelial). El estadio tumoral es el mejor predictor del pronóstico para los pacientes con cáncer de vejiga. El cáncer de vejiga se clasifica en estadios según la profundidad de la invasión del tumor y si se encuentra o no en los ganglios linfáticos o hay metástasis a distancia. Los tumores papilares no invasivos (el tipo menos agresivo y más común de tumor de vejiga) se denominan tumores en estadios pTa. El TCC "plano", más comúnmente conocido como "carcinoma in situ" (CIS) es un tumor más agresivo pero menos común que se asocia a una alta velocidad de avance de la enfermedad invasiva. El CIS se asigna a un estadio de pTIS. Los tumores que han invadido a través de la membrana basal del epitelio en la lámina propia subyacente se asignan a un estadio de pT1. Un tumor que ha invadido el músculo de la vejiga es un tumor en estadio pT2. La invasión a través del músculo en el tejido que rodea la vejiga es un tumor pT3. La invasión en órganos circundantes es un tumor pT4. El término cáncer de vejiga "superficial" hace referencia a los tumores pTa, pTIS y pT1. El cáncer de vejiga que invade el músculo hace referencia a los tumores pT2 pT3 y pT4.

Aproximadamente el 80% de los casos de cáncer de vejiga se presentan como cáncer de vejiga "superficial" y el 20% restante como cáncer de vejiga invasivo del músculo. Los pacientes con cáncer de vejiga "superficial" no requieren cistectomía (es decir, la extirpación de la vejiga) pero tienen un alto riesgo de recidiva tumoral y son supervisados por recidiva tumoral o avance con regularidad (generalmente cada 3 meses durante los primeros 2 años, cada 6 meses durante los dos años siguientes y cada año subsiguiente). El tratamiento para el cáncer de vejiga superficial consiste generalmente en la extirpación quirúrgica de tumores papilares y el tratamiento del CIS con Bacillus-Calmette Guerin (BCG). Los pacientes con enfermedad invasiva del músculo son tratados por cistectomía y tienen un pronóstico relativamente malo en comparación con los pacientes con cáncer de vejiga "superficial". Desafortunadamente, 80-90% de los pacientes con cáncer de vejiga invasivo del músculo se presentan inicialmente con enfermedad invasiva del músculo. Una gran parte de las aproximadamente 10 000 muertes al año por cáncer de vejiga es representada por este grupo de pacientes. El hecho de que muchos pacientes con cáncer de vejiga avanzado presenten esa forma sugiere que los programas de detección sistemática del cáncer de vejiga en etapas más tempranas podrían ayudar a reducir la mortalidad global de la enfermedad. De hecho, al menos dos estudios de detección de gran proyección sugieren que la detección sistemática ayuda a identificar el cáncer de vejiga en etapas más tempranas. Messing et al., Urology, 45:387-396, 1995; y Mayfield y Whelan, Br. J. Urol., 82(6):825-828, 1998.

La citoscopía y la citología de la orina han sido los pilares para la detección del cáncer de vejiga en las últimas décadas. Sin embargo, varios estudios han demostrado que la citología tiene una sensibilidad decepcionantemente baja para la detección del cáncer de vejiga. Mao et al., Science, 271:659-662, 1996; Ellis et al., Urology, 50:882-887, 1997; y Landman et al., Urology, 52:398-402, 1998. Por esta razón, ha habido un gran interés en el desarrollo de nuevos ensayos que tengan una mayor sensibilidad para la detección del cáncer de vejiga. Los ejemplos de nuevos ensayos que se han desarrollado para la detección del cáncer de vejiga incluyen pruebas que detectan antígenos de tumor de vejiga, por ej. la prueba BT (C.R. Bard, Inc., Murrayhill, NJ), NMP-22, FDP, etc.,pruebas que detectan una mayor actividad de la telomerasa (generalmente asociada a neoplasia), u otras pruebas que detectan alteraciones genéticas en células urinarias y lavados vesicales (por ej. hibridación in situ fluorescente (FISH) y análisis de microsatélites). Aunque el análisis FISH puede ser más sensible que otros métodos de detección, se deben contar grandes cantidades de células, y en consecuencia, el análisis demanda mucho tiempo y es costoso.

La presente invención busca superar o mejorar las deficiencias del estado anterior de la técnica proporcionando medios y métodos para la detección rápida, y no obstante sensible, del cáncer.

La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que un método rápido y sensible para la detección del cáncer se puede basar en la presencia de células aneusómicas en un subconjunto de células seleccionadasde la muestra biológica. La selección de un subconjunto de células a ser evaluadas respecto a anomalías cromosómicas reduce la cantidad de células a analizar, permitiendo que el análisis se lleve a cabo de manera rápida, manteniendo e incluso mejorando simultáneamente la sensibilidad. La invención también proporciona un conjunto de sondas cromosómicas elegidas para proporcionar una sensibilidad óptima en el análisis FISH y kits para detectar el cáncer de vejiga que incluyen conjuntos de sondas cromosómicas.

En un aspecto, la invención proporciona un método de detección sistemática del cáncer de vejiga en un sujeto que comprende:

(a) hibridar un conjunto que comprenda sondas cromosómicas centroméricas para cada uno de los

cromosomas 3, 7 y 17 a una muestra biológica de dicho sujeto;

(b) seleccionar las células de dicha muestra biológica sobre la base de una o más anomalías citológicas; y

(c) determinar la presencia o ausencia de células aneusómlcas en dichas células seleccionadas examinando el patrón de hibridación de dicho conjunto de sondas cromosómicas en cada una de dichas células seleccionadas, donde las células con más de dos copias de cromosomas múltiples se consideran aneusómicas,

donde la presencia de células aneusómicas en las células seleccionadas se considera positiva para el cáncer. La invención es esencialmente un proceso en dos etapas para la detección rápida y no obstante sensible del cáncer.

La muestra biológica puede ser orina o lavados vesicales, y se puede concentrar antes de usar. La orina es una muestra biológica particularmente útil. Las células se pueden seleccionar por cualquier medio adecuado, como morfología nuclear que incluye el tamaño y la forma del núcleo. La morfología nuclear puede ser evaluada por tinción con DAPI.

Las sondas cromosómicas se pueden marcar, por ejemplo, fluorescentemente.

La invención también proporciona un conjunto compuesto por sondas cromosómicas centroméricas para cada uno de los cromosomas 3, 7 y 17 destinado al uso en un método de detección del cáncer, así como un kit para detectar el cáncer de vejiga que contiene dicho conjunto. Las sondas cromosómicas se pueden marcar, por ejemplo, fluorescentemente.

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en este documento tienen el mismo significado que le da comúnmente un experto en el área a la que pertenece esta Invención. Aunque se pueden usar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en este documento para practicar la invención, los métodos y los materiales adecuados se describen más adelante. Además, los materiales, métodos y ejemplos son sólo ilustrativos y no pretenden ser limitantes. Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la descripción detallada siguiente y de las reivindicaciones.

La invención proporciona ventajosamente un método rápido y sensible para detectar el cáncer de vejiga y se puede utilizar para detectar sujetos que corren riesgo de padecer cáncer de vejiga, o para controlar una recidiva tumoral en pacientes con diagnóstico de cáncer de vejiga. En general, un conjunto de sondas cromosómicas se híbrida a las células (de la orina u otra muestra biológica) en un portaobjetos. Luego, las células del frotis se analizan visualmente con un aumento relativamente bajo (por ejemplo 200-400 X) en busca de características morfológicas fuertemente sugestivas de neoplasia (por ejemplo, aumento del tamaño nuclear o forma nuclear irregular). A continuación, los núcleos de las células citológicamente anormales se examinan para determinar anomalías cromosómicas cambiando el objetivo a un aumento mayor (por ej. 600-1000 X) y "dando... [Seguir leyendo]

1. Un método detección sistemática del cáncer de vejiga en un sujeto que comprende:

(a) hibridar un conjunto que comprenda sondas cromosómicas centroméricas para cada uno de los cromosomas 3, 7 y 17 a una muestra biológica de dicho sujeto;

(b) seleccionar las células de dicha muestra biológica sobre la base de una o más anomalías citológicas; y

(c) determinar la presencia o ausencia de células aneusómicas en dichas células seleccionadas examinando el patrón de hibridación de dicho conjunto de sondas cromosómicas en cada una de dichas células seleccionadas, donde las células con más de dos copias de cromosomas múltiples se consideran aneusómicas,

donde la presencia de células aneusómicas en las células seleccionadas se considera positiva para el cáncer.

2. El método de la reivindicación 1, en el que dicha muestra biológica es orina o lavados vesicales

3. El método de cualquier reivindicación precedente, en el que dicha muestra biológica está concentrada.

4. El método de la reivindicación 2 o 3, en el que dicha muestra biológica es orina.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dichas sondas cromosómicas están marcadas fluorescentemente.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las células se seleccionan por morfología nuclear.

7. El método de la reivindicación 6, en el que las células se seleccionan por tamaño nuclear.

8. El método de reivindicación 6, en el que las células se seleccionan por forma del núcleo.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que la morfología nuclear es evaluada por tinción con DAPI.

10. Un conjunto que comprende sondas cromosómicas centroméricas para cada uno de los cromosomas 3, 7 y 17 para usar en un método de detección del cáncer de vejiga.

11. Un kit para detectar el cáncer de vejiga que contiene un conjunto de sondas cromosómicas de acuerdo con la reivindicación 10.

12. El kit de la reivindicación 11, en el que dichas sondas cromosómicas están marcadas fluorescentemente.