MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DEL RIESGO DE DESARROLLAR UNA ENFERMEDAD INFECCIOSA.

Método para la determinación del riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa.

La invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para predecir el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa que comprende la detección y/o cuantificación de un compuesto mitocondrial en una muestra biológica, así como a un método in vitro para predecir dicho riesgo. Además, también se refiere al uso de un kit para el mismo fin. Preferiblemente, el sujeto padece un infarto agudo de miocardio o va a ser sometido o ha sido sometido a una operación quirúrgica.

La presente invención se refiere a un método in vitro para determinar el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa que comprende la detección y/o cuantificación de un compuesto mitocondrial en una muestra biológica. También se refiere al uso de un kit para el mismo fin. Por tanto, la invención se podría encuadrar en el campo de la biomedicina.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

La sepsis humana es una enfermedad infecciosa sistémica que desencadena el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS). Es la única enfermedad situada dentro de las 10 primeras enfermedades de mayor importancia en los países desarrollados que no ha experimentado variación en cuanto a su tasa de mortalidad total desde hace más de 30 años (Artero A. et al, 2010 Journal of Critical Care 25: 276-281).

Este dato se basa en dos razones, en primer lugar los grandes avances científicos de las tres últimas décadas han permitido moderar la tasa de mortalidad gracias principalmente a la mejora de las terapias antibióticas y en segundo lugar a la implantación de "guías clínicas" de actuación para su tratamiento precoz, lo que ha disminuido moderadamente la tasa de muerte. Pero, todos estos avances no han impedido que el número de casos anuales haya seguido ascendiendo a razón de un 4,2 % anual hasta los 1,7 millones de pacientes sépticos en 2009 sólo en EEUU.

Con estos datos y una población actual de 314 millones de habitantes, Estados Unidos posee una prevalencia de pacientes sépticos (sepsis como diagnóstico principal y secundario a otra enfermedad) en torno al 0,67%, lo que supone un gasto de más de 16 billones de dólares en aproximadamente 1,7 millones de pacientes, lo que se traduce en un gasto superior a los 9000 $ anuales por paciente.

El paciente séptico, puede presentar diversas etiologías, desarrollar una infección primaria o que ésta sea secundaria a cientos de otras posibles enfermedades. El

paciente puede provenir de la unidad coronaria, de traumatología, de urgencias o de cualquier otro servicio del hospital, puede ser una persona sin antecedentes médicos, o con problemas cardíacos, o diabético o con un historial médico sumamente complejo o por el contrario muy sencillo. Es decir, el paciente séptico es un colectivo difícil de estudiar y estandarizar, pero todos comparten un problema, su sistema inmune se ha desregulado ante un ataque masivo en forma de infección.

Las terapias antibióticas han mejorado, pero los microorganismos implicados también han evolucionado y hoy en día cada vez aparecen más poblaciones multirresistentes a terapias antibióticas. Entre las bacterias causantes de septicemia se encuentran bacterias Gram negativas, por ejemplo, el género Pseudomonas y la especie Escherichia coli. Además, también se asocian con el estado de septicemia, bacterias Gram positivas como por ejemplo los géneros bacterianos Streptococcus, Pneumococcus, Staphylococcus, más concretamente dentro de éste último la especie S. aureus, tanto las cepas resistentes como las no resistentes a meticilina. La sepsis también se ha reportado que además de ser causada por bacterias (bacteriemia), puede ser causada por virus (viremia) o por hongos (fungemia) (Phillip Dellinger R. et al. 2013 Crit Care Med 41:580-637).

Se han elaborado métodos de diagnóstico de septicemia, por ejemplo Septifast®, un kit de diagnóstico por PCR que permite la identificación de 16 y 6 de las principales bacterias y hongos respectivamente causantes de la septicemia humana; Sepsitest®, capaz de identificar 54 bacterias y 5 hongos; VYOO®, capaz de identificar 33 bacterias anaerobias y 6 hongos; o Plex-ID®, capaz de identificar una amplia gama de bacterias, virus, hongos y ciertos parásitos, y proporcionar información acerca de la resistencia, la virulencia y el tipo de cepa. Sin embargo, a pesar de los avances en la detección de septicemia, no se ha apreciado un descenso significativo ni de la mortalidad, ni del número de personas que anualmente sufren septicemia. Existen tratamientos para intentar paliar los efectos de la sepsis y controlarla, por ejemplo, mantener los niveles de glucosa o presión arterial, disminuir el efecto coagulante, bloquear los receptores del lipopolisacárido (LPS) bacteriano o controlar los niveles de algunas de las citoquinas secretadas al torrente sanguíneo (Phillip Dellinger R. et al. 2013 Crit Care Med 41:580-637; Sweeney DA, et al. 2008 Intensive Care Med 34: 1955-1960). Sin embargo, no existen medicamentos específicos o estrategias para la sepsis y además existe una infinidad de posibles agentes causantes que hacen difícil su diagnóstico

precoz.

Así, por todos los motivos expuestos, existe la necesidad de encontrar un método que permita predecir qué pacientes son candidatos a sufrir una enfermedad infecciosa y por lo tanto de esta manera también poder prevenir la septicemia. De este modo, en los pacientes que vayan a ser o acaben de ser sometidos a una operación quirúrgica se conseguiría poder adelantar un tratamiento antibiótico en los pacientes que presenten un alto riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa, mientras que se conseguiría evitar el uso indiscriminado de antibióticos en pacientes que no presenten un riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa.

DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN

El problema técnico que resuelve la invención es el de proporcionar un método in vitro, para predecir el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa para la obtención de un tratamiento personalizado y/o precoz del paciente. El método de la invención se basa en la detección de un compuesto mitocondrial en una muestra biológica aislada de un sujeto y permite predecir qué pacientes son candidatos a sufrir una enfermedad infecciosa y por lo tanto de esta manera también poder prevenir septicemia.

El método de la invención permite conocer si el paciente necesita o no un tratamiento con antibióticos para prevenir una infección. De esta manera, la presente invención es útil también para determinar la dosis de antibióticos a administrar en el caso de que éstos fueran necesarios.

El método de la invención es útil, particularmente, en pacientes que van a ser sometidos o han sido sometidos a una operación quirúrgica. En el primero de los casos, si el paciente presenta una tolerancia a infecciones, es posible posponer la operación quirúrgica o implantar una terapia antibiótica preventiva y por lo tanto, el riesgo de desarrollar una enfermedad asociada con la tolerancia a infecciones se previene.

En la presente invención se demuestra que la detección de compuestos mitocondriales en una muestra biológica de un individuo se asocia a un estado de tolerancia a infecciones y se demuestra la utilidad del uso de compuestos mitocondriales para

determinar el riesgo de desarrollar una infección en pacientes que no han presentado una infección previa y que no han recibido un trasplante previamente. Dichos sujetos no han recibido tratamiento inmunosupresor, en adelante nos referiremos a ellos como a "los pacientes de la invención".

En la presente invención se demuestra la utilidad del método en pacientes que habían sufrido un infarto agudo de miocardio (IAM) y también se demuestra la utilidad en pacientes que se iban a someter o se habían sometido a una cirugía mayor y que no presentaban infección en el momento de someterse a ella.

En la presente invención se demuestra que en pacientes que sufren un proceso que libera contenido mitocondrial a sangre presentan un mayor riesgo de sufrir una enfermedad infecciosa.El método de la invención permite predecir y por tanto poder prevenir una infección bacteriana después de una lesión, enfermedad o después o antes de cirugía mayor al determinarse el riesgo de desarrollar una infección.

El método de la invención es un método no invasivo, rápido, simple y efectivo.

En la presente invención se entiende por "tolerancia a infecciones", o también "estado refractario", al estado del sistema inmune innato en que éste ignora, o falla la detección y/o la respuesta contra una infección, donde dicha infección puede ser causada por una bacteria, un hongo, un virus o un parásito.

La enfermedad infecciosa a la que hace referencia la presente invención se refiere a una enfermedad infecciosa causada por una bacteria, tanto bacterias Gram positivas como bacterias Gram negativas; un hongo, como por ejemplo Candida albicans; un virus, como por ejemplo Herpes virus o Haemofilus influenza; o un parásito, como por ejemplo el causante de la malaria. En una realización preferida, la enfermedad infecciosa está causada por bacterias.

En la presente invención se entiende por "infección bacteriana" a la infección causada por bacterias Gram positivas... [Seguir leyendo]

1. Método de obtención de datos útiles para predecir el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa que comprende la detección y/o cuantificación de un compuesto mitocondrial en una muestra biológica aislada de un sujeto.

2. Método según la reivindicación 1 donde la enfermedad infecciosa es sepsis.

3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 donde el sujeto ha sufrido un infarto agudo de miocardio.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde el sujeto va a ser sometido o ha sido sometido a una operación quirúrgica.

5. Métodosegún cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde el sujeto es un humano.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde el compuesto mitocondrial se selecciona de una lista que consiste en ADN mitocondrial, ARN mitocondrial y proteína mitocondrial.

7. Método según la reivindicación 6 donde el compuesto mitocondrial es ADN mitocondrial.

8. Método según la reivindicación 7 donde el ADN mitocondrial es el gen 12S rRNA.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 donde la muestra biológica es plasma sanguíneo, suero sanguíneo o sangre.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde la detección y/o cuantificación del compuesto mitocondrial es llevada a cabo mediante una de las técnicas seleccionada de la lista que consiste en Western blot, PCR, cromatografía, inmunoensayo, ensayo enzimático y espectroscopia.

11. Método según la reivindicación 10 donde la técnica utilizada es PCR.

12. Método según la reivindicación 11 donde la PCR utilizada es PCR cuantitativa.

13. Método según la reivindicación 12 donde la PCR cuantitativa se realiza mediante el uso de cebadores que comprenden las secuencias SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 y de una sonda que comprende la secuencia SEQ ID NO: 4.

14. Método según la reivindicación 13 donde la PCR cuantitativa se realiza mediante el uso de cebadores que consisten en las secuencias SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 y de una sonda que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 4.

15. Método in vitro para predecir el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa que comprende detectar y/o cuantificar un compuesto mitocondrial en una muestra biológica de un sujeto.

16. Método según la reivindicación 15 donde además se compara el valor de concentración del compuesto mitocondrial obtenido con el valor de concentración del mismo compuesto mitocondrial perteneciente a un control para encontrar una diferencia significativa.

17. Método según la reivindicación 16 que además comprende asociar la diferencia significativa con el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa.

18. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17 donde la enfermedad infecciosa es sepsis.

19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18 donde el sujeto ha sufrido un infarto agudo de miocardio.

20. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19 donde el sujeto va a ser sometido o ha sido sometido a una operación quirúrgica.

21. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 20 donde el sujeto es un humano.

22. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21 donde el compuesto mitocondrial se selecciona de una lista que consiste en ADN mitocondrial, ARN mitocondrial y proteína mitocondrial.

23. Método según la reivindicación 22 donde el compuesto mitocondrial es ADN mitocondrial.

24. Método según la reivindicación 23 donde el ADN mitocondrial es el gen 12S rRNA.

25. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 24 donde la muestra biológica es plasma sanguíneo, suero sanguíneo o sangre.

26. Método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 25 donde la detección y/o cuantificación del compuesto mitocondrial es llevada a cabo mediante una de las técnicas seleccionada de la lista que consiste en Western blot, PCR, cromatografía, inmunoensayo, ensayo enzimático y espectroscopia.

27. Método según la reivindicación 26 donde la técnica utilizada es PCR.

28. Método según la reivindicación 27 donde la PCR utilizada es PCR cuantitativa.

29. Método según la reivindicación 28 donde la PCR cuantitativa se realiza mediante el uso de los cebadores que comprenden las secuencias SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 y de una sonda que comprende la secuencia SEQ ID NO: 4.

30. Método según la reivindicación 29 donde la PCR cuantitativa se realiza mediante el uso de los cebadores que consisten en las secuencias SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 y de una sonda que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 4.

31. Uso de un kit que comprende cebadores que comprenden la secuencia SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 y una sonda que comprende la secuencia SEQ ID NO: 4 para predecir el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa.

32. Uso según la reivindicación 31 donde el kit comprende cebadores que consisten en la secuencia SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 y una sonda que consiste en la

secuencia SEQ ID NO: 4 para predecir el riesgo de desarrollar una enfermedad infecciosa.

33. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 31 o 32 donde la enfermedad 5 infecciosa es sepsis.