Medio condicionado de cultivo de células del tracto digestivo y sus utilizaciones.

Medio de cultivo celular condicionado o un extracto de este, siendo el extracto obtenido por concentración y/o liofilización,

o composición que lo contiene, para su utilización para el tratamiento de los síntomas de la inflamación y/o de los trastornos inmunitarios, siendo dicho medio susceptible de ser obtenido por contacto con al menos un cultivo de células del tracto digestivo, al menos unos microorganismos probióticos y además unas células de la sangre periférica.

Medio condicionado de cultivo de células del tracto digestivo y sus utilizaciones La presente invención se refiere a medios de cultivo condicionados y a sus utilizaciones, en particular en el campo cosmético o dermatológico. Se refiere así al tratamiento y a la prevención de los síntomas de la irritación, de la inflamación o de los trastornos inmunológicos por tales medios condicionados, sus extractos, o las composiciones que los contienen. La invención se refiere igualmente a una composición que comprende la asociación de al menos un compuesto cosmético o farmacéutico susceptible de provocar una irritación de la piel y de al menos un medio de cultivo condicionado o de uno de sus extractos según la invención.

La piel humana está constituida por dos compartimentos, a saber un compartimento superficial, la epidermis, y un compartimento profundo, la dermis.

La epidermis está compuesta principalmente de tres tipos de células que son los queratinocitos (mayoritarios) , los melanocitos y las células de Langerhans. Cada uno de estos tipos celulares contribuye, por sus funciones propias, al papel esencial desempeñado en el organismo por la piel, en particular el papel de protección del organismo frente a las agresiones exteriores. La dermis proporciona a la epidermis un soporte sólido. Es igualmente su elemento nutricional. Está principalmente constituida por fibroblastos y por una matriz extracelular compuesta en sí misma principalmente por colágeno, elastina y por una sustancia fundamental. Se encuentra también en ella los leucocitos, los mastocitos y los macrófagos tisulares. Finalmente, la dermis es atravesada por vasos sanguíneos y fibras nerviosas.

La piel constituye una barrera contra las agresiones exteriores, en particular: químicas, mecánicas e infecciosas, y para ello, se producen a su nivel un cierto número de reacciones de defensa contra los factores medioambientales (clima, rayos ultravioletas, tabaco, poluciones, infecciones, etc.) y/o los xenobióticos (como por ejemplo algunos medicamentos) .

Por lo tanto, es esencial preservar o restablecer su integridad y el equilibrio de sus diferentes funciones, en particular un equilibrio entre los procesos de renovación y de diferenciación celular, o un grado de hidratación óptimo.

La irritación cutánea está clásicamente definida como una reacción inflamatoria local, reversible y no inmunológica, caracterizada por un edema y un eritema inducido después de un contacto simple o repetido de una sustancia química con la piel. La dermatitis irritante de contacto (DIC) aguda está principalmente caracterizada por una inflamación, mientras que la DIC crónica está caracterizada por una hiperproliferación de los queratinocitos y una hiperqueratosis transitoria. La DIC es una enfermedad multifactorial cuya activación depende al mismo tiempo de factores intrínsecos y extrínsecos. La edad, la base genética, el sexo son todos factores que pueden influir sobre el desarrollo de esta patología. Además, los efectos de los irritantes están directamente relacionados con sus propiedades químicas y con las concentraciones aplicadas que influyen en la adsorción cutánea.

La irritación de la piel es un fenómeno muy importante, ya que representa aproximadamente entre el 60% y el 80% de los casos clínicos de dermatitis de contacto. La mayoría de los otros casos representan unas dermatitis alérgicas de contacto.

Las sustancias que pertenecen a diferentes familias de productos químicos muy diferentes, como los disolventes queratínicos, los agentes deshidratantes o los agentes oxidantes o reductores, pueden ser considerados como irritantes. A causa de esta heterogeneidad, es muy difícil proponer un método para discriminar un producto irritante basándose en su estructura química. Diferentes irritantes pueden inducir a diferentes tipos de inflamaciones. Además de sus efectos corrosivos, que inducen la liberación de mediadores de la inflamación preformados, los productos químicos pueden alterar las funciones celulares o inducir la activación de las células cutáneas de la inmunidad innata. Resulta de ello la liberación de numerosos compuestos específicos de la inflamación, como unas citoquinas, quimioquinas, complementos y unos compuestos vasodilatadores como la histamina o los metabolitos de la vía del ácido araquidónico, que modulan la inflamación cutánea y el reclutamiento celular.

La penetración cutánea de los químicos es un parámetro importante en el establecimiento de la fisiopatología de la DIC (Norlen L et al., J Invest Dermatol 117: 823-829, 2001, Mizutani H et al., J Clin Invest 87: 1066-1071, 1991) . Esta está relacionada con el grado de permeabilidad de la piel (que está relacionado con su estado fisiológico) y con las propiedades fisicoquímicas de los compuestos de los cuales se supone se restringirá la entrada (peso molecular, polaridad, estado de ionización) y la naturaleza del entorno (excipiente, vehículo) por el cual estas sustancias se llevan al contacto con la piel.

Esta etapa indispensable corresponde, a partir del medio exterior o del vehículo, a la liberación de la molécula que difundirá, por lo tanto para su disposición en el organismo.

Durante un contacto entre un irritante y la piel, los queratinocitos son las primeras células a ser activadas por el agente químico. La mayoría de los estudios sobre la DIC se focalizaron así sobre este tipo celular, y numerosos datos son ahora conocidos por su participación en la fisiopatología de la DIC. Los queratinocitos desempeñan un papel importante en la inicialización de la reacción inflamatoria cutánea a través de la liberación de numerosos

mediadores y de citoquinas responsables de toda una cascada de la inflamación que conduce a los signos clínicos de la DIC. Entre esto, la IL-1! y los derivados del ácido araquidónico revisten una importancia particular en el desarrollo de la inflamación.

La liberación de la IL-1! induce, a través de la activación del factor de transcripción NF-kB, a la transcripción de genes implicados en la inflamación, como las citoquinas IL-1∀, IL-6, GM-CSF, el TNFα, las quimioquinas incluyendo la IL-8, MCP-1, MIP-1α y la eotaxina, así como la expresión de moléculas de adhesión como la E-selectina o ICAM-1 y VCAM-1 (Gordon JR, Nature 19: 346 (6281) : 274-276) .

La cascada de señalización generada a partir de la activación de los queratinocitos empieza a partir de la liberación de mediadores claves pre-almacenados. En efecto, los queratinocitos en reposo contienen grandes cantidades de IL-1! preformada y biológicamente activa (Marks F et al., Toxicol Lett 96:111-118, 1998) , así como de ácido araquidónico (Murphy JE et al., J Invest Dermatol 114: 602-608, 2000) . Debido a que estos dos compuestos son constitutivamente producidos por los queratinocitos, y permanecen almacenados en la célula, la epidermis puede ser considerada como un gran depósito de mediadores altamente inflamatorios. Una alteración de los queratinocitos por el efecto corrosivo de un agente químico, una quemadura o por exposición a los UV, induce a la liberación de IL-1! y de ácido araquidónico, que se vuelven los primeros mecanismos de defensa del organismo. La IL-1! tiene no sólo un papel autocrino, sino que también se ha descrito para inducir la transcripción de más de 90 genes diferentes sobre diferentes tipos celulares de piel, como los queratinocitos, las células endoteliales o los fibroblastos por la activación de la vía del factor de transcripción NF-kB (Gordon JR, Nature 19: 346 (6281) : 274-276) .

El ácido araquidónico es él mismo rápidamente metabolizado en numerosos compuestos altamente activos, los eicosanoides como las prostaglandinas, el tromboxano y los leucotrienos que actúan como mediadores locales con una baja duración de vida útil, implicados en el control de la proliferación, diferenciación de la apópsotis o también la formación del edema o la activación leucocitaria (Murphy JE et al., J Invest Dermatol 114: 602-608, 2000) .

Así, la IL-1! y el ácido araquidónico podrían ser considerados como los mediadores claves de la activación de la irritación en respuesta a un estrés químico (Murphy JE et al., J Invest Dermatol 114: 602-608, 2000) .

Entre todos los mediadores de la inflamación, salvo las IL-1 y el ácido araquidónico, sólo el TNF-! puede activar un número suficiente de mecanismos para generar independientemente una inflamación cutánea. Esta citoquina principal de la inflamación cutánea está ya pre-almacenada en los mastocitos dérmicos (Larrick JW et al., J Leukoc Biol 45: 429-433, 1989) , pero es también producida por los queratinocitos y las células de Langerhans después de la estimulación... [Seguir leyendo]

1. Medio de cultivo celular condicionado o un extracto de este, siendo el extracto obtenido por concentración y/o liofilización, o composición que lo contiene, para su utilización para el tratamiento de los síntomas de la inflamación y/o de los trastornos inmunitarios, siendo dicho medio susceptible de ser obtenido por contacto con al menos un cultivo de células del tracto digestivo, al menos unos microorganismos probióticos y además unas células de la sangre periférica.

2. Medio de cultivo, extracto o composición para su utilización según la reivindicación 1, caracterizado por que las células de la sangre periférica son unos leucocitos.

3. Medio de cultivo, extracto o composición, para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que las células digestivas son unas células epiteliales del intestino.

4. Medio de cultivo, extracto o composición para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que al menos un microorganismo probiótico es seleccionado del grupo siguiente: Saccharomyces, Yarrowia, Kluyveromyces, Torulaspora, Schizosaccharomyces pombe, Debaromyces, Candida, Pichia, Aspergillus, Penicillium, Bifidobacterium, Bacteroides, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus, Oenococcus y Lactobacillus.

5. Medio de cultivo, extracto o composición para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que al menos un microorganismo probiótico se selecciona entre las bacterias lácticas, las bifidobacterias y las levaduras Saccharomyces.

6. Medio de cultivo, extracto o composición para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que al menos un microorganismo se selecciona entre las especies Lactobacillus y Bifidobacterium.

7. Medio de cultivo, extracto o composición para su utilización según una de las reivindicaciones anteriores, para el tratamiento de los síntomas de la irritación de la piel y/o del cuero cabelludo.

8. Medio de cultivo, extracto o composición, para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para proteger las células cutáneas de los daños causados por las radiaciones UV.

9. Medio de cultivo, extracto o composición para su utilización según una de las reivindicaciones anteriores, para proteger las células de los daños de su ADN.

10. Composición para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que la composición es una composición farmacéutica.

11. Composición según la reivindicación anterior, adaptada para una aplicación tópica sobre la piel o las fáneras.

12. Composición cosmética o dermatológica, caracterizada por que contiene al menos un medio condicionado o un extracto de medio condicionado, tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 6, y al menos un agente que tiene un efecto secundario irritante.