Dispositivo para la detección de antígenos y usos de los mismos.

Un dispositivo para detectar un analito que comprende: un alojamiento que comprende un primer miembro de alojamiento y un segundo miembro de alojamiento,

en donde el alojamiento comprende:

a) una entrada en el primer miembro de alojamiento;

b) un sistema de la membrana de detección de analito entre el primer y el segundo miembro de alojamiento que comprende en el siguiente orden:

una plaquita de conjugado;

un miembro adhesivo;

una membrana de prueba; y un miembro absorbente; y

c) un miembro de fuerza; en donde por lo menos una parte de la plaquita de conjugado, de la membrana de prueba y del miembro absorbente son paralelas entre sí; en donde el miembro de fuerza comprime el sistema de membrana de detección de analito;

en donde la entrada permite que una muestra fluya verticalmente a través del sistema de membrana de detección de analito; y en donde el dispositivo tiene una altura de menos de 0, 15 cm, una anchura de menos de 2, 1 cm, y una profundidad

de menos de 4, 7 cm.

Dispositivo para la detección de antígenos y usos de los mismos Campo de la invención La presente invención se dirige, en parte, a un dispositivo y a un ensayo para detectar uno o más antígenos y los métodos para utilizar los mismos.

Antecedentes de la invención La detección de antígenos es importante para muchas áreas de la investigación científica, el uso en diagnóstico y los usos terapéuticos. Hay varios métodos mediante los que se pueden detectar los antígenos. Varios métodos se describen en la patente de EE.UU.: 5.160.701, la patente de EE.UU.: 5.141.850, la publicación PCT WO 91/12336, la patente de EE.UU.: 5.451.504, la patente de EE.UU.: 5.559.041, la solicitud de patente europea nº.: Q505636A1, la publicación PCT No. WO 88/08534, la solicitud de patente europea nº. 0284 232A1, la solicitud de patente de EE.UU. nº de publicación 20070020768 y la patente de EE.UU. nº RE39664. Los métodos y los dispositivos disponibles antes de la presente invención todavía puede necesitar mejoras en cuanto a la sensibilidad o la velocidad con las que se obtienen los resultados. Estos factores pueden ser importantes cuando el tiempo es primordial para intentar determinar la presencia o la ausencia de un antígeno.

En el área de detección de contaminantes patógenos llevados por alimentos, aproximadamente, setenta y seis millones de personas en Estados Unidos se ven afectadas por una enfermedad llevada por alimentos. De esos setenta y seis millones, aproximadamente, 325.000 llegarán a estar gravemente enfermos, necesitando las hospitalización y aproximadamente 5.000 morirán. La mayoría de las enfermedades llevadas por alimentos son provocadas por Salmonela, E. coli, y Campylobacter, que cuestan aproximadamente 35 mil millones de dólares.

Las medidas actuales para asegurar un suministro seguro de alimentos implican a una combinación de autoridades locales, estatales y federales así como un sistema elaborado de inspectores y redes de vigilancia. Los fabricantes de alimentos están sujetos a ciertas regulaciones del Departamento de Agricultura de EE.UU. (United States Department of Agriculture) , de la Administración de Fármacos y Alimentos de EE.UU. (United States Food and Drug Administration) y del Servicio de Pesquerías Marinas Nacionales (National Marine Fisheries Service) que son aplicables por ley. El USDA ha creado un sistema de inspectores de salud que tienen la labor de realizar inspecciones diarias de carne, productos y otros consumibles de productos elaborados o procesados en instalaciones de tratamiento y de fabricación. Estas inspecciones implican un análisis estadístico detallado para asegurar mejor la seguridad y la esterilidad de los alimentos antes que llegue al consumidor. Además, la mayoría de la industria cárnica ha adoptado unas técnicas de irradiación para demostrar aún más la esterilidad de los productos. En un nivel más bajo, los departamentos locales y municipales de la salud trabajan para asegurar que los distribuidores, restaurantes y detallistas locales siguen unas estrictas pautas para asegurar un suministro seguro de alimentos. Sin embargo, a pesar de esta elaborada red, las infecciones llevadas por alimentos todavía son comunes.

Una vez que se sospecha mucho de un brote, empieza una investigación. Se hace la búsqueda de más casos entre personas que pueden haberse expuesto. Se determinan los síntomas y el momento de comienzo y la ubicación de casos posibles, y se desarrolla una “definición de caso” que describe estos casos típicos. El brote se describe sistemáticamente por tiempo, lugar y persona. Para mostrar gráficamente cuándo se produjo, se dibuja un gráfico del número de personas que cayeron enfermas en cada día sucesivo. El cálculo de la distribución de casos por edad y sexo muestra quien está afectado.

A menudo no se conoce el microbio causante, así que se deben recoger muestras de heces o sangre de personas enfermas y deben enviarse al laboratorio sanitario público para hacer un diagnóstico. Cada recogida y muestreo pueden costar más de 500 $ por prueba y a menudo se tardan 2-4 días para el análisis (CDC “Infecciones llevadas por alimentos”) .

La solicitud de patente de EE.UU. nº de publicación 2002172937 describe un método para detectar patógenos humanos que llevan los artrópodos utilizando una única varilla de inmersión de prueba que proporciona una exposición visual de los resultados del ensayo. La solicitud de patente de EE.UU. nº de publicación 2007218500 describe un método y un aparato para la detección de bacterias en los que se utiliza una sustancia marcada para detectar bacterias que escinde enzimáticamente la sustancia marcada para producir un antígeno marcado que es detectado por un anticuerpo inmovilizado presente en el aparato.

La solicitud de patente europea nº: EP 2072135A1 describe un producto de inmunoensayo que comprende varias capas, incluso una capa porosa por debajo de la membrana secante, y un distribuidor de flujo encima de la membrana secante, en las que los distribuidores y el soporte se mantienen juntos para formar una envoltura alrededor de las membranas.

La patente de EE.UU.: 7.488.606 describe un dispositivo de recogida para una cromatografía de flujo lateral que tiene un miembro de recogida separado del resto de la tira de cromatografía por una barrera removible, impermeable y líquida.

La publicación PCT nº. WO 2011/014763 describe dispositivos y métodos para detectar antígenos, incluidos los patógenos llevados por alimentos. Los dispositivos tienen un alojamiento que comprende un primer miembro de alojamiento y un segundo miembro de alojamiento, en donde el alojamiento comprende una abertura de entrada en el segundo miembro de alojamiento.

Antes de la presente invención, para identificar el alimento u otra fuente del brote, los investigadores entrevistaban primero a unas pocas personas con los casos más típicos acerca de las exposiciones que podían haber tenido en unos pocos días antes que se pusieran enfermos. De esta manera, pueden excluirse ciertas exposiciones potenciales mientras otras que se mencionan repetidas veces surgen como posibilidades de origen. Combinadas con otra información, tales como fuentes probables del microbio específico implicado, las hipótesis se prueban entonces en una investigación epidemiológica formal. Los investigadores realizan entrevistas sistemáticas acerca de una lista de posibles exposiciones con las personas enfermas, y con un grupo comparable de personas que no están enfermas. Al comparar con qué frecuencia las personas enfermas y las personas sanas informan de una exposición, los investigadores pueden medir la asociación de la exposición con la enfermedad. Utilizando la estadística de probabilidad, se calcula directamente la probabilidad de ninguna asociación.

A medida que surgen nuevos problemas llevados por alimentos existe la necesidad de dispositivos y métodos novedosos para detectar los patógenos llevados por alimentos. La presente invención proporciona un dispositivo para la detección de antígenos, tales como antígenos de bacterias llevadas por alimentos, y cumple las necesidades de tener un dispositivo y un ensayo con mayor sensibilidad y/o velocidad de detección. Como se menciona en esta memoria, la presente invención satisface además otras necesidades.

Compendio de la invención En algunas realizaciones, la presente invención proporciona unos dispositivos para detectar un antígeno. En algunas realizaciones, el dispositivo comprende un alojamiento que comprende un primer miembro de alojamiento y un segundo miembro de alojamiento, en donde el alojamiento comprende además a) una entrada en el primer miembro de alojamiento en donde la entrada permite que una muestra fluya verticalmente a través del sistema de detección; b) un sistema de membrana de detección de antígeno entre el primer y el segundo miembro de alojamiento que comprende una plaquita de conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba y un miembro absorbente; y c) un miembro de fuerza. En algunas realizaciones, por lo menos una parte de la plaquita de conjugado, de la membrana de prueba y del miembro absorbente son paralelas entre sí. En algunas realizaciones, el dispositivo tiene una altura de menos de 0, 15 cm, una anchura de menos de 2, 1 cm, y una profundidad de menos de 4, 7 cm.

En algunas realizaciones, el miembro de fuerza es un sujetador inoxidable. En algunas realizaciones, el primer miembro de alojamiento es removible. En algunas realizaciones, el primer miembro de alojamiento se conecta o está en contacto con la plaquita de conjugado, en donde el movimiento o la retirada del primer miembro de alojamiento mueve la plaquita de conjugado o retira de la plaquita de conjugado del dispositivo.... [Seguir leyendo]

1. Un dispositivo para detectar un analito que comprende: un alojamiento que comprende un primer miembro de alojamiento y un segundo miembro de alojamiento, en donde el alojamiento comprende: 5 a) una entrada en el primer miembro de alojamiento; b) un sistema de la membrana de detección de analito entre el primer y el segundo miembro de alojamiento que comprende en el siguiente orden: una plaquita de conjugado; un miembro adhesivo;

una membrana de prueba; y un miembro absorbente; y c) un miembro de fuerza; en donde por lo menos una parte de la plaquita de conjugado, de la membrana de prueba y del miembro absorbente son paralelas entre sí; 15 en donde el miembro de fuerza comprime el sistema de membrana de detección de analito;

en donde la entrada permite que una muestra fluya verticalmente a través del sistema de membrana de detección de analito; y en donde el dispositivo tiene una altura de menos de 0, 15 cm, una anchura de menos de 2, 1 cm, y una profundidad

de menos de 4, 7 cm.

2. El dispositivo de la reivindicación 1, en donde el miembro de fuerza es un sujetador.

3. El dispositivo de la reivindicación 1, en donde el primer miembro de alojamiento se conecta o está en contacto con la plaquita de conjugado, en donde el movimiento o la retirada del primer miembro de alojamiento mueve la plaquita de conjugado o retira la plaquita de conjugado del dispositivo.

4. El dispositivo de la reivindicación 1, en donde la plaquita de conjugado comprende un primer reactivo de 25 captura específico de analito.

5. El dispositivo de la reivindicación 4, en donde el analito reconocido por el primer reactivo de captura específico de analito es un polinucleótido, un péptido, una proteína, un sacárido o un carbohidrato.

6. El dispositivo de la reivindicación 4, en donde el analito reconocido por el primer reactivo de captura específico de analito es un analito patógeno.

7. El dispositivo de la reivindicación 4, en donde el primer reactivo de captura específico de analito es un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un fragmento Fc o un anticuerpo de cadena simple.

8. El dispositivo de la reivindicación 4, en donde el primer reactivo de captura específico de analito es conjugado a un nanocristal, nanopartículas de conversión en aumento, fluoroforo de infrarrojos cercanos (NIR) , oro coloidal, 35 molécula fluorescente, etiqueta radioactiva o un sustrato quimioluminiscente.

9. Un dispositivo para detectar un analito que comprende:

un primer miembro y un segundo miembro en contacto entre sí, en donde dicho primer miembro comprende una entrada, y en donde entre el primer y el segundo miembro hay un sistema de membrana de detección de analito que comprende en el siguiente orden: una plaquita de conjugado; un miembro adhesivo; una membrana de prueba; y un miembro absorbente; y

en donde por lo menos una parte de la plaquita de conjugado, de la membrana de prueba y del miembro absorbente son paralelas entre sí,

en donde dicho sistema de membrana de detección de analito se comprime entre el primer y el segundo miembro, y

en donde la entrada permite que una muestra fluya verticalmente a través del sistema de membrana de detección de 5 analito.

10. El dispositivo de la reivindicación 9, en donde dicho primer y dicho segundo miembro se conectan entre sí con una bisagra o resorte o en donde el primer y segundo miembro son contiguos y forman un sujetador.

11. El dispositivo de la reivindicación 9, en donde el primer miembro se conecta o está en contacto con la plaquita

de conjugado, en donde el movimiento o la retirada del primer miembro mueve la plaquita de conjugado o retira la 10 plaquita de conjugado del dispositivo.

12. Un kit que comprende el dispositivo de cualquiera de las reivindicaciones anteriores y uno o más de un control positivo, un control negativo, un folleto de instrucciones, un recipiente de amortiguador y un sistema de recogida de muestras, o cualquier combinación de los mismos.

13. Un método para detectar un analito que comprende:

poner en contacto una muestra con la plaquita de conjugado del dispositivo de cualquiera de las reivindicaciones 111; retirar la plaquita de conjugado; e identificar una reacción positiva o negativa para el analito; en donde la muestra fluye verticalmente desde la plaquita de conjugado a la membrana de prueba.