Inmunoterapia basada en células cancerosas alógenas.

Una composición farmacéutica que comprende células que secretan gp96 para su uso en el tratamiento de cáncer en un sujeto,

en la que las células son alógenas para el sujeto y se administran al sujeto en al menos nueve dosificaciones durante un periodo de seis semanas.

Inmunoterapia basada en células cancerosas alógenas

INVESTIGACIÓN O DESARROLLO FEDERALMENTE PATROCINADO

El gobierno de EE.UU. tiene ciertos derechos en la presente invención conforme a lo dispuesto en el contrato de NIH CA039201 del Departamento de Salud y Servicios Sociales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a mejorar la inmunoterapia basada en células cancerosas (por ejemplo, inmunización o vacunación) que comprende la administración de células cancerosas alógenas que secretan una proteína de choque térmico modificada a un sujeto humano. Se mejora por la administración frecuente de células cancerosas alógenas al sujeto, agotamiento de linfocitos B en el sujeto antes y/o durante la primera o al menos una administración de células cancerosas alógenas, o ambos.

El documento WO 99/42121 desveló una vacuna basada en células, en la que se secreta la proteína de choque térmico modificada codificada por una construcción de expresión transfectada. La vacuna puede ser eficaz para tratar o prevenir cáncer o enfermedad infecciosa. Se describieron una inyección de células cancerosas recombinantes y dos inyecciones de células cancerosas recombinantes separadas dos semanas. Se prefirieron células cancerosas autólogas. Por el contrario, la presente invención usa células cancerosas alógenas.

El documento WO 2005/030136 desveló inhibir un tumor administrando una célula de cáncer de pulmón genéticamente modificada para expresar CD80 y HLA. La célula cancerosa no secreta una proteína de choque térmico modificada.

El cáncer se trata normalmente por resección quirúrgica del tumor, radiación o fármacos para destruir células cancerosas, o una combinación de los mismos. El sistema inmunitario puede inhibir la multiplicación y diseminación de células cancerosas. Sin embargo, pueden escapar de la supervisión inmunológica por ser no inmunogénicas (por ejemplo, cáncer de pulmón de células no pequeñas) , que bloquea la sensibilización de la respuesta inmunitaria para generar una respuesta eficaz, o por ser inmunogénicas (por ejemplo, melanoma) pero bloqueando la fase efectora de la respuesta inmunitaria. Alternativamente, el bloqueo de la sensibilización podría ser debido al tumor que secreta mediadores inmunosupresores o que tolera quimiocinas y/o la estimulación de células reguladoras, células presentadoras de antígeno tolerogénicas, o células mielosupresoras. La inmunoterapia activa administrando células cancerosas alógenas podría evitar el bloqueo, y sensibilizar la respuesta inmunitaria innata y/o adaptativa. La inducción y amplificación de una respuesta de linfocitos T CD8+ específica para tumor sería especialmente deseable como se evalúa por citólisis de células cancerosas o secreción de interferón gamma estimulado por células cancerosas.

Raez y col. (J. Clin. Oncol. 22:2800-2807, 2004) describieron un ensayo de fase I de una vacuna basada en células cancerosas alógenas para cáncer de pulmón de células no pequeñas en pacientes con enfermedad metastásica avanzada. La línea celular de adenocarcinoma AD100 se transfectó para expresar CD80 y HLA-A1 o A2. Los pacientes se inmunizaron intradérmicamente con 5 x 107 células una vez cada dos semanas. Tres inmunizaciones 45 representaron un ciclo de tratamiento. A menos que un paciente no tuviera respuesta a la inmunización inicial, se administraron hasta tres ciclos de tratamiento durante un total de nueve inmunizaciones. Los prometedores resultados obtenidos usando esta vacuna basada en células podrían mejorarse aumentando la frecuencia de inmunización y agotando los linfocitos B antes y/o durante al menos una inmunización.

Por tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar inmunoterapia mejorada (por ejemplo, inmunización o vacunación) , que comprende administrar células cancerosas alógenas que secretan una proteína de choque térmico modificada a un sujeto humano, por administración frecuente, agotamiento de linfocitos B antes y/o durante la administración inicial o al menos una administración, o ambos. Otras ventajas y mejoras se describen más adelante o serían evidentes de la divulgación en el presente documento.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona una mejora en la inmunoterapia basada en células cancerosas alógenas para inmunización y vacunación. El “tratamiento” puede ser terapéutico, profiláctico, o simplemente paliativo.

Un sujeto humano se trata administrando células cancerosas alógenas que secretan una gp96 como se expone en la reivindicación 1. Aquí, “alógeno” significa que las células administradas y el sujeto tratados se diferencian por una o más moléculas del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) . La proteína de choque térmico puede modificarse eliminando un dominio que contiene la señal de retención para retículo endoplásmico. Opcionalmente, el 65 dominio puede sustituirse con una o más regiones constantes de la cadena pesada de la inmunoglobulina IgG1 o IgG2 humana o de ratón (por ejemplo, dominio Fc) . La proteína de choque térmico modificada se expresa a partir de un ácido nucleico dentro de la célula cancerosa que se transfectó por un vector de expresión o infectó por un vector viral. El vector puede basarse en una o más señales reguladoras (por ejemplo, inicio y parada de la transcripción, donante y aceptor de corte y empalme, poliadenilación, origen de replicación) del virus del papiloma bovino (VPB) . El

vector preferentemente no contiene los genes E5, E6 y E7 de VPB. Así, las células cancerosas pueden considerarse “recombinantes” debido a la tecnología usada para producirlas.

El antígeno (por ejemplo, un epítope derivado de neoantígeno o antígeno de tumor de una célula cancerosa alógena o singénica) puede inducir una respuesta inmunitaria innata o adaptativa en el sujeto. En particular, se desea la inducción y amplificación de una respuesta de linfocitos T CD8+. La célula CD8+ puede destruir células cancerosas o secretar interferón gamma específicamente.

Opcionalmente, una célula cancerosa puede hacerse alógena expresando al menos una molécula de MHC, que no es expresada por el sujeto, de un ácido nucleico dentro de la célula cancerosa que se transfectó por un vector de expresión o infectó por un vector viral. La proteína de choque térmico modificada y la molécula de HLa pueden estar al menos parcialmente codificadas por el mismo vector o vectores diferentes.

Un sujeto humano puede inmunizarse varias veces con células cancerosas alógenas. El intervalo entre dos administraciones consecutivas de la composición inmunogénica basada en células es inferior a dos semanas. Otra mejora puede ser agotamiento de linfocitos B del sujeto antes y/o durante al menos una administración de la composición inmunogénica basada en células.

Otros aspectos de objetivos y ventajas de la invención serán evidentes para un experto en la materia a partir de la siguiente descripción de realizaciones específicas y las reivindicaciones, y generalizaciones a la misma.

DESCRIPCIÓN DE REALIZACIONES ESPECÍFICAS DE LA INVENCIÓN

A un sujeto puede administrársele una composición inmunogénica que comprende células cancerosas alógenas, que secretan una proteína de choque térmico modificada (por ejemplo, una proteína de choque térmico que carece de una secuencia de retención nativa para retículo endoplásmico) al menos parcialmente codificada por un vector de expresión transfectado o vector viral infectado en las células. Como cadena de polipéptidos naciente, la proteína de choque térmico modificada puede tener su propia secuencia señal de proteína u otra secuencia señal de proteína para elegir como diana la ruta secretora. Y opuesto a un extremo N la secuencia señal puede ser una marca de péptido que comprende una o más regiones constantes de la cadena pesada de inmunoglobulina humana (por

ejemplo, IgG1 o IgG2) . Opcionalmente, las células cancerosas expresan una molécula del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) alógeno (por ejemplo, al menos parcialmente codificado por el mismo vector o vector diferente) . Pueden o pueden no expresan CD80 (por ejemplo, al menos parcialmente codificado por el mismo vector o vector diferente) . Más detalles de la expresión de la proteína de choque térmico modificada, HLA-A, y CD80 en diversas líneas de células cancerosas se proporcionan en los documentos WO 99/42121 y WO 2005/030136.

Un sujeto puede administrarse en un intervalo de 1 x 107 a 10 x 107células cancerosas alógenas por dosificación. Un número total de células de 1 a 10 x 108 puede administrarse al sujeto. Las... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende células que secretan gp96 para su uso en el tratamiento de cáncer en un sujeto, en la que las células son alógenas para el sujeto y se administran al sujeto en al menos nueve 5 dosificaciones durante un periodo de seis semanas.

2. La composición para su uso según la reivindicación 1, en la que cada una de las dosificaciones comprende entre diez millones y cien millones de las células.

3. La composición para su uso según las reivindicaciones 1 ó 2, en la que cada una de las dosificaciones se fracciona en una pluralidad de alícuotas que se administran al sujeto en diferentes sitios.

4. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que las dosificaciones se administran al sujeto intradérmicamente.

1.

5. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que las dosificaciones se administran al sujeto subcutáneamente.

6. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que las dosificaciones se 20 administran al sujeto intraperitonealmente.

7. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que al menos 18 dosificaciones se administran al sujeto.

8. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que al menos 27 dosificaciones se administran al sujeto.

9. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la que las células se han transfectado con al menos un primer vector que comprende un primer ácido nucleico que codifica una primera 30 proteína.

10. La composición para su uso según la reivindicación 9, en la que la primera proteína es una forma secretada de un polipéptido gp96.

11. La composición para su uso según la reivindicación 9, en la que las células también se han transfectado con al menos un segundo vector que comprende un segundo ácido nucleico que codifica una molécula del complejo de histocompatibilidad mayor.