Inducción de una respuesta inmunitaria frente al virus del dengue usando un enfoque de sensibilización-refuerzo.

Composición para su uso en un método de inducción de inmunidad de larga duración frente a la infección por el virus del dengue,

comprendiendo la composición una composición de sensibilización y una composición de refuerzo, en la que dicha composición de sensibilización comprende una vacuna de ADN tetravalente que contiene secuencias de ADN que codifican para los genes prM/E de DEN 1, DEN 2, DEN 3 y DEN 4, o una vacuna inactivada purificada tetravalente que consiste en la proteína del núcleo, la región premembrana, la envuelta y la proteína no estructural 1 de DEN 1, DEN 2, DEN 3 y DEN 4, y dicha composición de refuerzo comprende una vacuna tetravalente de virus vivos atenuados que comprende cualquier cepa de cada uno de DEN 1, DEN 2, DEN 3 y DEN 4.

Inducción de una respuesta inmunitaria frente al virus del dengue usando un enfoque de sensibilización-refuerzo

Antecedentes de la invención 5

Campo de la invención

El contenido inventivo se refiere a una composición para la inducción de inmunidad de larga duración frente a la infección por el virus del dengue. 10

Antecedentes

El virus del dengue, el agente causante del dengue (D) y el dengue hemorrágico (DH) , es un virus del género Flavivirus, un virus de ARN con envuelta monocatenario con polaridad positiva. Su ARN codifica para 15 aproximadamente 3.400 aminoácidos. El virus existe como cuatro serotipos antigénicamente distinguibles.

El dengue es la infección humana por arbovirus más común a nivel mundial y una grave preocupación de salud pública que representa estimaciones de 100 millones de infecciones al año (OMS 1986; Monath y Heinz 1996; Thomas, et al 2003) . El D y el DH se encuentran en la mayor parte de zonas tropicales incluyendo Ã?frica, Asia, el 20 Pacífico, Australia y América.

Aunque el virus puede crecer en una variedad de especies de mosquitos, incluyendo Aedes albopictus, Aedes polynesiensis y Aedes scutellaris, Aedes aegypti es el vector de mosquito más eficaz debido a su hábitat doméstico (Gubler 1988) . Se han identificado cuatro serotipos antigénicamente distintos del virus del dengue que causan todos 25 ellos enfermedades humanas (Gubler, et al 1979; Henchal y Putnak 1990) . Cada uno de los cuatro serotipos, aunque distinto, es lo suficientemente similar a los demás como para provocar sólo protección cruzada parcial tras la infección (OMS 1986) . Tras la infección, se detecta viremia normalmente pronto en la aparición de síntomas (Halstead 1997) . Aunque muchas infecciones por dengue son leves, algunas infecciones dan como resultado DH y síndrome de choque por dengue (SCD) , que son potencialmente mortales. Esto se produce habitualmente en un 30 número pequeño de personas durante una segunda infección causada por un virus del dengue que es diferente del virus que causó la primera infección (Halstead 1997) .

La infección por el virus del dengue se produce tras la picadura de mosquitos Aedes infectados por el virus del dengue, que se infectaron anteriormente al alimentarse de seres humanos infectados. Los síntomas de la infección 35 por dengue incluyen fiebre alta, cefalea intensa, dolor retroorbitario, desarrollo de un sarpullido, náuseas, dolor articular y muscular, y habitualmente comienza en el plazo de cinco a seis días tras la picadura de un mosquito infectado. Los síntomas de DH también incluyen hemorragia subdérmica notable, que causa un hematoma purpúreo, así como hemorragia de la nariz, las encías y del tracto gastrointestinal (GI) . La tasa de letalidad asociada con DH es del 6 al 30%, produciéndose la mayor parte de las muertes en lactantes. El manejo de DH es sintomático y de 40 apoyo, y tiene como objetivo la reposición de la pérdida de líquidos (Nimmannitya 1996) .

No es posible realizar un diagnóstico preciso de D leve o clásico basándose en un cuadro clínico solo puesto que muchos síntomas de D se asemejan a los de otras enfermedades, tales como infección por chikungunya (Nimmannitya 1996) , sarampión, gripe e infecciones por Rickettsia. El diagnóstico diferencial debe incluir paludismo 45 y otras enfermedades virales, bacterianas y producidas por Rickettsia. Los métodos de diagnóstico para la infección se basan normalmente en la detección de virus, antígenos virales, secuencias genómicas y la detección de anticuerpos específicos frente al dengue (Shu y Huang 2004) . El DH puede diagnosticarse, en algunos casos, de manera más precisa basándose en signos y síntomas clínicos, incluyendo fiebre alta continuada durante de 2 a 7 días, hepatomegalia, hemoconcentración, choque y trombocitopenia. 50

La mayoría de infecciones dan como resultado D, que es autolimitante. Sin embargo, el DH y el SCD son potencialmente mortales. Aunque se han autorizado vacunas contra otros flavivirus, tales como de la fiebre amarilla y la encefalitis japonesa, no existen actualmente vacunas eficaces para proteger frente al D, DH o SCD.

Existen actualmente dos candidatos de vacuna tetravalente de virus vivos atenuados (VTVA) frente al dengue. Sin embargo, estas dos vacunas pueden ser o bien reactógenas o bien escasamente inmunogénicas en algunos receptores. Las alternativas prometedoras incluyen vacunas de virus quiméricos (por ejemplo, frente a la fiebre amarilla/dengue) , de proteínas recombinantes, de virus inactivados y de ácido nucleico (ADN) . Las vacunas de ADN pueden ser particularmente útiles para provocar una respuesta inmunitaria mediada por células así como una 60 humoral.

La evidencia experimental sugiere que, en primates no humanos, las vacunas de ADN frente al dengue, administradas solas, requieren varias administraciones de refuerzo e intervalos prolongados entre las administraciones para inducir una inmunidad protectora. Otras vacunas no replicativas tales como las vacunas 65 inactivadas purificadas pueden inducir a menudo altos títulos de anticuerpo neutralizante pero estas vacunas pueden ser malos inductores de memoria inmunológica a largo plazo. Por tanto, es necesario un método y una composición de inmunización seguros, eficaces para la inducción más oportuna de inmunidad de larga duración frente a la infección por el virus del dengue.

Aunque Konishi, E. et al.: Dengue tetravalent DNA vaccine inducing neutralizing antibody and anamnestic responses 5 to four serotypes in mice. Vaccine, vol. 24, nº 12, 2200-2207; Mota, J. et al. (2005) Induction of protective antibodies against dengue virus by tetravalent DNA inmunization of mice with domain III of the envelope protein. Vaccine, vol. 23, nº 26, 3469-3476; y Apt, D. et al. (2006) Tetravalent neutralizing antibody response against four dengue serotypes by a single chimeric dengue envelope antigen. Vaccine, vol. 24, nº 3, 335-344, da a conocer cada uno vacunas de ADN tetravalentes frente al virus del dengue que se han usado en regímenes de sensibilización-10 refuerzo, todos sugieren combinar la vacuna de ADN tetravalente respectiva con un refuerzo de proteínas (Apt, D. et al.) , para aumentar la eficacia (Konishi, E. et al.) , o proteínas recombinantes (Mota, J. et al.) .

Breve sumario de invención 15

La invención se refiere a una composición para su uso en un método de inducción de inmunidad de larga duración frente a la infección por el virus del dengue según la reivindicación 1. La siguiente descripción también explica, en beneficio de la divulgación completa y la descripción exhaustiva y, por tanto, para un mejor entendimiento, métodos de inducción de una respuesta inmunitaria frente al virus del dengue, por ejemplo un método para la inducción de una respuesta inmunitaria frente al virus del dengue con reactogenicidad reducida mediante la sensibilización del 20 sujeto con un inmunógeno no replicativo y el refuerzo con una vacuna viral tetravalente de virus vivos atenuados. Los ejemplos de inmunógenos no replicativos incluyen vacunas de ADN tetravalentes que contienen secuencias de ADN que codifican para proteínas del virus del dengue o vacunas de proteínas del virus del dengue inactivadas purificadas tetravalentes.

Se describen además en beneficio de la completitud, métodos de inducción de una respuesta inmunitaria frente al virus del dengue mediante regímenes de vacunación de sensibilización-refuerzo heterólogo. Las composiciones de sensibilización y refuerzo contienen diferentes sistemas de expresión que codifican para y que expresan proteínas virales del dengue. Los sistemas de expresiones incluyen vectores de expresión adenovirales, vectores de expresión de ADN y sistemas de expresión de replicones del virus de la encefalitis equina venezolana. 30

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. Gráficos que ilustran respuestas de anticuerpos de inmunoglobulina (IgG) sérica de primates no humanos inmunizados con una vacuna de ADN tetravalente (ADNT) frente al dengue, una vacuna inactivada purificada 35 tetravalente (VIPT) frente al dengue, seguidas por una vacuna tetravalente de virus vivos atenuados (VTVA) frente al dengue. Las muestras se sometieron a prueba mediante ELISA a una dilución 1:100.

Figura 2. Gráficos de barras que ilustran anticuerpo neutralizante en el día 60 tras la inmunización de monos con una vacuna de ADN tetravalente (ADNT) frente al dengue, una vacuna inactivada purificada tetravalente (VIPT) 40 frente al dengue y una vacuna tetravalente de virus vivos atenuados (VTVA) frente al dengue.

Descripción de realizaciones preferidas

MÉTODO DE SENSIBILIZACIÓN-REFUERZO USANDO ADN/VIPT/VTVA 45

Existe... [Seguir leyendo]

1. Composición para su uso en un método de inducción de inmunidad de larga duración frente a la infección por el virus del dengue, comprendiendo la composición una composición de sensibilización y una composición de refuerzo, en la que dicha composición de sensibilización comprende una vacuna de ADN 5 tetravalente que contiene secuencias de ADN que codifican para los genes prM/E de DEN 1, DEN 2, DEN 3 y DEN 4, o una vacuna inactivada purificada tetravalente que consiste en la proteína del núcleo, la región premembrana, la envuelta y la proteína no estructural 1 de DEN 1, DEN 2, DEN 3 y DEN 4, y dicha composición de refuerzo comprende una vacuna tetravalente de virus vivos atenuados que comprende cualquier cepa de cada uno de DEN 1, DEN 2, DEN 3 y DEN 4. 10

2. Composición según la reivindicación 1 para su uso según la reivindicación 1, en la que dicha secuencia de ADN de DEN 2 es un constructo que tiene un reemplazo de los dominios transmembrana C-terminales y dominios citoplasmáticos de E por un dominio de membrana asociada a lisosoma.

3. Composición según la reivindicación 1 para su uso según la reivindicación 1, en la que dicha composición de refuerzo puede administrarse entre dos semanas y 2 meses después de la administración de dicha composición de sensibilización.