Procedimiento para el diagnósitco de cáncer de pulmón mediante test en suero.

La presente invención se refiere al desarrollo de un procedimiento para realizar el diagnóstico de cáncer de pulmón mediante test en suero.

Este método consiste en la determinación en suero de la concentración de las proteínas CD26 soluble (sCD26) y Calprotectina mediante tests fiables y de carácter mínimamente invasivo. La variación conjunta de ambas proteínas incrementa su capacidad diagnóstica y constituye un potencial marcador para el diagnóstico de esta neoplasia.

La aplicación de este procedimiento en el ámbito clínico-sanitario supone una herramienta de gran utilidad que proporciona al médico datos objetivos sobre la probabilidad de que un individuo padezca cáncer de pulmón, sirviendo como un complemento a las pruebas diagnósticas que se llevan a cabo habitualmente.

PROCEDIMIENTO PARA EL DIAGNÓSTICO DE CÁNCER DE PULMÓN MEDIANTE TEST EN SUERO

SECTOR DE LA TÉCNICA

El sector de la técnica al que hace referencia la invención se encuadra en el ámbito sanitario, 5 específicamente en el de Oncología Pulmonar.

ESTADO DE LA TÉCNICA

El Cáncer de Pulmón (CP) lidera la mortalidad por cáncer en España, estimándose en el año 2012 unas 20.000 muertes a causa de esta neoplasia. Es el tercer cáncer en incidencia, estimando 10 para ese mismo año unos 24.500 casos; y la proximidad entre ambas cifras refleja su mal pronóstico (Sánchez et al, 2010). Así, la supervivencia global a 5 años es del 15%, cifra que puede alcanzar un 80% cuando el diagnóstico se realiza en un estadio temprano de la enfermedad y ésta es operable (SEPAR, 2011). Desafortunadamente, sólo un 24% de los pacientes son diagnosticados cuando el cáncer es localizable, mientras que el 44% se diagnostican cuando éste 15 ya se ha diseminado (Botana-Rial et al, 2007).

Desde el punto de vista de estadificación, pronóstico y tratamiento, el CP se clasifica en dos grandes tipos histológicos: el carcinoma pulmonar de células no pequeñas o no microcítico (CPNM), que representa el 85% de los casos de CP, y el carcinoma pulmonar de célula pequeña o microcítico (CPM), que incluye el 15% restante. Dentro del CPNM los subtipos histológicos más 20 frecuentes son el adenocarcinoma (43,6%) y el carcinoma escamoso (29,2%) (Botana-Rial et al, 2007).

La alta mortalidad del CP, asociada a una detección tardía, pone de manifiesto la importancia de un diagnóstico precoz. Sin embargo, la mayoría de pacientes son asintomáticos y los síntomas aparecen cuando la enfermedad se halla en un estado avanzado y sin opción de tratamiento 25 quirúrgico curativo. Los síntomas más comunes son dolor torácico, disnea, hemoptisis, cansancio, debilidad muscular y pérdida de peso. Tras la sospecha de cáncer de pulmón, la confirmación requiere la realización de distintas pruebas, como radiografía de tórax o tomografía computarizada. A menudo la determinación definitiva de la presencia de cáncer exige la obtención de una biopsia. Otras técnicas para el correcto diagnóstico son la 30 broncoscopia, resonancia magnética, mediastinoscopia o tomografía por emisión de positrones (PET) (Protocolo de diagnóstico y tratamiento del Cáncer de Pulmón el Complejo Hospitalario Universitario de Vigo, 2008). Muchas de estas técnicas diagnósticas son caras y resultan traumáticas para el paciente.

Un test sérico de bajo coste y carácter mínimamente invasivo sería un complemento idóneo a 35 estas técnicas. A día de hoy no existen pruebas en suero útiles para diagnosticar de forma temprana el CP, aunque en clínica se emplean varios biomarcadores como el Antígeno Carcinoembrionario (CEA), la Citoqueratina 19 (CYFRA 21-1), la enolasa específica neuronal

(NSE) y el Antígeno de Células Escamosas (SCC). Su utilidad reside en el pronóstico, seguimiento o monitorización del tratamiento en pacientes ya diagnosticados.

Por otro lado, dada la complejidad tumoral, actualmente se acepta que la estrategia para intentar mejorar el diagnóstico es la combinación de varios posibles marcadores. 5 Anteriormente, algunos inventores del procedimiento comprobaron la eficacia de esta aproximación en CP (Lemos-González etal, 2007).

Otro aspecto a considerar es la inespecificidad que pueden presentar los potenciales marcadores si experimentan alteraciones de sus niveles en patologías benignas. Los inventores del procedimiento objeto de esta patente han demostrado que una combinación de marcadores 10 resulta una herramienta útil para un diagnóstico más efectivo del CP, no sólo frente a controles sanos, sino discriminando también patologías benignas del pulmón.

Para su evaluación en suero de pacientes con CP, pacientes con patología benigna del pulmón y controles sanos, se seleccionaron 2 potenciales marcadores. La selección de estos marcadores se basó en su valor descrito en la literatura científica para la discriminación de CP o su 15 implicación en distintos aspectos del proceso tumoral. Los 2 marcadores escogidos para buscar una combinación eficiente para el diagnóstico fueron la glicoproteína CD26 y la Calprotectina. Entre éstos, el CD26 presentó un descenso significativo de sus niveles asociado a la presencia de CP, registrándose para la Calprotectina un aumento significativo de sus niveles. La obtención de la Receiver Operating Characteristics Curve, curvas ROC, estimó un valor de AUC {Area Under the 20 Curve) de 0,698 para el CD26, y 0,765 para la Calprotectina.

La presente invención muestra que los niveles séricos de CD26 y Calprotectina, medidos en suero de pacientes con CP y sujetos control, se relacionan con la presencia de esta neoplasia; y la combinación de los niveles de CD26 y Calprotectina permite obtener un aumento significativo en el valor de AUC respecto a estos marcadores evaluados de manera individual. Esta variación 25 conjunta hacen de esta combinación un potencial marcador para el diagnóstico de esta neoplasia.

BIBLIOGRAFÍA

Botana-Rial MI, Fernández-Villar A, Represas-Represas C etal. Cáncer de Pulmón en el área sur 30 de Galicia. Cambios epidemiológicos y clínicos en la última década. Pneuma 2007; 9:13-8.

Lemos-González Y, Rodríguez-Berrocal FJ, Cordero OJ et al. Alteration of the serum levels of the epidermal growth factor receptor and its ligands in patients with non-small cell lung cáncer and head and neck carcinoma. BrJ Cáncer 2007; 96(10): 1569-78.

Protocolo de diagnóstico y tratamiento del cáncer de pulmón. Complexo Hospitalario 35 Universitario de Vigo. Disponible en: http://intranetchuvi .

Sánchez MJ, PayerT, De Angelis R et al. Cáncer incidence and mortality in Spain: estimates and projections for the perlod 1981-2012. Ann Oncol 2010; 21 Suppl 3: ¡¡¡30-36.

SEPAR, Página web de la Sociedad Española de Neumología y Cirugía Torácica. Disponible en: http://www.separ.es/notidas/SEPAR_Alta_ mortalidad_dificil_diagnostico_en_el_cancer.html.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La presente invención describe un procedimiento para el diagnóstico del cáncer de pulmón más ventajoso que los empleados actualmente en el ámbito clínico. Este procedimiento consiste en la determinación en suero de los niveles de las proteínas CD26 (sCD26) y calprotectina. La realización de esta prueba no supone al individuo más molestia que la extracción de sangre, técnica de extensa implementación, mínimamente invasiva y de fácil aplicación.

La determinación de los niveles de sCD26 y calprotectina solubles se realiza mediante ensayos inmunoenzimáticos específicos siguiendo la técnica de ELISA tipo sándwich.

Los inventores del procedimiento objeto de esta patente, han demostrado que los perfiles séricos de sCD26 y calprotectina difieren en pacientes de cáncer de pulmón respecto a sujetos sanos o con patologías pulmonares no neoplásicas. Los pacientes de cáncer de pulmón presentan niveles de sCD26 inferiores a los detectados en los sujetos control, mientras que los niveles de calprotectina se ven aumentados en los pacientes con cáncer. Al considerar simultáneamente los cambios en ambas pcoteínasse incrementa la capacidad de diferenciación de sujetos que padecen cáncer frente a los que no.

La determinación de los niveles séricos de sCD26 y calprotectina puede ofrecer al médico datos objetivos sobre la probabilidad de que un individuo padezca cáncer de pulmón. Este resultado puede complementar otras pruebas que se utilizan actualmente en el ámbito clínico para el diagnóstico de esta neoplasia. El resultado positivo de la prueba descrita en la presente invención puede confirmarse de modo definitivo realizando una biopsia.

DESCRIPCIÓN DE UN MODO DE REALIZACIÓN

El procedimiento que proponemos comienza con la obtención de una muestra de sangre en aquellos individuos con sospecha de cáncer de pulmón; ésta es una prueba de fácil realización lo que permitiría su inclusión en cualquier revisión clínica rutinaria. Para la obtención del suero se recogen estas muestras en tubos con EDTA y se centrifugan a 2000g durante 15 minutos. El suero así obtenido se conserva a <-209C hasta la determinación de las proteínas mencionadas.

Los niveles circulantes de sCD26 y calprotectina se determinan mediante el empleo de inmunoensayos ELISA de tipo sándwich, comercialmente disponibles en las casas eBioScience y HyCult Biotechnology, que proporcionan placas de 96 pocilios recubiertas con un anticuerpo específico y todos los reactivos necesarios. Los ensayos se realizan de acuerdo a las recomendaciones del fabricante, siendo el protocolo general... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para el diagnóstico de cáncer de pulmón mediante test en suero humano que comprende la determinación de la concentración en suero de las proteínas sCD26 y calprotectina.

2. Procedimiento para el diagnóstico de cáncer de pulmón mediante test en suero humano, según reivindicación 1, que se caracteriza por determinar la concentración de las proteínas sCD26 y calprotectina, mediante inmunoensayos ELISA tipo sándwich.

3. Procedimiento para el diagnóstico de cáncer de pulmón mediante test en suero humano, según reivindicaciones 1-2, que consiste en la utilización conjunta de la determinación de la concentración de sCD26 y calprotectina, y la comparación de los valores obtenidos con un punto de corte seleccionado, de 0.52, por encima del cual un individuo es probable que sea diagnosticado com cáncer de pulmón, y por debajo del cual el diagnóstico de malignidad sería infrecuente.

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

ESPAÑA

N.° solicitud:

Fecha de presentación de la solicitud: 24.05.2013 Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

© IntCI.: G01N33/574 (2006.01)

G01N33/68 (2006.01)

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoría

Documentos citados

Reivindicaciones

afectadas

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BLANCO-PRIETO, S. et al. "CD26 and calprotectin as potential markers to design a panel for the detection of non-small cell lung cáncer". 22nd International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB) Congress. Sevilla, 4-9 de Septiembre de 2012. FEBS JOURNAL, septiembre 2012, Vol. 279, Suppl. S1, página 116, resumen P04-98.

SÁNCHEZ-OTERO, N. et al. "Calprotectin: a novel biomarkerforthe diagnosis of pleural effusion". BRITISH JOURNAL OF CANCER. 20.11.2012. Vol. 107, N° 11, páginas 1876-1882, todo el documento.

AYUDE, D. et al. "Clinical interest of the combined use of serum CD26 and alpha-L-fucosidase in the early diagnosis of colorectal cáncer". DISEASE MARKERS. 14.07.2004. Vol. 19, N° 6, páginas 267-272, discusión.

CORDERO, O. J. et al. "How the mesurements of a few serum markers can be combined to enhance their clinical valúes in the management of cáncer". ANTICANCER RESEARCH. Julio-Agosto 2008. Vol. 28, N° 4C, páginas 2333-2342, todo el documento.

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Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia

Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica

O: referido a divulgación no escrita

P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud

E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud