Diagnosis de enteritis aguda por determinación en sangre de la proteína intestinal de unión a ácidos grasos.

Un método de determinación de enterocolitis aguda, que comprende la detección de la proteína intestinal de unión a ácidos grasos (I-FABP,

del Inglés "Intestinal Fatty Acid Binding Protein") en la sangre recogida de un mamífero.

Diagnosis de enteritis aguda por determinación en sangre de la proteína intestinal de unión a ácidos grasos Campo técnico

La presente invención se refiere a un método de determinación y a un reactivo de determinación de enterocolitis aguda.

Técnica anterior

La enterocolitis aguda es una de las categorías de enfermedad usadas para la inflamación intestinal causada por factores externos tales como virus, bacterias y agentes farmacéuticos. Los síntomas generales de la misma incluyen dolor abdominal y diarrea fuerte, y la enfermedad podría ser fatal dependiendo de la causa.

Por ejemplo, la enterocolitis bacteriana incluye enfermedades Infecciosas designadas por ley tal como el cólera y el tifus abdominal, aquellas que se originan a partir de Escherichia coli 157 que Induce el envenenamiento de comida, y aquellas causadas por organismos resistentes a fármacos tales con el MRSA. Además, se considera que la enterocolitis vírica con frecuencia es causada por adenovlrus, rotavlrus, norovlrus y similares. En otras palabras, la enterocolitis aguda no es, en un sentido concreto, un nombre de diagnóstico de una enfermedad, sino un término genérico para los síndromes que causan inflamaciones en los Intestinos. Clínica y claramente se distingue de la enterocolitis endógena, la cual está causada por antecedentes genéticos, enfermedades autolnmunes y similares.

Casos leves de enterocolitis aguda generalmente se curan por medicación y seguimiento del progreso. Sin embargo, una vez mal diagnosticados, los síntomas progresan y simultáneamente desarrollan peritonitis debido a la perforación gastrointestinal e íleo paralítico, necesitando una operación o produciendo serios síntomas en algunos casos. Por lo tanto, se demanda una diagnosis rápida y exacta.

Para la diagnosis de enterocolitis aguda, se usan: (1) preguntas del médico, (2) examen físico tal como sensibilidad abdominal, cambios enfermizos de la piel, palpación y similares, (3) resultados a partir del examen del laboratorio tal como el análisis de sangre, escatoscospia y similares y (4) examen de imagen tal como rayos X corrientes de abdomen, ultrasonicación, CT, endoscopia, angiografía y similares. Qué métodos entre estos se usan y la combinación de los mismos se dejan mayoritariamente al juicio del clínico en base a la queja principal y en los síntomas clínicos del paciente, y no hay procedimiento diagnóstico definitivo para llegara una diagnosis confirmada. Para ser preciso, la enterocolitis aguda se juzga de forma exhaustiva no solamente a partir de los síntomas clínicos tales como diarrea y dolor abdominal, sino a partir del examen físico, el examen de laboratorio, el examen de imagen y similares. En cuanto al examen físico entre los anteriormente mencionados, el sitio de inflamación generalmente se puede especificar mediante palpación y sensibilidad abdominal después del comienzo de la peritonitis. Esto requiere técnica y experiencia competente. El cultivo de deposiciones, el cual se usa como examen de laboratorio para identificar bacterias causantes, es inapropiado para determinar el curso del tratamiento para pacientes en la fase aguda ya que el análisis tarda días. Además, CT y endoscopia requieren instalaciones que tengan equipo y técnicos, aunque la exactitud de diagnóstico es relativamente alta, y la endoscopia, que puede especificar con la mayor facilidad el sitio de inflamación y el nivel de gravedad, produce dolor físico y molestias a los pacientes. Por lo tanto, el examen de la endoscopia no es un método de diagnóstico conveniente.

Por lo contrario, el análisis de sangre frecuentemente se usa como una de las herramientas de diagnóstico en situaciones clínicas, ya que minimiza las molestias sobre los pacientes, proporciona diversa información de los pacientes de forma rápida y conveniente, y tiene objetividad como base de diagnosis. Para la diagnosis de enterocolitis aguda, algunas veces se usan como marcadores de diagnóstico el recuento de glóbulos blancos, la proteína C reactiva (CRP, del Inglés C-Reactive Protein), deshidrogenosa de ácido láctico (LDH, del Inglés Lactic Acid Dehydrogenase) y similares. Sin embargo, ya que simplemente permiten la predicción de la presencia de inflamación en el cuerpo sin especificidad a órgano, no pueden ser la base de diagnosis confirmada de enterocolitis aguda. En otras palabras, en la actualidad no existe un marcador de diagnosis en sangre capaz de identificar específica y rápidamente la enterocolitis aguda.

Por lo tanto, hay una demanda de establecimiento de un método de determinación de forma rápida y conveniente de enterocolitis aguda en situaciones clínicas.

La referencia de no-patente 1, la referencia de no-patente 2 y la referencia de no-patente 3 describen que la concentración de proteína de unión a ácido graso intestinal (l-FABP, del Inglés Intestinal Fatty Acid-Binding Protein) en la sangre del paciente con enfermedad intestinal isquémica aumenta que en gente sana. Además, la referencia de patente 1 y la referencia de patente 2 describen que aumenta la concentración de l-FABP en la sangre del modelo en rata de enfermedad intestinal isquémica.

Sin embargo, en esos casos son solamente observadas las patologías que muestran marcadamente alta concentración de l-FABP en comparación con la de un estado normal, y por lo tanto, no se estableció la relación entre los cambios en la concentración de l-FABP en sangre y la gravedad de la enfermedad. Además, no describen que la concentración de l-FABP en sangre aumente debido al inicio de la enterocolitis aguda.

Aquí, l-FABP es una proteína específica localmente distribuida sobre el epitelio mucoso del intestino delgado, que tiene un pequeño peso molecular, y característicamente presente de forma abundante en la fracción de citoplasma. Además, tiene funciones para unirse a ácidos grasos, y está implicada en el metabolismo intracelular de los ácidos grasos.

Referencia de patente 1: Documento de Patente US N° 5225329.

Referencia de patente 2: documento WO93/8276.

Referencia de no-patente 1: Tatsuo Kanda, Hiroshi Fujii, et al., Intestinal Fatty Acid-Binding Protein Is a Useful Diagnostic Marker for Mesenteric Infarction in Humans., Gastroenterology 1996; 11: p. 339-343.

Referencia de no-patente 2: Joshua M. Liberman et al., Human intestinal fatty add binding protein: Report of an assay with studiesin normal volunteers and intestinal ischemia., Surgery 1997; 121: N° 3: p. 335-342.

Referencia de no-patente 3: Florian Guthmann et al., Plasma concentration of intestinal and liver-FABP in neonates suffering from necrotizing enterocolitis andin healthy preterm neonates., Molecular and Cellular Biochemistry 22; 239: p. 227-234.

Descripción de la Invención

Problemas a resolver por la Invención

Por lo tanto es un objetivo de la presente invención proporcionar un método de determinación de forma rápida, conveniente y con exactitud de la enterocolitis aguda basado en un índice cuantitativo y objetivo, y un reactivo para la determinación de la enterocolitis aguda.

Medios de resolver los problemas

Los presentes inventores han dirigido intensos estudios en un intento de resolver el problema anteriormente mencionado, y han desarrollado un inmunoensayo con enzima tipo sándwich usando un anticuerpo monoclonal anti- l-FABP humano para permitir la detección muy precisa y sensible de l-FABP en sangre. Los presentes inventores midieron la concentración de l-FABP en sangre en modelo experimental en rata de enterocolitis aguda en el sistema de ensayo de l-FABP, y encontraron que la concentración en sangre aumentaba significativamente, en base a lo cual se aclaró que la concentración de l-FABP en sangre de pacientes de enterocolitis aguda es también alta en casos clínicos humanos.

Además, los presentes inventores han aclarado que la concentración de l-FABP en sangre de pacientes que tienen dolor abdominal o diarrea no diagnosticados como enterocolitis aguda no muestran diferencia en la concentración de l-FABP en sangre de los sujetos sanos. Además, han aclarado que la concentración de l-FABP en sangre muestra un índice positivo verdadero mayor que CRP y el recuento de glóbulos blancos, los cuales son marcadores diagnósticos existentes de la inflamación en pacientes de enterocolitis aguda. Dado estos resultados y la especificidad a órgano ya que l-FABP está presente solamente sobre el epitelio mucoso del intestino delgado, los presentes inventores han encontrado que la enterocolitis aguda se puede determinar de forma rápida, conveniente y con exactitud midiendo la concentración de l-FABP en sangre, lo cual dio como resultado la finalización de la presente invención.

Por consiguiente, la presente... [Seguir leyendo]

1. Un método de determinación de enterocolitis aguda, que comprende la detección de la proteína intestinal de unión a ácidos grasos (l-FABP, del Inglés Intestinal Fatty Acid Binding Protein) en la sangre recogida de un mamífero.

2. El método de la reivindicación 1, el cual usa un anticuerpo monoclonal anti-l-FABP.

3. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde el mamífero es un humano.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la l-FABP en la sangre se detecta mediante un método inmunoquímico.

5. El método de la reivindicación 4, en donde el método inmunoquímico es un método inmunoquímico con enzima, un método de aglutinación en látex o un método de inmunocromatografía.

6. El método de la reivindicación 5, en donde el método inmunoquímico es un método inmunoquímico con enzima.

7. El método de la reivindicación 6, en donde el método inmunoquímico con enzima es un inmunoensayo con enzima tipo sándwich.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la enterocolitis aguda es enterocolitis aguda infecciosa o enterocolitis aguda debida a una influencia de un agente farmacéutico.

9. El uso de un anticuerpo anti-l-FABP para determinar la enterocolitis aguda en un método de acuerdo con la reivindicación 1.

1. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde un anticuerpo anti-l-FABP en fase sólida y un anticuerpo anti-l-FABP marcado con enzima se usan en combinación.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 ó 1, en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-l-FABP

humano.

12. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

13. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en donde la enterocolitis aguda es enterocolitis aguda infecciosa o enterocolitis aguda debida a una influencia de un agente farmacéutico.