Composición terapéutica con una neurotoxina botulínica.

Una preparación de neurotoxina botulínica que comprende al menos una neurotoxina botulínica seleccionada entre Clostridium botulinum del tipo A,

B, C1, D, E, F y G, donde dicha al menos una neurotoxina está libre de las proteínas complejantes que forman complejos con neurotoxinas botulínicas de forma natural, y un agente estabilizante no proteico para neurotoxina botulínica que conserva la actividad biológica de la neurotoxina botulínica en una solución acuosa, donde dicho agente estabilizante es ácido hialurónico y donde dicha preparación está libre de agentes estabilizantes proteicos derivados de mamíferos seleccionados entre albúmina y gelatina

DESCRIPCIÓN

Composición terapéutica con una neurotoxina botulínica.

La presente invención corresponde a composiciones farmacéuticas que comprenden una neurotoxina botulínica de 5 Clostridium botulinum, donde la neurotoxina está libre de las proteínas complejantes presentes de forma natural en el complejo de la neurotoxina botulínica, o una neurotoxina botulínica modificada químicamente o modificada por manipulación genética, donde dicha toxina botulínica modificada está libre de las proteínas complejantes que forman complejos con las neurotoxinas botulínicas de forma natural. Además, las composiciones farmacéuticas de la presente invención tienen buena estabilidad y están formuladas de manera ventajosa libres de seroalbúmina 10 humana.

La albúmina de origen humano se ha utilizado como vehículo principal y estabilizador de los principios activos proteicos presentes en composiciones farmacéuticas. Se ha demostrado que la albúmina estabiliza los principios activos proteicos en composiciones farmacéuticas por medio de la reducción de la adhesión y de la 15 desnaturalización del principio activo. Además, la albúmina inyectada a un paciente humano no es inmunogénica.

No obstante, el uso de albúmina en una composición farmacéutica plantea importantes inconvenientes. Se ha atribuido a la albúmina la transmisión de ciertos virus estables, priones u otros compuestos infecciosos o patógenos, p. ej., la encefalopatía espongiforme humana transmisible (TSE) . Por este motivo han aumentado los controles 20 regulatorios sobre las composiciones farmacéuticas que contienen seroalbúmina humana. En forma similar, en algunas composiciones farmacéuticas que contienen principios activos proteicos se ha usado gelatina como reemplazante de la albúmina. Por tratarse de una proteína derivada de mamífero, la gelatina plantea el mismo riesgo de transmisión de patógenos. En consecuencia, existe la necesidad de un sustituto de los estabilizantes proteicos derivados de mamífero. 25

Los complejos de toxina botulínica están compuestos por una mezcla de proteínas clostridiales. Son hemaglutininas con diferentes masas moleculares, una proteína hemoaglutinante (Mr de aproximadamente 120.000) y una neurotoxina (Mr de aproximadamente 150.000) . Forman un complejo estable en ácido que es responsable de la toxicidad oral en los casos de intoxicación alimentaria. A diferencia de la neurotoxina pura, el complejo resiste el 30 medio agresivo del tracto gastrointestinal y hace posible la absorción enteral de la neurotoxina, que llega a las células diana a través del torrente sanguíneo o del sistema linfático, donde induce el bloqueo de la liberación de neurotransmisor. Esta acción se sigue de parálisis muscular y del cese de diversas funciones del sistema autónomo. Los pacientes intoxicados mueren por insuficiencia muscular respiratoria. Como la neurotoxina pura se degrada en el tracto gastrointestinal, por lo que no tiene lugar su absorción enteral, no resulta tóxica al ser ingerida. Con la 35 administración parenteral, los efectos terapéuticos de la neurotoxina y del complejo no difieren entre sí, ya que en los tejidos el complejo se descompone en sus constituyentes y únicamente la toxina resulta captada por las células diana.

Actualmente hay dos productos que comprenden neurotoxina botulínica tipo A y que están aprobados para el 40 tratamiento del blefaroespasmo, el espasmo hemifacial y la tortícolis espasmódica: BOTOX® y DYSPORT®. La neurotoxina botulínica, en el estado actual de la técnica, se inyecta directamente en los músculos distónicos o espásticos, en los que la neurotoxina se libera del complejo a pH fisiológico y produce el efecto farmacológico buscado. Se encuentran en curso ensayos clínicos para tratar otros trastornos del sistema nervioso (p. ej., espasticidades, migraña, lumbalgia, trastornos de la columna cervical, hipersialorrea) . El complejo de toxina 45 botulínica tipo A (Mr 900.000) está aprobado para la terapia de diversas distonías. Los productos aprobados se emplean también para indicaciones cosméticas, tales como hiperhidrosis y arrugas pronunciadas. Los otros complejos de toxinas del Clostridium botulinum (de los tipos B, C1, D, E, F, G) , así como toxinas que se derivan de estas toxinas del Clostridium botulinum por modificación química o manipulación genética también son adecuados para estas terapias. 50

BOTOX® y DYSPORT® se presentan para uso del médico en forma liofilizada para reconstitución inmediatamente antes de su uso. Lamentablemente, la dosis requerida para cada paciente y para cada indicación no es uniforme. Por esta razón, a menudo se congela o se refrigera la composición ya reconstituida para su uso posterior. Se ha evaluado la estabilidad de la potencia de estas composiciones reconstituidas conservadas. Se observó que 55 BOTOX® una vez reconstituido pierde por lo menos el 44% de su potencia cuando se lo guarda refrigerado durante 12 horas. Asimismo, cuando la composición reconstituida se congela a -70º C, pierde el 70% de su potencia. Gartlan, M.G., and Hoffman, H.T. Cr y stalline preparation of botulinum toxin type A (Botox) : Degradation in potency with storage, Otolar y ngology - Head and Neck Surger y 102 (2) : 135-140 (1992) . Esta inestabilidad tiene como resultado una significativa variación de la dosis y el desperdicio de producto. Por lo tanto, un objeto de la presente invención 60 es el desarrollo y la producción de una formulación líquida estable y liofilizada de toxina botulínica que tiene mejores características de manipulación que las formulaciones existentes.

Se ha desarrollado una nueva composición farmacéutica que comprende neurotoxina botulínica (tipo A, B, C1, D, E, F o G) que está libre de hemaglutininas y otras proteínas exógenas. De este modo se reduce la carga proteica total 65 de una formulación farmacéutica sin reducir la cantidad de toxina. Hemos encontrado en estudios de antigenicidad que la neurotoxina pura de todos los tipos, a diferencia de los productos comerciales del tipo A y de los complejos de los tipos B a G, no induce formación de anticuerpos, o lo hace en mínimo grado. Con el uso terapéutico de este producto farmacéutico recién desarrollado (neurotoxina pura de los tipos A, B, C1, D, E, F o G) , no hay fracaso de la terapia debido a anticuerpos, incluso tras la administración repetida.

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No obstante, como se señaló anteriormente, surgen problemas para la formulación. Como compuesto proteico activo, la toxina botulínica es muy lábil. Además, los complejos de toxina botulínica son extremadamente susceptibles a la desnaturalización por desnaturalización superficial, calor y condiciones alcalinas.

Como sucede generalmente con las enzimas, las actividades biológicas de las toxinas botulínicas (que son 10 peptidasas intracelulares) dependen, por lo menos en parte, de su conformación tridimensional. Por lo tanto, las toxinas botulínicas pueden ser detoxificadas por calor, diversos compuestos químicos, estiramiento de la superficie y secado de la superficie. Además, se conoce que las concentraciones de toxina diluida que se usan en las indicaciones aprobadas resultan en una rápida detoxificación de la toxina, a menos que haya presente un agente estabilizante adecuado. Asimismo, la estabilidad de la toxina es un importante factor para el almacenamiento. Por 15 este motivo resultan esenciales los agentes estabilizantes. Hasta el presente, la estabilidad se ha obtenido por medio de la formulación con las proteínas albúmina y gelatina derivadas de mamífero. Como se señaló anteriormente, las proteínas derivadas de mamífero plantean el riesgo de que ciertos virus estables, priones u otros compuestos infecciosos o patógenos provenientes de los donantes puedan contaminar la toxina.

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Además, las condiciones que existen durante la liofilización, incluyendo pH, temperatura, dilución y presiones de vacío, provocan la detoxificación de la toxina. Hasta ahora, para estabilizar la toxina botulínica, se han venido utilizando con cierto éxito proteínas derivadas de mamífero, como gelatina y seroalbúmina, que representan los estabilizantes estándar.

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Por ejemplo, la toxina botulínica comercial que contiene la composición farmacéutica BOTOX® (disponible en Allergan, Inc., Irvine, California) consiste en un complejo purificado de toxina botulínica tipo A, albúmina y cloruro de sodio envasado en forma estéril y secado al vacío. Cada vial de BOTOX® contiene aproximadamente 100 unidades (U) de complejo de toxina de Clostridium botulinum tipo A, 0, 5 miligramos de seroalbúmina humana y 0, 9 miligramos de cloruro de sodio en una presentación estéril, secada al vacío y sin conservante.... [Seguir leyendo]

1. Una preparación de neurotoxina botulínica que comprende al menos una neurotoxina botulínica seleccionada entre Clostridium botulinum del tipo A, B, C1, D, E, F y G, donde dicha al menos una neurotoxina está libre de las proteínas complejantes que forman complejos con neurotoxinas botulínicas de forma natural, y un agente estabilizante no proteico para neurotoxina botulínica que conserva la actividad biológica de la neurotoxina botulínica 5 en una solución acuosa, donde dicho agente estabilizante es ácido hialurónico y donde dicha preparación está libre de agentes estabilizantes proteicos derivados de mamíferos seleccionados entre albúmina y gelatina.

2. La preparación de neurotoxina botulínica según la reivindicación 1, donde dicha al menos una neurotoxina botulínica está modificada químicamente o por manipulación genética. 10

3. La preparación de neurotoxina botulínica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprende además un amortiguador del pH.

4. La preparación de neurotoxina botulínica según la reivindicación 3, donde el amortiguador del pH es acetato de 15 sodio.

5. La preparación de neurotoxina botulínica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en forma de una composición farmacéutica.

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6. La composición farmacéutica según la reivindicación 5, que comprende además un crioprotector.

7. La composición farmacéutica según la reivindicación 6, donde el crioprotector es un polialcohol.

8. La composición farmacéutica según la reivindicación 7, donde el polialcohol se selecciona entre uno o más de 25 inositol, manitol y sorbitol.

9. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8 que está en forma liofilizada.

10. Un método para estabilizar al menos una neurotoxina botulínica seleccionada entre Clostridium botulinum del 30 tipo A, B, C1, D, E, F y G, donde dicha al menos una neurotoxina está libre de las proteínas complejantes que forman complejos con neurotoxinas botulínicas de forma natural, que comprende entremezclar dicha al menos una neurotoxina con un agente estabilizante no proteico para neurotoxina botulínica en una solución acuosa en una cantidad efectiva para conservar la actividad biológica de la neurotoxina, donde dicho agente estabilizante es ácido hialurónico y donde dicha preparación está libre de agentes estabilizantes proteicos derivados de mamíferos 35 seleccionados entre albúmina y gelatina.

11. El método según la reivindicación 10, donde dicha al menos una neurotoxina botulínica está modificada químicamente o por manipulación genética.

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12. El método según la reivindicación 10 o la reivindicación 11, donde la solución acuosa comprende además un amortiguador del pH.

13. El método según la reivindicación 12, donde el amortiguador del pH es acetato de sodio.

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14. El método según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, donde la solución acuosa comprende además un crioprotector.

15. El método según la reivindicación 14, donde la solución acuosa está liofilizada.

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16. Una preparación de neurotoxina botulínica tal como se define en cualquier de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en el tratamiento de una condición seleccionada entre blefaroespasmo, espasmo hemifacial, tortícolis espasmódica, espasticidades, migraña, lumbalgia, trastornos de la columna cervical, estrabismo, hiperhidrosis, hipersialorrea y distonías.

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17. Un método para tratar una condición cosmética seleccionada entre arrugas y arrugas pronunciadas que comprende administrar una preparación de neurotoxina botulínica tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.