Anticuerpos biespecíficos agonistas del receptor de muerte.

Un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión al antígeno específico para DR5 y un segundo sitio de unión al antígeno específico para FAP.

Anticuerpos biespecíficos agonistas del receptor de muerte La presente invención se refiere a anticuerpos biespecíficos que comprenden un primer sitio de unión al antígeno específico para un receptor de muerte y un segundo sitio de unión al antígeno específico para un segundo antígeno, los métodos para su producción, composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos, y usos de los mismos.

Se ha probado que los anticuerpos monoclonales son agentes terapéuticos potentes en el tratamiento del cáncer debido a la dirección selectiva contra antígenos que se expresan diferencialmente en las células cancerosas. Las estrategias terapéuticas de la mayoría de los anticuerpos monoclonales desarrollados actualmente incluyen la dirección hacia antígenos asociados a tumores para modificar la biología celular tumoral, inhibición de los receptores de factores de crecimiento, inhibición de la angiogénesis, inducción de apoptosis y citotoxicidad por medio de citotoxicidad celular por fijación del complemento, o dependiente de anticuerpo. Algunos anticuerpos se dirigen a los receptores del factor de crecimiento que son cruciales para la supervivencia de las células cancerosas, tales como el trastuzumab (Herceptin®) y cetuximab (Erbitux®) . La dirección de anticuerpos monoclonales agonistas hacia los receptores de muerte TRAIL de las células cancerosas representa una nueva generación de terapia con anticuerpos monoclonales, ya que son capaces de inducir directamente apoptosis en las células diana. El uso de un anticuerpo monoclonal en vez de TRAIL contra los receptores de muerte puede ser ventajoso: TRAIL se dirige a múltiples receptores diana que incluyen receptores de muerte y receptores señuelo, por lo tanto hay un problema con la selectividad. Además, TRAIL tiene una semivida en la sangre mucho más corta comparada con la de los anticuerpos monoclonales, un factor que afecta la dosis y los parámetros de frecuencia de la dosificación. La semivida en la sangre tan corta de TRAIL necesitaría dosis grandes y frecuentes en comparación con los anticuerpos monoclonales. Además es muy difícil y tedioso de producir un TRAIL recombinante.

Michaelson J.S. y col. (mAbs, Vol 1, Punto 2, p: 128 - 141; Marzo/Abril 2009) describen anticuerpos biespecíficos similares a IgG modificados dirigidos contra dos miembros de la familia del receptor TNF, a saber el TRAIL-R2 (Ligando del receptor que induce apoptosis relacionado con el TNF-2) y LTβR (Receptor beta-linfotoxina) .

Herrmann T. y col. (Cancer Res 2008; 68: (4) ; p: 1221 - 1227) describen moléculas Fab combinadas químicamente monovalentes biespecíficas dirigidas contra el receptor celular de superficie CD95/Fas/Apo-1 y tres antígenos de células de glioblastoma: NG2, EGFR y CD40.

El documento WO2005/092927 A1 desvela un anticuerpo biespecífico que se dirige contra TRAIL-R2 (DR5) y LTβR un miembro de la familia del TNF. El documento US 5.965.710 desvela anticuerpos monoclonales que se dirigen al epítopo PR1A3 del antígeno carcino-embrionario (CEA) .

La presente invención se refiere a anticuerpos que combinan un sitio de unión al antígeno que se dirige al receptor de muerte con un segundo sitio de unión al antígeno que se dirige a un segundo antígeno. Por lo que los receptores de muerte se entrecruzan y se induce apoptosis de la célula diana. La ventaja de estos anticuerpos biespecíficos agonistas del receptor de muerte sobre los anticuerpos convencionales que se dirigen al receptor de muerte es la especificidad de inducción de apoptosis solamente en el sitio donde se expresa el segundo antígeno.

En un primer objetivo, la presente invención se refiere a un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión al antígeno específico para DR5 y un segundo sitio de unión al antígeno específico para FAP.

En una realización preferida del anticuerpo biespecífico, el receptor de muerte es el receptor de muerte polipéptido 5 (DR5) , preferentemente el polipéptido DR5 humano (Sec. Id. Nº 2) .

La presente divulgación se refiere también a un anticuerpo biespecífico, en el que el segundo antígeno se selecciona de entre, polipéptido antígeno carcinoembrionario (CEA) , proteína CRIPTO, polipéptido homólogo de rotonda mágica 4 (ROBO4) , polipéptido proteoglicano de sulfato de condroitina asociado al melanoma (MCSP) , polipéptido tenascina C y polipéptido de la proteína de activación del fibroblasto (FAP) , preferentemente el polipéptido CEA humano (Sec. Id. Nº 4) , polipéptido CRIPTO humano (Sec. Id. Nº 5) , polipéptido ROBO4 humano (Sec. Id. Nº 6) , polipéptido MCSP humano (Sec. Id. Nº 7) , polipéptido tenascina C humano (Sec. Id. Nº 8) y polipéptido FAP humano (Sec. Id. Nº 9) .

En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico, el anticuerpo biespecífico es una molécula dimérica que comprende un primer anticuerpo que comprende el primer sitio de unión al antígeno y un segundo anticuerpo que comprende un segundo sitio de unión al antígeno.

En una realización preferida del anticuerpo biespecífico dimérico de la presente invención, el primer y segundo anticuerpos comprenden una parte Fc de una cadena pesada de anticuerpo, en el que la parte Fc del primer anticuerpo comprende un primer módulo de dimerización y la parte Fc del segundo anticuerpo comprende un segundo módulo de dimerización que permiten la heterodimerización de los dos anticuerpos.

En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico dimérico, el primer módulo de dimerización comprende protuberancias y el segundo módulo de dimerización comprende huecos según la estrategia botón en ojal (véase Carter P.; Ridgway J.B.B.; Presta L.G.: Immunotechnology, Volumen 2, Número 1, Febrero 1996, pp. 73-73 (1) ) .

En una realización más del anticuerpo biespecífico dimérico, el primer anticuerpo es una molécula de inmunoglobulina (Ig) que comprende una cadena ligera y una cadena pesada y el segundo anticuerpo se selecciona de entre el grupo que consiste en scFv, scFab, Fab o Fv.

En una realización preferida más el anticuerpo biespecífico comprende una parte Fc modificada que tiene una afinidad de unión reducida para los receptores Fc comparada con la parte Fc de tipo silvestre, por ejemplo una modificación LALA.

En una realización preferida aún más del anticuerpo biespecífico dimérico, la molécula de Ig comprende el primer sitio de unión al antígeno específico para DR5 y el segundo anticuerpo comprende el segundo sitio de unión al antígeno específico para FAP.

En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico, la molécula de Ig comprende el segundo sitio de unión al antígeno específico para y el segundo anticuerpo comprende el sitio de unión al antígeno específico para DR5.

En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico dimérico, el segundo anticuerpo se fusiona en el extremo N o C de la cadena pesada de la molécula de Ig.

En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico dimérico, el segundo anticuerpo se fusiona en el extremo N o C de la cadena ligera de la molécula de Ig.

En otra realización preferida del anticuerpo biespecífico dimérico, la molécula de Ig es una IgG. En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico dimérico, la segunda molécula se fusiona a la molécula de Ig por un péptido enlazador, preferentemente un péptido enlazador que tiene una longitud de aproximadamente 10 – 30 aminoácidos.

En una realización preferida más del anticuerpo biespecífico dimérico, el segundo anticuerpo comprende restos adicionales de cisteína para formar enlaces disulfuro.

Los anticuerpos biespecíficos de acuerdo con la invención son al menos bivalentes y pueden ser trivalentes o multivalentes, por ejemplo, tetravalentes o hexavalentes.

En un segundo objetivo, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo biespecífico de la presente invención.

En un tercer objetivo, la presente invención se refiere a un anticuerpo biespecífico de la presente invención para el tratamiento del cáncer.

En más objetivos, la presente divulgación se refiere a una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una cadena pesada de un anticuerpo biespecífico de la presente invención, un vector de expresión que comprende dicha secuencia de ácido nucleico y una célula huésped procariota o eucariota que comprende dicho vector.

Descripción detallada de la invención El término “polipéptido” se utiliza en el presente documento para referirse a secuencias nativas de aminoácidos y variantes... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión al antígeno específico para DR5 y un segundo sitio de unión al antígeno específico para FAP. 5

2. El anticuerpo biespecífico de la reivindicación 1, donde el anticuerpo biespecífico es una molécula dimérica que comprende un primer anticuerpo que comprende el primer sitio de unión al antígeno específico para DR5 y un segundo anticuerpo que comprende el segundo sitio de unión al antígeno específico para FAP.

3. El anticuerpos biespecífico de la reivindicación 2, en donde el primer y segundo anticuerpos comprenden una parte Fc de cadena pesada de anticuerpo, donde la parte Fc del primer anticuerpo comprende un primer módulo de dimerización y la parte Fc del segundo anticuerpo comprende un segundo módulo de dimerización permitiendo una heterodimerización de los dos anticuerpos.

4. El anticuerpo biespecífico de la reivindicación 3, en donde el primer módulo de dimerización comprende protuberancias y el segundo módulo de dimerización comprende huecos de acuerdo con una estrategia botón en ojal.

El anticuerpo biespecífico de la reivindicación 2, en donde el primer anticuerpo es una molécula de 20 inmunoglobulina (Ig) que comprende una cadena ligera y una cadena pesada y el segundo anticuerpo se selecciona de entre el grupo que consiste en scFv, scFab, Fab o Fv.

6. El anticuerpo biespecífico de la reivindicación 5 en donde el segundo anticuerpo se fusiona en el extremo N o C

de la cadena pesada de la molécula de Ig. 25

7. El anticuerpo biespecífico de la reivindicación 5, en donde el segundo anticuerpo se fusiona en el extremo N o C de la cadena ligera de la molécula de Ig.

8. El anticuerpo biespecífico de cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en donde la molécula de Ig es una IgG. 30

9. El anticuerpo biespecífico de cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en donde la segunda molécula se fusiona a la molécula de Ig por un péptido enlazador, preferentemente un péptido enlazador de aproximadamente 10 – 30 aminoácidos.

10. El anticuerpo biespecífico de cualquiera de las reivindicaciones 5-9, en donde la segunda moléculas comprende restos de cisteína adicionales para formar enlaces disulfuro.

11. El anticuerpo biespecífico de cualquiera de las reivindicaciones 5-10, en donde la molécula de Ig comprende una variante de Fc que tiene una afinidad reducida para los receptores Fc en comparación con la región Fc de tipo 40 silvestre.

12. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo biespecífico de las reivindicaciones 1 a 11.

13. El anticuerpo biespecífico de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso en el tratamiento del cáncer. 45