Acetaminofeno glucuronidado como un marcador de trastornos hepáticos.

Un método para diagnosticar la esteatohepatitis no alcohólica (NASH) o fibrosis hepática en un ser humano,

que comprende:

(a) determinar una cantidad de acetaminofeno (APAP)-glucurónido en una muestra de plasma y/o una muestra de orina obtenidas a partir de un sujeto humano después de que al sujeto humano se le haya administrado acetaminofeno (APAP), donde el sujeto humano está en riesgo de esteatohepatitis no alcohólica (NASH) o fibrosis hepática;

(b) comparar la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas respecto a un control; e

(c) identificar al sujeto humano como uno que padece esteatohepatitis no alcohólica (NASH) o fibrosis hepática si la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas está elevada respecto al control.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/058913.

Solicitante: THE ARIZONA BOARD OF REGENTS, ON BEHALF OF THE UNIVERSITY OF ARIZONA.

Inventor/es: CHERRINGTON,NATHAN.

Fecha de Publicación: 21 de Mayo de 2014.

Clasificación Internacional de Patentes:

G01N33/94 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen narcóticos.

PDF original: ES-2489016_T3.pdf

Fragmento de la descripción:

Acetaminofeno glucuronidado como un marcador de trastornos hepáticos Antecedentes de la invención

El acetaminofeno (APAP, por sus siglas en inglés) es el analgésico no oploide utilizado más comúnmente y el agente analgésico y antipirético de referencia respecto al cual se comparan otros productos similares. El metabolismo de APAP, cuya inmensa mayoría tiene lugar en el hígado, está bien definido (Figura 1). Al menos la mitad de una dosis administrada está conjugada con ácido glucurónico (GLUC) y un tercio con sulfato (SULF). La ruta enzimática de la oxidasa de función mixta dependiente de CYP-45, principalmente a través de CYP2E1, metaboliza aproximadamente un 5-9%. Esto da como resultado la formación de un metabolito intermedio reactivo tóxico (NAPQI), que se conjuga posteriormente con glutatión para formar los conjugados con ácido mercaptúrico y cisteína atóxicos. Menos de un 5% de una dosis recomendada de acetaminofeno se excreta sin modificar por los riñones. El acetaminofeno experimenta una eliminación de primer orden desde el cuerpo y tiene una semivida plasmática corta (2.-2.4 horas).

El APAP proporciona un ejemplo excelente del papel esencial que juegan los transportadores de salida en la excreción de metabolitos de fármacos del hígado. Todos los metabolitos de APAP requieren un transporte de salida con el fin de ser excretados desde el hígado y se puede detectar cada uno tanto en la bilis como en la orina. Los estudios de disposición in vivo y experimentos de transporte funcional in vitro indican que cada uno de los transportadores ABC ABCC2, ABCC3, ABCC4 y ABCG2 tiene la capacidad de transportar diversos fármacos conjugados y no conjugados, incluidos los metabolitos de APAP. ABCC2 y ABCG2 se ubican en la membrana (apical) canalicular de los hepatocitos a partir de la cual excretan sus sustratos en los canalículos biliares. En consecuencia, en un hígado sano, la excreción biliar de los conjugados con SULF, GLUC y GSFI de APA está mediada predominantemente por ABCC2, aunque ABCG2 también parece contribuir a la excreción de los conjugados APAP-SULF. ABCC3 y ABCC4 se expresan en la membrana (basolateral) sinusoidal de los hepatocitos y colangiocitos a partir de la cual expulsan sus sustratos en la sangre. La excreción sinusoidal del metabolito APA- GLUC a partir de los hepatocitos está mediada predominantemente por ABCC3, mientras que ABCC4 parece mediar la excreción de los metabolitos APAP-SULF. Recientes estudios indican que ABCC3 y ABCC4 tienen la misma función en la salida de APAP-SULF.

Un estudio reciente (Drug. Metabolism and Disposition, 35:197-1978 (27)) ha mostrado que en un modelo en ratas de esteatohepatitis no alcohólica (NASPI, por sus siglas en inglés), generada alimentando ratas con una dieta deficiente en metionina y colina (MCD, por sus siglas en inglés) durante 8 semanas, los transportadores de salida hepáticos ABCC3 y ABCC4 incrementaron la expresión proteica. La administración a estas ratas MCD de grandes dosis de APAP (1 mmol/kg) (equivalente a una dosis de 1 gramos en un ser humano de 15 libras, o una dosis de 17 gramos en un ser humano de 25 libras) dio como resultado un cambio de la excreción biliar a la plasmática de APAP-GLUC respecto al control. Sin embargo, dado que no existen seres humanos deficientes en metionina y colina, y las grandes dosificaciones de APAP administradas en el modelo en ratas, se ha especulado que la rata MCD no es un buen modelo para la NASH humana o para estudios del metabolismo hepático de fármacos en seres humanos. Es algo generalmente aceptado que ningún modelo en animales refleja con exactitud la NASH humana. Numerosas diferencias bioquímicas hacen que cualquier comparación directa esté potencialmente llena de inconvenientes en forma de artefactos. Por ejemplo, el modelo MCD carece del componente de resistencia a la insulina que, a menudo, es un componente de la NASH (Rinella ME y Green RM, J Hepatol. de enero 24; 4(1 ):47-51). Además, mientras que la esteatosis en seres humanos ocurre en una dieta occidental típica alta en grasas que da como resultado un incremento del flujo neto de lípidos a través del hígado, el modelo MCD provoca esteatosis y esteatohepatitis mediante una disfunción del metabolismo de lípidos. Por lo tanto, la comparación directa entre el modelo MCD y seres humanos no es apropiada. Esto supone una preocupación especial para la dieta MCD, ya que los efectos de esta dieta antinatural frente a los efectos del daño hepático en sus variables no pueden ponerse de manifiesto.

El-Azab G et al., International Journal ofClinical Pharmacology and Therapeutics, vol. 34, n.° 7, 1996, páginas 299- 33, describen un estudio en el cual el nivel plasmático de acetaminofeno y sus metabolitos con glucurónido y sulfato se determinó en pacientes con un hígado cirrótico que padecían infección por esquistosoma y se comparó con el correspondiente en grupos de sujetos sanos. La concentración plasmática de acetaminofeno-glucurónido disminuyó de manera importante en los pacientes con un hígado cirrótico respecto al control.

En Forrest J A H et al., European Journal of Clinical Pharmacology, Springer Verlag, Al., vol. 15, n.° 6, 1 de noviembre de 1979 (1-11-1979), páginas 427-431, se midieron las concentraciones plasmáticas y la excreción urinaria de paracetamol y sus conjugados con glucurónido, sulfato, cisteína y ácido mercaptúrico en ocho sujetos normales, ocho pacientes con una enfermedad hepática leve y siete pacientes con enfermedad hepática tras una dosis oral de 1.5 g de paracetamol. Las proporciones promedio de concentraciones plasmáticas de paracetamol inalterado respecto al paracetamol-glucurónido y -sulfato fueron significativamente mayores en pacientes con

enfermedad hepática grave que en los sujetos normales.

Gmyrek D et al., TSCHXSESUNDH.WE 1971, vol. 26, n.° 11, 1971, páginas 53-58, describe una investigación sobre si es utillzable un ensayo de carga de paracetamol (NAPAP) como un ensayo de la función hepática en la hepatitis aguda. Se observó que la proporción de NAPAP libre respecto al NAPAP-glucurónldo se incrementó en las muestras de orina procedentes de pacientes con hepatitis. La proporción se redujo tras el tratamiento de la enfermedad en el hospital.

Corcoran G B et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, vol. 241, n.° 3, 1987, páginas 921-927 describe el uso de acetaminofeno como un fármaco prototipo para examinar la Influencia de la obesidad en el potencial nefrotóxico y hepatotóxico de los fármacos activados metabólicamente. El análisis se llevó a cabo en un modelo en ratas obesas. La conclusión es que las ratas obesas forman más conjugados de tipo glucurónido que los controles.

En Shinoda Shigeo et al., Biológica! & Pharmaceutical Bulletin, vol. 3, n.° 1, enero de 27 (1-27), páginas 157- 161, se estudiaron la farmacocinética y la farmacodinámica de APAP en voluntarios sanos y pacientes con dolor crónico. Se midieron las concentraciones plasmáticas de APAP y metabolitos de APAP en los voluntarios y se midieron las concentraciones plasmáticas de APAP y las puntuaciones del dolor en los pacientes con dolor crónico. Se sugirió que los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos medidos se podrían utilizar para determinar un régimen posológico de APAP eficaz para pacientes con dolor crónico.

Compendio de la invención

En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para diagnosticar esteatohepatitis no alcohólica (NAHS) o flbrosis hepática en un ser humano, que comprende:

(b) comparar la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas respecto a un control; e

(c) Identificar al sujeto humano como uno que padece esteatohepatitis no alcohólica (NASH) o fibrosis hepática si la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas está elevada respecto al control.

En un segundo aspecto, la presente Invención proporciona un método para Identificar a un sujeto humano en riesgo de una reacción farmacológica adversa, que comprende:

Reivindicaciones:

1. Un método para diagnosticar la esteatohepatitis no alcohólica (NASH) o fibrosis hepática en un ser humano, que comprende:

(b) comparar la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas respecto a un control; e

(c) identificar al sujeto humano como uno que padece esteatohepatitis no alcohólica (NASH) o fibrosis hepática si la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas está elevada respecto al control.

2. El método de la reivindicación 1, donde el sujeto humano en riesgo de NASH padece una o más de las siguientes enfermedades: enfermedad del hígado graso no alcohólica; síndrome metabólico, obesidad, dislipidemia, resistencia a la insulina y diabetes.

3. El método de la reivindicación 1, donde el sujeto humano en riesgo de fibrosis hepática padece, o ha padecido previamente, una o más de las afecciones seleccionadas a partir del grupo constituido por la deficiencia de a-i- antitripsina, enfermedad de Wilson, fructosemia, galactosemia, enfermedades de almacenamiento de glucógeno de tipo III, IV, VI, IX y X, hemocromatosis, enfermedad de Gaucher, síndrome de Zellweger, tirosinemia, infección bacteriana, infección vírica, parasitosis, síndrome de Budd-Chiari, alcoholismo, drogadicción, insuficiencia cardiaca, enfermedad venooclusiva hepática y flebotrombosis portal.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la cantidad de APAP-glucurónido se mide en una muestra de plasma, y donde se realiza una medida entre 1 minuto y 18 minutos tras la administración de APAP, o donde la cantidad de APAP-glucurónido se mide en una muestra de orina, y donde se realiza una medida entre 12 minutos y 48 minutos tras la administración de APAP.

5. Un método para identificar a un sujeto humano en riesgo de una reacción farmacológica adversa, que comprende:

(a) determinar una cantidad de acetaminofeno (APAP)-glucurónido en una muestra de plasma y/o una muestra de orina obtenidas a partir de un sujeto humano después de que al sujeto humano se le haya administrado acetaminofeno (APAP), donde el sujeto humano necesita el tratamiento con un fármaco terapéutico seleccionado a partir del grupo constituido por doxorrubicina, morfina, cisplatino, ectopósido, metotrexato, fármacos conjugados glucuronidados, fármacos conjugados con glutatión y fármacos conjugados con sulfato;

(b) comparar la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas respecto a un control; e

(c) identificar al sujeto humano como uno en riesgo de una reacción farmacológica adversa si la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas está elevada respecto al control.

6. Un método para determinar una dosificación apropiada de un fármaco terapéutico seleccionado a partir del grupo constituido por doxorrubicina, morfina, cisplatino, ectopósido, metotrexato, fármacos conjugados glucuronidados, fármacos conjugados con glutatión y fármacos conjugados con sulfato para un sujeto humano, que comprende:

(b) comparar la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas respecto a un control; y

(c) determinar que el sujeto humano debería recibir una dosificación no habitual del fármaco si la cantidad de APAP-glucurónido en la muestra de plasma o en la muestra de orina o en ambas está elevada respecto al

control.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la cantidad de APAP-glucurónldo se mide en una muestra de plasma, y donde se realiza una medida entre 1 minuto y 18 minutos tras la administración de APAP.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la cantidad de APAP-glucurónido se mide en

una muestra de orina, y donde se realiza una medida entre 12 minutos y 48 minutos tras la administración de APAP.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde se administran entre 25 mg y 1 mg de APAP al sujeto humano.

1. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde los pasos de determinación, comparación e

identificación están automatizados.

11. Un medio de almacenamiento legible por una máquina que comprende un conjunto de instrucciones para hacer que un dispositivo que mide un metabolito lleve a cabo los pasos de determinación, comparación e identificación de cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

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